--- title: "\"ГОСТ Р 51600-2000. Государственный стандарт Российской Федерации. Молоко. Методы определения наличия антибиотиков\"" number: "ГОСТ Р 51600-2000" issuer: "Государственный комитет Российской Федерации по стандартизации и метрологии" status: утратил силу canonical: "https://bukva.ai/docs/gost-r-51600-2000-gosstandart-rossii" --- ## "ГОСТ Р 51600-2000. Государственный стандарт Российской Федерации. Молоко. Методы определения наличия антибиотиков" # "ГОСТ Р 51600-2000. Государственный стандарт Российской Федерации. Молоко. Методы определения наличия антибиотиков" (принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 26.04.2000 N 127-ст) (ред. от 23.01.2008) > [!WARNING] > Документ последовательно отменен Приказами Ростехрегулирования от 26.02.2010 N 24-ст, N 25-ст. Утратил силу с 01.01.2011. > Взамен введены в действие [ГОСТ Р 53774-2010](https://bukva.ai/docs/gost-r-53774-2010) и [ГОСТ Р 51600-2010](https://bukva.ai/docs/gost-r-51600-2010). > Документ утратил силу с 01.01.2011 в части [разд. 5](#p100470) и [6](#p100302) (рецепторные методы) в связи с изданием Приказа Ростехрегулирования от 26.02.2010 N 24-ст и в части [разд. 1](#p100225), [2](#p100019), [3](#p100032) и [4](#p100135) (микробиологические методы) в связи с изданием Приказа Ростехрегулирования от 26.02.2010 N 25-ст. Взамен введены в действие [ГОСТ Р 53774-2010](https://bukva.ai/docs/gost-r-53774-2010) и [ГОСТ Р 51600-2010](https://bukva.ai/docs/gost-r-51600-2010) соответственно. > Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения федерального закона "технический регламент на молоко и молочную продукцию" и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 N 1866-р). > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). > С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ. > [Изменение N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст, введено в действие с 01.07.2008. > [!NOTE] > ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ ```mermaid flowchart LR n0["ГОСТ Р 51600-2000"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51600-2000-gosstandart-rossii" "ГОСТ Р 51600-2000. Государственный стандарт Российской Федерации. Молоко. Методы определения наличия антибиотиков (принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от " n1["ГОСТ Р 51600-2010"]:::rst click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-r-51600-2010" "ГОСТ Р 51600-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочные продукты. Микробиологические методы определения наличия антибиотиков (утв. и введен в действие Прик" n2["ГОСТ Р 53774-2010"]:::rst click n2 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53774-2010" "ГОСТ Р 53774-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков (утв. и введен в действие Приказ" n3["ГОСТ 31502-2012"]:::doc n4["ГОСТ 32219-2013"]:::doc n0 --> n2 n0 --> n1 n1 --> n3 n2 --> n4 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000; ``` Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 26 апреля 2000 г. N 127-ст **ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ** **МОЛОКО** **МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АНТИБИОТИКОВ** Milk. Methods for determination of the antibiotics indication **ГОСТ Р 51600-2000** Группа Н19 ОКС 67.100.10 ОКСТУ 9209 Дата введения 1 июля 2001 года ### Предисловие 1. Разработан Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии (ГУ ВНИИВСГЭ), Институтом питания РАМН и Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ). Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты". 2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 26 апреля 2000 г. N 127-ст. 3. Введен впервые. 4. Переиздание. Сентябрь 2005 г. ### 1. Область применения (раздел 1 в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100010), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст) Настоящий стандарт распространяется на натуральное коровье молоко - сырье, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко (далее - молоко) и устанавливает микробиологические и рецепторные методы определения наличия антибиотиков. