ГОСТ Р 51428-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Соки фруктовые. Метод определения содержания винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 № 583-ст)

от 22 декабря 1999 г. № 583-ст

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

СОКИ ФРУКТОВЫЕ

МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ВИННОЙ КИСЛОТЫ С ПОМОЩЬЮ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Fruit juices. Method for determination of tartaric acid

Дата введения 1 января 2001 года

Предисловие

1. Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП).

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 «Продукты переработки плодов и овощей».

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. № 583-ст.

3. Стандарт гармонизирован с европейским стандартом ЕН 12137:1997 «Соки фруктовые и овощные. Определение винной кислоты в виноградном соке. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии».

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на виноградный сок и подобные ему продукты, содержащие виноградный сок, и устанавливает метод определения содержания (массовой концентрации или массовой доли) винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Диапазон определения массовой концентрации (массовой доли) винной кислоты — от 1,0 до 10,0 г/дм3 (г/кг).

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 4204-77. Кислота серная. Технические условия

ГОСТ 5817-77. Кислота винная. Технические условия

ГОСТ 24104-88. Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 26313-84. Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 26671-85. Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 51431-99. Соки фруктовые и овощные. Метод определения относительной плотности

ИСО 3696-87 <*>. Вода для лабораторного анализа. Технические условия и методы испытаний.

---

<*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе стандарта ИСО.

3. Сущность метода

Метод основан на определении массовой концентрации или массовой доли винной кислоты в виноградном соке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением ионоэксклюзивной колонки и спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области спектра.

4. Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, 4-го класса точности.

Жидкостный хроматограф, состоящий из:

• насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа и диапазоном регулирования подачи растворителя от 0,1 до 5 см3/мин;
• петлевого устройства ввода пробы с рабочим объемом петли от 0,010 до 0,020 см3;
• спектрофотометрического детектора с переменной длиной волны, позволяющего проводить измерение оптической плотности при длине волны 210 нм, снабженного проточной кварцевой кюветой вместимостью не более 0,01 см3, с относительной погрешностью измерения оптической плотности не более 2%;
• регистрирующего устройства (самописца или интегратора), позволяющего проводить измерения при чувствительности 0,2 мВ/см с погрешностью записи в рабочих условиях не более 0,5%;
• термостата колонок, пригодного для поддержания рабочей температуры 40 °C;
• колонки длиной 300 мм, внутренним диаметром 7,8 мм, заполненной ионоэксклюзивным сорбентом на основе сополимера стирола с дивинилбензолом с привитыми сульфогруппами в водородной форме размером частиц 10 мкм;
• предколонки, заполненной катионитом в водородной форме.

Микрошприц вместимостью, обеспечивающей полное заполнение петли инжектора.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 50, 100 и 500 см3.

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 2, исполнения 1, 1-го класса точности вместимостью 10 и 25 см3.

Фильтры мембранные размером пор не более 0,5 мкм.

Кислота винная по ГОСТ 5817, ч.д.а.

Вода для лабораторного анализа по ИСО 3696, категории 1.

Допускается использование других средств измерений, лабораторного оборудования и реактивов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих указанным выше.

5. Отбор и подготовка проб

5.1 Отбор проб — по ГОСТ 26313.

5.2 Подготовка проб к испытаниям — по ГОСТ 26671.

Концентрированные продукты разводят водой до заданного значения относительной плотности в соответствии с нормативным или техническим документом на конкретный вид продукта. Относительную плотность разбавленной пробы определяют по ГОСТ Р 51431 и найденное значение указывают в протоколе испытаний.

6. Подготовка к проведению испытаний

Для приготовления растворов, используемых при проведении испытания, и подвижной фазы для ВЭЖХ используют только воду категории 1 по ИСО 3696.

6.1 Приготовление градуировочных растворов

Готовят серию градуировочных растворов винной кислоты в диапазоне массовых концентраций от 100 до 500 мг/дм3. Для этого навеску винной кислоты массой 50 мг переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в небольшом количестве воды, объем содержимого в колбе доводят водой до метки. Получают градуировочный раствор винной кислоты массовой концентрации 500 мг/дм3. Остальные градуировочные растворы готовят точным разведением первого раствора в соответствующее количество раз.

7. Проведение испытаний

7.1 Приготовление раствора пробы для хроматографического анализа

Проводят два параллельных определения.

Пробу объемом 25 — 50 см3 (25 — 50 г) помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, добавляют около 300 см3 горячей воды температурой 80 — 85 °C, тщательно перемешивают и оставляют для охлаждения до комнатной температуры, после чего объем содержимого в колбе доводят до отметки водой, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр. Фильтрат используют для хроматографического анализа.

7.2 Хроматографический анализ

Хроматографический анализ градуировочных растворов и растворов пробы, приготовленных по 7.1, проводят при следующих условиях:

• состав подвижной фазы — раствор серной кислоты c(H_{2}SO_{4}) = 0,005\text{моль}/\text{дм}^{3} ;
• скорость потока подвижной фазы — 0,6 см3/мин (для предотвращения чрезмерного давления скорость потока при кондиционировании колонки повышают постепенно, начиная с 0,2 см3/мин);
• длина волны детектора — 210 нм;
• температура колонки — 40 °C;

• длительность анализа — 20 мин;
• ориентировочное время удерживания винной кислоты — 10 мин.

Анализ градуировочных растворов проводят непосредственно перед анализом каждой серии растворов проб.

Регистрируют высоту пика винной кислоты.

8. Обработка и оформление результатов испытаний

По результатам анализа градуировочных растворов строят градуировочный график зависимости высоты пика винной кислоты от ее массовой концентрации.

По градуировочному графику определяют массовую концентрацию винной кислоты в растворе пробы, соответствующую высоте пика винной кислоты на хроматограмме раствора пробы.

Массовую концентрацию винной кислоты в пробе x_{1} , г/дм3, вычисляют по формуле

x_{1} = \frac{cV_{1}}{V_{2}} \cdot 10^{- 3} , (1)

где c — массовая концентрация винной кислоты в растворе пробы, определенная по градуировочному графику, мг/дм3;

V_{1} — объем приготовленного по 7.1 раствора пробы, см3;

V_{2} — объем пробы, взятый для приготовления раствора пробы по 7.1, см3.

Массовую долю винной кислоты x_{2} , г/кг, вычисляют по формуле

x_{2} = \frac{cV_{1}}{m} \cdot 10^{- 3} , (2)

где m — масса навески пробы, взятой для приготовления раствора пробы по 7.1, г.

Вычисления проводят до второго десятичного знака.

Относительное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать норматива оперативного контроля сходимости 6% (P = 0,95). При соблюдении этого условия за окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до первого десятичного знака.

---