ГОСТ 31768-2012. Межгосударственный стандарт. Мед натуральный. Методы определения гидроксиметилфурфураля

(введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 № 1664-ст)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["ГОСТ Р 52834-2007"]:::rst
  click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-52834-2007" "ГОСТ Р 52834-2007. Национальный стандарт Российской Федерации. Мед натуральный. Методы определения гидроксиметилфурфураля (утв. и введен в действие Приказом Ростехрегулирования от "
  n1["ГОСТ 31768-2012"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31768-2012" "ГОСТ 31768-2012. Межгосударственный стандарт. Мед натуральный. Методы определения гидроксиметилфурфураля (введен в действие Приказом Росстандарта от 29.11.2012 N 1664-ст)"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МЕД НАТУРАЛЬНЫЙ

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИДРОКСИМЕТИЛФУРФУРАЛЯ

Natural honey. Methods for determination of hydroxymethylfurfural

Предисловие

Сведения о стандарте

1. Подготовлен Государственным научным учреждением Научно-исследовательским институтом пчеловодства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИП Россельхозакадемии) и Обществом с ограниченной ответственностью «Аналитический центр Апис».

2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (ТК 432).

3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол № 42-2012 от 15 ноября 2012 г.).

За принятие проголосовали:

6. Введен впервые.

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта опубликуется в указателе «Национальные стандарты».

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в указателе «Национальные стандарты», а текст изменений — в информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в информационном указателе «Национальные стандарты».

1. ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ

Настоящий стандарт распространяется на натуральный мед (далее — мед) и устанавливает следующие методы определения гидроксиметилфурфураля:

• высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);
• спектрофотометрический по Уайту (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);
• фотоколориметрический по Винклеру (диапазон измеряемого содержания гидроксиметилфурфураля от 1,0 до 85,0 мг/кг);
• реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль.

2. НОРМАТИВНЫЕ ССЫЛКИ

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3118-77 Реактивы. Кислота соляная. Технические условия

ГОСТ 4207-75 Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия

ГОСТ ISO 5725-1-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ГОСТ ISO 5725-6-2003 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ 9970-74 Резорцин технический. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 19792-2001 Мед натуральный. Технические условия

ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ГИДРОКСИМЕТИЛФУРФУРАЛЯ (ГМФ)

Методы позволяют определять содержание гидроксиметилфурфураля [5-(гидроксиметил-)-фуран-2-карбальдегида (ГМФ)] в натуральном меде.

3.1 Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ)

Метод основан на применении обращенно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Содержание ГМФ фиксируется спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области спектра.

Метод включает следующие этапы:

• построение калибровочной прямой;
• растворение навески меда в дистиллированной воде;
• добавление к раствору меда растворов Карреза I и II для осаждения протеинов и стабилизации ГМФ в водном растворе;
• фильтрацию полученного раствора;
• определение содержания ГМФ на жидкостном хроматографе, снабженном УФ-детектором. Диапазон определения содержания ГМФ в анализируемом меде от 1,0 до 85,0 мг/кг.

Метод применяют при возникновении разногласий в оценке качества продукции.

3.1.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.1.1.1 Хроматограф для жидкостной хроматографии, состоящий:

• из градиентного насоса высокого давления с подачей элюента от 0,1 до 5,0 см3/мин;
• термостата колонок;
• инжектора или автосемплера;
• спектрофотометрического УФ-детектора;
• системы для сбора и обработки данных.

3.1.1.2. Колонка хроматографическая с силикагелем (C18) с привитыми октадецильными группами типа Eclipse XDB-C18 с размером частиц 5 мкм, длиной 150 мм, внутренним диаметром 4,6 мм.

3.1.1.3 Предколонка с картриджем Phenomenex C18 (ODS) 4 x 3 мм.

3.1.1.4. Спектрофотометр, позволяющий проводить измерение оптической плотности при длине волны 210 — 380 нм.

3.1.1.5. Кюветы кварцевые с толщиной слоя раствора, поглощающего свет, равной 1 см.

3.1.1.6. Микрошприцы вместимостью от 10 до 50 мкл для жидкостной хроматографии (в случае использования инжектора).

3.1.1.7 Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С.

3.1.1.8. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 1,0 мг.

3.1.1.9. Система получения воды квалификации для ВЭЖХ Millipore Simplicity или аналогичная.

3.1.1.10. Колбы мерные наливные 2-50-1, 2-100-1 по ГОСТ 1770.

3.1.1.11. Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

3.1.1.12 Пипетки 2-2-25 по ГОСТ 29169.