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100007), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* ### 2. Нормативные ссылки В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты: ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия [ГОСТ 2493-75](https://bukva.ai/docs/standart-gost-2493-75) Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия [ГОСТ 3145-84](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84) Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия [ГОСТ 9225-84](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84) Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия [ГОСТ 23454-79](https://bukva.ai/docs/gost-23454-79) Молоко. Методы определения ингибирующих веществ [ГОСТ 24065-80](https://bukva.ai/docs/gost-24065-80) Молоко. Методы определения соды [ГОСТ 24066-80](https://bukva.ai/docs/gost-24066-80) Молоко. Методы определения аммиака [ГОСТ 24067-80](https://bukva.ai/docs/gost-24067-80) Молоко. Метод определения перекиси водорода ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой > *(ссылка введена [Изменением N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100008), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования. ### 3. Чашечный метод с Bac. stearothermophilus #### 3.1 Сущность метода Метод основан на способности антибиотиков, содержащихся в молоке, диффундировать в агаровую среду со спорами тест-микроба и препятствовать его росту, что приводит к образованию прозрачных зон ингибиции. Наличие любого антибиотика в молоке устанавливают по диаметру зоны ингибиции. #### 3.2 Аппаратура, реактивы и материалы 3.2.1. Аппаратура, реактивы и материалы по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84) и указанные в [3.2.2](#p100037) - [3.2.16](#p100051). ##### 3.2.2 Холодильник бытовой по ГОСТ 16317. 3.2.3. Центрифуга частотой вращения $3000\text{мин}^{- 1}$ и разделяющим фактором 750 м/с2. 3.2.4. Часы механические с сигнальным устройством по [ГОСТ 3145](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84). 3.2.5. Колба коническая по ГОСТ 25336, вместимостью 250 см3. 3.2.6. Линейка по ГОСТ 427, пределом измерения 150 мм или аппарат Микрофот 5ПО-1. ##### 3.2.7 Пробойник диаметром 10 мм или сверло пробочное N 4. 3.2.8. Пипетка градуированная по ГОСТ 29227, 2-го класса точности, вместимостью 25 см3. ##### 3.2.9 Гидролизат кормовых дрожжей. ##### 3.2.10 Диски со стрептомицином. ##### 3.2.11 Оптический стандарт мутности ОСО 42-28-29-86. ##### 3.2.12 Препарат СКИВ. ##### 3.2.13 Стандарт стрептомицина РСО 9347-194-00494189-99. 3.2.14. Тест-микроб Bac. stearothermophilus ВКМВ-510, выпускаемый Институтом биохимии и физиологии микроорганизмов РАН. ##### 3.2.15 Фуксин основной, спиртовой раствор концентрации 50 г/дм3. ##### 3.2.16 Экстракт дрожжевой. Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных. #### 3.3 Отбор проб ##### 3.3.1 Отбор проб - по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84). 3.3.2. Пробы молока до испытания допускается хранить в холодильнике при температуре (5 +/- 1) °C не более 24 ч. 3.3.3. Анализу подлежат пробы молока, давшие положительный результат по [ГОСТ 23454](https://bukva.ai/docs/gost-23454-79) и отрицательный - по [ГОСТ 24065](https://bukva.ai/docs/gost-24065-80), [ГОСТ 24066](https://bukva.ai/docs/gost-24066-80) и [ГОСТ 24067](https://bukva.ai/docs/gost-24067-80). #### 3.4 Подготовка к анализу ##### 3.4.1 Подготовка посуды и материалов 3.4.1.1. Всю новую посуду, предназначенную для микробиологических исследований, кипятят в подкисленной воде (раствор соляной кислоты объемной доли 1 - 2%) в течение 15 мин, затем ополаскивают дистиллированной водой. Вымытую посуду стерилизуют в сушильном шкафу при температуре (160 +/- 5) °C в течение 2 ч или в автоклаве при (121 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин с последующим подсушиванием. Чашки Петри, пипетки и цилиндры стерилизуют завернутыми в бумагу или в металлических пеналах. В конец пипетки предварительно вкладывают кусочек ваты. Пробирки и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками и обертывают бумагой. Стерильную посуду хранят в плотно закрывающихся шкафах или ящиках с крышками. ##### 3.4.2 Приготовление питательных сред 3.4.2.1. Для получения спор Bac. stearothermophilus ВКМВ-510 используют питательную среду следующего состава: дрожжевой экстракт - 10,0 г, пептон - 20,0 г, глюкоза - 0,5 г, дистиллированная вода - до 1000,0 см3. В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают все компоненты питательной среды, растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, доводят объем раствора водой до метки и устанавливают pH среды по pH-метру, равный (7,1 +/- 0,1). Разливают раствор в колбы по 200,0 см3 и стерилизуют его при температуре (121 +/- 2) °C в течение (15 +/- 1) мин. 3.4.2.2. Для проведения анализа готовят агаровую среду следующего состава: гидролизат кормовых дрожжей - 1,0 г, пептон - 0,4 г, хлористый натрий - 0,1 г, агар - 1,6 г, дистиллированная вода - до 100,0 см3. В колбу вместимостью 200 см3 вносят 100 см3 дистиллированной воды и все компоненты среды, перемешивают до полного растворения и нагревают до кипения. Затем охлаждают до температуры (55 +/- 5) °C, устанавливают pH среды по pH-метру, равный (7,3 +/- 0,1), и стерилизуют при температуре (121 +/- 2) °C в течение (15 +/- 1) мин. 3.4.2.3. Для проведения анализа допускается применять питательные среды указанного в [3.4.2.1](#p100063) и [3.4.2.2](#p100065) состава промышленного изготовления. ##### 3.4.3 Получение спор тест-микроба 3.4.3.1. Среду по [3.4.2.1](#p100063) засевают 2 - 3 см3 18 - 20-часовой тест-культуры Bac. stearothermophilus ВКМВ-510, выращенной в пробирках с этой же средой, тщательно перемешивают и помещают в термостат температурой (55 +/- 1) °C на 3 сут. После окончания инкубации из посевов делают мазки, окрашивают их спиртовым раствором основного фуксина 50 г/дм3 и микроскопируют. При наличии в поле зрения 90 - 95% свободных сформировавшихся спор колбы с посевами помещают на 16 - 18 ч в холодильник для осаждения. Надосадочную жидкость из колбы сливают, а осадок разливают по стерильным центрифужным пробиркам и прогревают в водяной бане при температуре внутри пробирок (67 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин. Пробирки центрифугируют 20 - 30 мин. Осадок отмывают стерильной дистиллированной водой (не менее трех раз) до получения прозрачной жидкости над ним. Взвесь спор вторично прогревают при температуре (67 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин. Полученную взвесь переносят в бактериологические пробирки и хранят в холодильнике не более 2 мес. ##### 3.4.4 Приготовление засеянной агаровой среды 3.4.4.1. В пробирки отбирают взвесь спор тест-микроба по [3.4.3.1](#p100069) и разводят стерильной дистиллированной водой до получения суспензии спор, визуально соответствующей 10 единицам по оптическому стандарту мутности. 3.4.4.2. К 100 см3 расплавленной и охлажденной до (60 +/- 2) °C среды по [3.4.2.2](#p100065) добавляют 2,5 см3 водного раствора глюкозы массовой долей 40% и 4 см3 суспензии спор по [3.4.4.1](#p100074). Смесь среды и спор тщательно перемешивают и разливают градуированной пипеткой по (11 +/- 1) см3 в чашки Петри, установленные на строго горизонтальной поверхности стола. ###### 3.4.4.3 Чашки засевают непосредственно перед употреблением. В некоторых случаях чашки хранят в холодильнике при температуре (5 +/- 1) °C не более 2 сут. Перед использованием их прогревают в термостате при (55 +/- 1) °C в течение (20 +/- 1) мин. ##### 3.4.5 Приготовление обезжиренного стерильного молока 3.4.5.1. Обезжиренное стерильное молоко получают из цельного молока кислотностью 16 - 18 °T, предварительно проверенного на отсутствие ингибирующих веществ по [ГОСТ 23454](https://bukva.ai/docs/gost-23454-79). В пробирки разливают обезжиренное молоко по 10 см3 и стерилизуют при $10^{5}\text{Па }(1\text{атм})$ в течение (10 +/- 1) мин. Допускается использовать препарат СКИВ. ##### 3.4.6 Приготовление контрольного разведения стрептомицина активностью 2,5 мкг/см3 (Ед/г) 3.4.6.1. Контрольное разведение стрептомицина используют для проверки активности роста тест-микроба. 3.4.6.2. Контрольное разведение стрептомицина готовят в фосфатных буферных растворах. Состав раствора 1: двузамещенный фосфорнокислый калий - 2,0 г, однозамещенный фосфорнокислый калий - 8,0 г, дистиллированная вода - до 1000,0 см3. В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют компоненты в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем водой до метки. Устанавливают pH раствора по pH-метру, равный (6,1 +/- 0,1), и стерилизуют при температуре (112 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин. Срок хранения раствора - не более 30 сут при температуре (5 +/- 1) °C. Состав раствора 2: двузамещенный фосфорнокислый калий - 16,73 г, однозамещенный фосфорнокислый калий - 0,523 г, дистиллированная вода - до 1000,0 см3. В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют компоненты