3.1.1.13. 1-канальные механические дозаторы с варьируемыми объемами дозирования 10 — 100 мкл, 100 — 1000 мкл, 1 — 5 см3 1-го класса точности.

3.1.1.14. Фильтр нейлоновый импортный на шприце с размером пор 0,45 мкм (13 mm Nylon 0,45\mu m (Waters)).

3.1.1.15. Баня водяная или шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.1.1.16 Сито лабораторное из металлической сетки.

3.1.1.17 Шпатель лабораторный.

3.1.1.18 Ацетонитрил для жидкостной хроматографии.

3.1.1.19 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.1.1.20 Вода для лабораторного анализа категории 1.

3.1.1.21. Калий железистосинеродистый 3-водный [K_{4}Fe(CN)_{6} \cdot 3H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 4207.

3.1.1.22. Цинк уксуснокислый 2-водный [Zn(CH_{3}COO)_{2} \cdot 2H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 5823.

3.1.1.23. 5-Гидроксиметилфурфураль (ГМФ) с содержанием основного вещества не ниже 99%, Aldrich, каталожный номер № Н4080-7.

Допускается использование других средств измерений, вспомогательного оборудования по метрологическим, техническим характеристикам не хуже указанных в настоящем стандарте.

Допускается использование других реактивов по качеству и чистоте не ниже вышеуказанных.

3.1.2 Условия хроматографического анализа:

• колонка Eclipse XDB-C18, 5 мкм, 150 x 4,6 мм по 3.1.1.2;
• предколонка с картриджем Phenomenex C18 (ODS) 4 x 3 мм по 3.1.1.3;
• температура — (30 +/- 1) °C;
• элюирование (градиент):

0 — 7 мин — вода/ацетонитрил 97/3,

7,0 — 7,5 мин — вода/ацетонитрил 97/3 — вода/ацетонитрил 0/100,

7,5 — 12,0 мин — вода/ацетонитрил 0/100,

12,0 — 12,5 мин — вода/ацетонитрил 0/100 — вода/ацетонитрил 97/3,

12,5 — 17,0 мин — вода/ацетонитрил 97/3;

• скорость потока — 1,0 см3/мин;
• объем вводимой пробы — 20 мкл;
• детектор — диодная матрица: диапазон одновременно детектируемых длин волн 210 — 380 нм с шагом 2 нм, рабочая длина волны — 283 нм;
• время удерживания ГМФ (7,0 +/- 0,3) мин.

3.1.3 Отбор проб

3.1.3.1 Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.1.4 Подготовка пробы меда к испытанию

3.1.4.1. Закристаллизованный мед предварительно размягчают на водяной бане или в сушильном шкафу (см. 3.1.1.15) при температуре не выше 40 °C и продавливают шпателем (см. 3.1.1.17) через металлическое сито (см. 3.1.1.16).

3.1.4.2. Сотовый мед распечатывают и отделяют от сот при помощи металлического сита без нагревания.

Анализируемую пробу меда тщательно перемешивают не менее 3 мин. При перемешивании обращают внимание на то, чтобы в мед попало меньше воздуха.

3.1.5 Подготовка к проведению анализа

3.1.5.1 Приготовление основного стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 500 мкг/см (раствор А)

(0,050 +/- 0,001) г ГМФ (см. 3.1.1.23) взвешивают и растворяют в воде для лабораторного анализа по 3.1.1.20, количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 100 см3, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор А. Срок хранения раствора А в холодильнике при температуре 4 °C — не более 3 мес.

3.1.5.2 Приготовление рабочего стандартного раствора ГМФ массовой концентрацией 2 мкг/см3 (раствор Б)

Аликвоту 0,2 см3 раствора А переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3, доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Получают раствор Б, который используют при калибровке хроматографа.

Срок хранения раствора Б при комнатной температуре — не более 1 сут.

3.1.5.3 Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б

Определение точной массовой концентрации ГМФ в растворе Б проводят с помощью УФ-спектрофотометра (см. 3.1.1.4), измеряя оптическую плотность при длине волны 285 нм, раствором сравнения служит вода для лабораторного анализа (см. 3.1.1.12).