в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем водой до метки. Устанавливают pH раствора по pH-метру, равный (7,9 +/- 0,1), и стерилизуют при температуре (112 +/- 2) °C в течение (30 +/- 1) мин. Срок хранения раствора - не более 30 сут при температуре (5 +/- 1) °C. 3.4.6.3. Контрольное разведение готовят из основного раствора стрептомицина активностью 500 мкг/см3, который получают растворением 5 мг стандарта антибиотика, взвешенного с отсчетом показания весов до 0,1 мг, в буферном растворе 1 по [3.4.6.2](#p100083). Объем буферного раствора составляет 0,01 активности антибиотика. Пример: При активности стандарта стрептомицина 760 мкг/мг навеску антибиотика (5 мг) растворяют в 7,6 см3 буферного раствора 1 и получают основной раствор активностью 500 мкг/см3. Основной раствор антибиотика хранят в посуде из темного стекла с притертой пробкой не более 30 сут при температуре (5 +/- 1) °C. Из основного раствора в трех пробирках готовят серию разведений антибиотика. В первую пробирку наливают 1 см3 буферного раствора 2 по [3.4.6.2](#p100083) и 1 см3 основного раствора, во вторую - 9 см3 буферного раствора 2 и 1 см3 раствора из первой пробирки, в третью - 9 см3 стерильного обезжиренного молока по [3.4.5](#p100078) и 1 см3 раствора из второй пробирки. Активность антибиотика в разведениях составляет соответственно 250; 25 и 2,5 мкг/см3. Разведение антибиотика в молоке активностью 2,5 мкг/см3 является контрольным. Контрольное разведение стрептомицина используют в течение рабочего дня. 3.4.6.4. Взамен контрольного разведения стрептомицина для проверки активности роста тест-микроба могут быть использованы диски со стрептомицином по [3.2.10](#p100045). ##### 3.4.7 Подготовка проб молока к анализу Каждую пробу молока наливают по 5 - 10 см3 в чистую стерильную пробирку, прогревают в течение (10 +/- 1) мин на водяной бане при температуре внутри пробирки (87 +/- 2) °C и охлаждают в холодной воде до температуры 18 - 25 °C. #### 3.5 Проведение анализа 3.5.1. Непосредственно перед исследованием молока на поверхности агаровой среды, разлитой в чашки Петри по [3.4.4](#p100073), пробойником или пробочным сверлом вырезают семь лунок диаметром 10 мм. Шесть лунок располагают по окружности чашки на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 28 мм их центров от центра чашки. Седьмую лунку вырезают в центре чашки (рисунок 1) только в случае использования контрольного разведения антибиотика. ![3. Чашечный метод с Bac. stearothermophilus](https://i.bukva.ai/VvNfIvAU/img_0.png) Рисунок 1. Схема вырезания лунок в агаровой среде 3.5.2. В центральную лунку вносят 0,05 см3 контрольного разведения антибиотика по [3.4.6.3](#p100088) или в центре чашки на поверхность засеянной агаровой среды помещают диск со стрептомицином по [3.2.10](#p100045). В лунки, расположенные по окружности чашки, вносят по 0,05 см3 исследуемых проб молока по [3.4.7](#p100094). 3.5.3. Чашки Петри выдерживают при комнатной температуре в течение (20 +/- 1) мин, затем их помещают в термостат крышками вверх и инкубируют при температуре (55 +/- 1) °C в течение 4 ч. Чашки в термостате размещают в один ряд. #### 3.6 Обработка результатов 3.6.1. Результаты анализа оценивают непосредственно после инкубирования. Чашки просматривают в проходящем свете от любого источника света. Диаметры зон ингибиции роста тест-культуры, образуемых испытуемым образцом молока и контрольным разведением антибиотика, измеряют линейкой или на аппарате Микрофот 5ПО-1 по краям окружностей зон. 3.6.2. При отсутствии зон ингибиции контрольного разведения стрептомицина исследования повторяют с использованием вновь приготовленных засеянных чашек по [3.4.4](#p100073) и контрольного разведения антибиотика по [3.4.6](#p100081). 3.6.3. При отсутствии антибиотиков в молоке диаметр зоны ингибиции должен быть менее 12 мм, а при их наличии - 12 мм и более. #### 3.7 Метрологические характеристики 3.7.1. Наименьшие пределы определения антибиотиков представлены в таблице 1. Таблица 1
Наименование антибиотикаНаименьший предел определения, Ед/г (мкг/г) <1>Наименование антибиотикаНаименьший предел определения, Ед/г (мкг/г) <1>
Бензилпенициллин0,005Эритромицин0,05
Стрептомицин0,5 - 1,0Неомицин0,25
Тетрациклин0,1Мономицин0,25
Окситетрациклин0,1Левомицетин2,5
Хлортетрациклин0,05Олеандомицин2,5
<1> 1 мкг активного вещества равен 1 Ед активности.
### 4. Метод с индикатором бромкрезолпурпуром #### 4.1 Сущность метода Метод основан на изменении окраски агаровой среды со спорами Bac. stearothermophilus var. calidolactis C953 от фиолетовой до желтой при отсутствии в исследуемом молоке антибиотиков и других ингибирующих веществ и сохранении окраски - при их наличии. #### 4.2 Аппаратура, материалы и реактивы 4.2.1. Термостат или блок термостатируемых ячеек, позволяющий поддерживать температуру от 30 до 70 °C с допускаемыми отклонениями +/- 0,5 °C от заданной. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100009), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* ##### 4.2.2 Холодильник бытовой по ГОСТ 16217. 4.2.3. Ампулы $"Delvotest^{®}SP"$ , герметично укупоренные, вместимостью 1,0 см3 с агаровой средой, содержащей споры Bac. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бромкрезолпурпур, собранные в блоки. > *(п. 4.2.3 в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100013), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст)* 4.2.4. Среда питательная таблетированная $"Delvotest^{®}SP"$ , фасованная в бутылочки из темного стекла с навинчивающимся колпачком. > *(в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100015), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст)* 4.2.5. Шприц-дозатор автоматический вместимостью 1,0 см3, настроенный на объем пробы 0,1 см3. ##### 4.2.6 Наконечники пластмассовые одноразовые, вместимостью 0,1 см3. ##### 4.2.7 Пинцет. 4.2.8. Часы механические с сигнальным устройством по [ГОСТ 3145](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84). Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже указанных. 4.2.9. Ампулы $"Delvotest^{®}SP - NT"$ или $"Delvotest^{®}SPMINI - NT"$ , герметично укупоренные, вместимостью 1,0 см3 с агаровой и питательной средой, содержащей споры Bac. stearothermophilus var. calidolactis и индикатор бромкрезолпурпур, собранные в блоки. > *(п. 4.2.9 введен [Изменением N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100016), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст)* 4.2.10. Тестовый набор $"CopanTest®"$ - комплект, включающий герметично укупоренные пробирки, собранные в блоки, и содержащие споры Bac. stearothermophilus var. calidolactis, помещенные в агар с питательными веществами и индикатором бромкрезолпурпуром; пипетки мерные вместимостью 0,1 см3 одноразового использования и цветовую шкалу [[3]](#p100553). > *(п. 4.2.10 введен [Изменением N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100010), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* 4.2.11. Пипетки вместимостью 0,1 см3 для отбора образцов молока для исследования по ГОСТ 29169. > *(п. 4.2.11 введен [Изменением N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100010), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* #### 4.3 Отбор проб 4.3.1. Отбор проб и подготовка их к анализу - по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84). 4.3.2. Допускается хранить пробы в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 +/- 2) °C. #### 4.4 Подготовка к анализу ##### 4.4.1 Подготовка к анализу ампул по [4.2.3](#p100227) и бутылочек по [4.2.4](#p100228) > *(в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100018), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст)* Стеклянную бутылочку с питательными таблетками вынимают из холодильника и выдерживают в течение 20 мин при температуре от 15 до 25 °C. 4.4.2. Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C. > *(п. 4.4.2 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100013), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* 4.4.3. Отвинчивают колпачок бутылочки и помещают его на стол вниз донышком. Пинцетом вынимают капсулу с силикагелем и поролоновый уплотнитель. Насыпают в колпачок необходимое количество таблеток питательной среды. Поролоновый уплотнитель и капсулу с силикагелем помещают в бутылочку. 4.4.4. Подготовка к анализу ампул или пробирок - по [4.2.9](#p100229) или [4.2.10](#p100314). Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C". > *(п. 4.4.4 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100013), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* #### 4.5 Проведение анализа ##### 4.5.1 Проведение анализа с использованием ампул $"Delvotest®SP"$ , $"Delvotest®SP - NT"$ или $"Delvotest®SPMINI - NT"$ 4.5.1.1. Соединительной частью шприца прокалывают укупорку ампул по [4.2.3](#p100227) или [4.2.9](#p100229). 4.5.1.2. В каждую открытую ампулу по [4.2.3](#p100227) пинцетом помещают по одной таблетке питательной среды $"Delvotest®SP"$ , взятой из колпачка бутылочки по [4.4.3](#p100154). Затем бутылочку плотно закрывают колпачком и хранят при температуре (20 +/- 2) °C. 4.5.1.3. Шприцем-дозатором отбирают 0,1 см3 анализируемого молока и вносят в каждую ампулу по [4.5.1.2](#p100322) или [4.2.9](#p100229). Для каждой пробы анализируемого молока используют новый наконечник. Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C. 4.5.1.4. Ампулы помещают в термостат и выдерживают при температуре (64,0 +/- 0,5) °C в течение 3 ч. ##### 4.5.2 Проведение анализа с использованием тестового набора $"CopanTest®"$ 4.5.2.1. Одноразовой мерной пипеткой отбирают 0,1 см3 анализируемого молока и вносят в пробирку с приоткрытой фольгой по [4.2.10](#p100314). Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C. 4.5.2.2. Пробирки с анализируемым молоком закрывают фольгой и помещают в блок термостатируемых ячеек и выдерживают при температуре (64,5 +/- 0,5) °C в течение 3 ч. 4.5.2.3. Контрольное определение проводят в соответствии с [4.5.1](#p100320), [4.5.2](#p100325). В ампулу или пробирку вносят 0,1 см3 предварительно восстановленного по [ГОСТ 23454](https://bukva.ai/docs/gost-23454-79) препарата СКИВ. > *(п. 4.5 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100017), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* #### 4.6 Обработка результатов 4.6.1. Ампулы или пробирки извлекают из термостата или блока термостатируемых ячеек и определяют цвет содержимого. > *(п. 4.6.1 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100028), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* 4.6.2. Желтый цвет содержимого ампул или пробирок с контрольным и анализируемыми образцами молока свидетельствует об отсутствии в молоке ингибирующих веществ. Фиолетовое кольцо на поверхности содержимого ампулы или пробирки (размером не более 1 мм) не учитывают. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100030), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* 4.6.3. Фиолетовый цвет содержимого ампул или пробирок с анализируемым образцом молока свидетельствует о наличии в молоке ингибирующих веществ. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100030), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* 4.6.4. Вывод о наличии в молоке антибиотиков делают после дополнительных исследований молока по [ГОСТ 24065](https://bukva.ai/docs/gost-24065-80) - [ГОСТ 24067](https://bukva.ai/docs/gost-24067-80) и при получении отрицательных результатов. #### 4.7 Метрологические характеристики 4.7.1. Наименьшие пределы определения антибиотиков представлены в таблице 2. Таблица 2
Наименование антибиотикаНаименьший предел определения, Ед/г (мкг/г), с использованием
$CopanTest®$ (CH-ATK)$Delvotest®SP - NT$ , $Delvotest®SPMINI - NT$
DH-Стрептомицин< 1,0-
Амоксициллин0,0020,003
Ампициллин< 0,0020,003
Бензилпенициллин-0,0025
Гентамицин0,10,400
Дапсон0,002-
Дигидрострептомицин-2,500
Диклоксациллин0,010,010
Доксициклин0,15-
Клоксациллин0,010,020
Левомицетин (хлорамфеникол)-7,500
Линкомицин-0,300
Нафциллин0,0050,010
Неомицин0,50,400
Оксациллин0,0050,010
Окситетрациклин0,250,400
Пенициллин0,001-
Спектиномицин> 0,3-
Спирамицин> 0,2-
Стрептомицин< 1,0-
Сульфадиазин0,05-
Сульфадиметоксин0,05-
Сульфадоксин0,1-
Сульфаметазин0,1-
Сульфаметоксазол< 0,05-
Сульфанометозин< 0,05-
Сульфатиозол0,05-
Тетрациклин0,250,300
Тиамфеникол> 0,1-
Тилозин0,050,100
Тилмикозин0,75-
Триметроприм0,1-
Хлорамфеникол> 5,0-
Хлортетрациклин0,250,300
Цефазолин0,05-
Цефалексин> 0,0450,060
Цефалониум0,0250,015
Цефаперазон0,0250,060
Цефапирин0,00250,005
Цефацетрил-0,020
Цефкуином0,03-
Цефтиофур0,05-
Цефуроксим0,06-
Эритромицин> 0,20,250
> *(п. 4.7.1 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100031), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* ### 5. Рецепторные методы (введено [Изменением N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100031), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст) [5.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Рецепторный метод с 3,3,5,5-триметилбензидином и диметилсульфоксидом > *(раздел 5 в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100028), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст, в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100172), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* [5.1.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Сущность метода Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного окрашенного комплекса при взаимодействии с молоком, содержащим антибиотики. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100173), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* Наличие или отсутствие пенициллина и антибиотиков бета-лактамного типа (ампициллина, цефапирина, амоксициллина, цефтиофура, клоксациллина, диклоксациллина, цефалониума, цефалексина, нафциллина, цефазолина, цефкуинома, цефацетрила, оксациллина, цефаперазона) устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства $"Snap^{®}"$ . [5.1.2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Аппаратура, материалы и реактивы [5.1.2.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Термостат, позволяющий поддерживать температуру (45 +/- 5) °C. [5.1.2.2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Холодильник бытовой по ГОСТ 16317. [5.1.2.3](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Часы механические с сигнальным устройством по [ГОСТ 3145](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84). [5.1.2.4](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Тест-набор Бета-лактам $"Snap^{®}"$ , одноразовый комплект в герметичной упаковке, включающий пробирку $"Snap^{®}"$ с 3,3,5,5-триметилбензидином, укупоренную; пипетку мерную вместимостью 0,4 см3; индикаторное устройство $"Snap^{®}"$ с диметилсульфоксидом по [[1]](#p100306). Тест-набор Бета-лактам $"Snap^{®}"$ хранят в холодильнике при температуре от 0 °C до 7 °C. Необходимое число комплектов для работы в течение суток допускается хранить при температуре (20 +/- 2) °C. [5.1.3](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Отбор проб [5.1.3.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Отбор проб - по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84). Пробы хранят в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 +/- 2) °C. [5.1.4](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Подготовка к анализу [5.1.4.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Термостат нагревают до температуры (45 +/- 5) °C и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин. [5.1.4.2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Вскрывают упаковку тест-набора Бета-лактам $"Snap^{®}"$ , проверяют положение шарика реактива в пробирке по [5.1.2.4](#p100247). Шарик реактива при заполнении пробирки молоком должен находиться на ее дне. При необходимости шарик реактива устанавливают встряхиванием пробирки на ее дно. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100174), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* [5.1.5](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Проведение анализа [5.1.5.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Мерную пипетку по [5.1.2.4](#p100247) наполняют анализируемым молоком до метки. > *(в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100175), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* [5.1.5.2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Анализируемое молоко из пипетки выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива. Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45 +/- 5) °C в течение 5 - 6 мин. [5.1.5.3](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Вынимают подогретое индикаторное устройство из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливки анализируемым молоком находилась слева от оператора. [5.1.5.4](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства. [5.1.5.5](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до упора для изменения тока жидкости и промывки пористого материала раствором антибиотиков. Включение индикаторного устройства сопровождается характерным щелчком клавиши. [5.1.5.6](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Индикаторное устройство повторно помещают в термостат, выдерживают при температуре (45 +/- 5) °C в течение 4 мин и извлекают из термостата. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата. [5.1.6](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Обработка результатов [5.1.6.1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Сравнивают цвет контрольной зоны в индикаторном окне с цветом зоны анализируемого молока. [5.1.6.2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Контрольная зона должна быть синего цвета. Если изменение цвета контрольной зоны после проведения процедур по [5.5.4](#p100258) - [5.5.6](#p100260) не произошло, то определение повторяют с новым тест-набором Бета-лактам $"Snap^{®}"$ . [5.1.6.3](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100171). Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны - пенициллин или антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют. Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии в анализируемом молоке пенициллина или антибиотиков бета-лактамного типа. #### 5.2 Рецепторный метод с коллоидным золотом ##### 5.2.1 Сущность метода 5.2.1.1. Метод основан на проведении реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны. ##### 5.2.2 Аппаратура, материалы и реактивы 5.2.2.1. Термостат или блок термостатируемых ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5 +/- 0,5) °C. ###### 5.2.2.2 Холодильник бытовой по ГОСТ 16317. 5.2.2.3. Часы механические с сигнальным устройством по [ГОСТ 3145](https://bukva.ai/docs/standart-gost-3145-84). 5.2.2.4. Тест-набор $"BetaStar®"$ [[4]](#p100555), включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; полоски хроматографической бумаги с зоной исследуемого молока и контрольной зоной; шприц-дозатор вместимостью 0,2 см3 с наконечниками. ##### 5.2.3 Отбор проб Отбор проб - по [ГОСТ 9225](https://bukva.ai/docs/gost-9225-84). Пробы хранят в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 +/- 2) °C. ##### 5.2.4 Подготовка к анализу 5.2.4.1. Термостат или блок термостатируемых ячеек нагревают до температуры (47,5 +/- 0,5) °C и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин. ###### 5.2.4.2 Флакон встряхивают для осаждения содержимого в нем на дно. ##### 5.2.5 Проведение анализа 5.2.5.1. Шприцем-дозатором с наконечником отбирают 0,2 см3 анализируемого молока и переливают во флакон по [5.2.4.2](#p100486). Флакон закрывают крышкой и встряхивают до полного растворения сухих веществ без образования пены. 5.2.5.2. Помещают флакон в термостат или блок термостатируемых ячеек по [5.2.2.1](#p100478). 5.2.5.3. Не менее чем через 3 мин термостатирования во флакон, находящийся в термостате или в блоке термостатируемых ячеек, помещают входящую в комплект полоску хроматографической бумаги. 5.2.5.4. Хроматографирование проводят в течение 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона. ##### 5.2.6 Обработка результатов 5.2.6.1. Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся после проведения процедуры по [5.2.5.4](#p100491) в виде линий на полосках хроматографической бумаги. 5.2.6.2. Зона на верхней части полоски является контрольной. Если ее окрашивания не произошло после выполнения требований по [5.2.5.3](#p100490), [5.2.5.4](#p100491), то повторяют все процедуры в соответствии с [5.2](#p100474). 5.2.6.3. Зона исследуемого молока расположена под контрольной зоной. Большая или равная интенсивность цвета контрольной зоны, а также отсутствие окраски зоны образца является признаком наличия антибиотиков бета-лактамного типа в молоке. 5.2.6.4. Меньшая интенсивность цвета контрольной зоны, по сравнению с интенсивностью цвета зоны под ней, является признаком отсутствия антибиотиков. 5.2.6.5. Контрольное определение проводят в соответствии с [5.1](#p100239) и [5.2](#p100474). В ампулу или пробирку вносят 0,1 см3 предварительно восстановленного по [ГОСТ 23454](https://bukva.ai/docs/gost-23454-79) препарата СКИВ. > *(п. 5.2 введен [Изменением N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100176), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* [5.3](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100201). Метрологические характеристики Наименьшие пределы определения антибиотиков бета-лактамного типа представлены в таблице 3. Таблица 3
Наименование антибиотикаНаименьший предел определения, Ед/г (мкг/г), с использованием
Бета-лактам $"Snap®"$$BetaStar®$
Амоксициллин0,0070,002
Ампициллин0,0050,002
Диклоксациллин0,020,005
Клоксациллин0,030,005
Нафциллин0,070,008
Оксациллин0,040,005
Пенициллин0,003 <*>-
Пенициллин G-0,002
Цефазолин0,02-
Цефалексин0,025-
Цефалониум0,040,007
Цефаперазон0,010,005
Цефапирин0,0110,008
Цефацетрил0,05-
Цефкуином0,02-
Цефтиофур0,0060,075
<*> 0,003 мкг активного вещества равно 0,005 Ед активности.
> *(п. 5.3 в ред. [Изменения N 2](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000#p100202), утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)* ### 6. Требования безопасности (раздел 6 введен [Изменением N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100092), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст) Работу со споровой культурой тест-микроба в лаборатории проводят в соответствии с санитарными [правилами](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-2) по [[2]](#p100308). Приложение А (справочное) **БИБЛИОГРАФИЯ** (Приложение А в ред. [Изменения N 1](https://bukva.ai/docs/prikaz-gost-r-51600-2000-rosstandart-federalnoe#p100095), утв. Приказом Росстандарта от 09.02.2006 N 6-ст)
[1]Тест-набор Бета-лактам $"Snap^{®}"$ . Россия, ООО "ЗИП-И Диагностикс"
[2]СП 1.2.731-99Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности и гельминтами".
[3]Тестовый набор $"CopanTest®"$ Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия, 105318 Москва, ул. Щербаковская, 53, корп. 17, 3 этаж, ООО "Хр. Хансен"
(позиция введена Изменением N 2, утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)
[4]Тест-набор $"BetaStar®"$ Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия, 105318 Москва, ул. Щербаковская, 53, корп. 17, 3 этаж, ООО "Хр. Хансен"
(позиция введена Изменением N 2, утв. Приказом Ростехрегулирования от 23.01.2008 N 1-ст)
---