Точную массовую концентрацию гидроксиметилфурфураля в рабочем стандартном растворе C, мг/дм3 или мкг/см3, рассчитывают по формуле

3.1.5.4 Приготовление раствора Карреза I

3.1.5.5 Приготовление раствора Карреза II

3.1.5.6 Построение калибровочного графика

Таблица 1

Каждый раствор хроматографируют не менее трех раз. При построении калибровочного графика на оси абсцисс откладывают концентрацию рабочего стандартного раствора в мкг/см3, а по оси ординат — средние значения площадей пиков. Калибровочный график должен быть линейным в заданном диапазоне концентраций с коэффициентом корреляции 0,99. Воспроизводимость результатов проверяют следующим образом: вводят не менее пяти инжекций раствора ГМФ с концентрацией 0,5 мкг/см3, относительная среднеквадратичная ошибка S_{r}(x) не должна превышать 2%.

3.1.5.7 Подготовка пробы

(1,000 +/- 0,001) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане по ГОСТ 25336 и растворяют в 25 см3 воды для лабораторного анализа, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3, тщательно перемешивают до растворения и вносят последовательно по 10 мкл растворов Карреза I и II по 3.1.5.4, 3.1.5.5, каждый раз перемешивая смесь. Доводят до метки водой для лабораторного анализа и тщательно перемешивают. Полученную смесь фильтруют через нейлоновый фильтр с размером пор 0,45 мкм (см. 3.1.1.14). Срок хранения пробы при комнатной температуре — 8 ч.

3.1.6 Выполнение измерений и обработка результатов анализа

3.1.6.1 Выполнение измерений

Рисунок 1. Хроматограмма раствора меда, содержащего ГМФ

Разрешение между соседними с ГМФ пиками рассчитывают по формуле

R_{S} = \frac{2(t_{R_{2}} - t_{R1})}{W_{2} - W_{1}} ,(2)

R_{S} должно быть не менее 1,0.

По калибровочному графику, зная площадь пика ГМФ, находят концентрацию ГМФ в анализируемой пробе меда.

3.1.6.2 Обработка результатов анализа

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде M_{\text{ГМФ}},\text{мг}/\text{кг} , рассчитывают по формуле

Примечание. Объемы инжекции раствора пробы меда и калибровочного раствора ГМФ должны быть одинаковыми.

3.1.7 Точность метода

3.1.7.1 Повторяемость результатов

Диапазон измерений, значения характеристик погрешности

Таблица 3

3.1.7.2 Воспроизводимость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений \overline{M_{\text{ГМФ},1}} и \overline{M_{\text{ГМФ},2}} , которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости |\overline{M_{\text{ГМФ},1}} - \overline{M_{\text{ГМФ},2}}| \leq R , R = 2,8\sigma_{R}0,01\overline{M_{\text{ГМФср}}} .

Значения R и \sigma_{\text{к}} представлены в таблицах 2 и 3.

3.1.7.3. При соблюдении всех регламентируемых методикой условий характеристики погрешности результата измерения с вероятностью P = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 2 и 3.

3.1.8 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

(M_{\text{ср}} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг} , P = 0,95,

где \pm \Delta — границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

\pm \Delta = \pm \delta M_{\text{ср}}/100 , значение относительной погрешности \pm \delta представлено в таблице 2.

3.2 Спектрофотометрический метод определения содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по Уайту

Метод основан на определении оптической плотности ГМФ в УФ-диапазоне при длине волны \lambda = 284\text{нм} . Чтобы исключить влияние других компонентов в данной области спектра, определяют:

• оптическую плотность водного раствора меда по сравнению с таким же раствором после добавления в него 0,2%-ного раствора бисульфита натрия при длине волны 284 нм;
• оптическую плотность тех же растворов при длине волны 336 нм.

Содержание ГМФ вычисляют после вычитания оптической плотности фона, измеренной при длине волны 336 нм.

3.2.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы и материалы

3.2.1.1. Спектрофотометр, позволяющий проводить измерения при длинах волн 284 и 336 нм с допустимой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%.

3.2.1.2 Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.2.1.3. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 1,0 мг.

3.2.1.4. Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

3.2.1.5. Пипетки 2-1-1-1 по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

3.2.1.6 Пипетки 1-1-5, 2-2-25 по ГОСТ 29169.

3.2.1.7 Фильтры обеззоленные.

3.2.1.8. Колбы мерные исполнения 1 вместимостью 50 и 100 см3 по ГОСТ 1770.

3.2.1.9 Пробирки вместимостью 15 см3 по ГОСТ 1770.

3.2.1.10 Баня водяная.

3.2.1.11 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.2.1.12. Калий железистосинеродистый 3-водный [K_{4}Fe(CN)_{6} \cdot 3H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 4207.

3.2.1.13. Цинк уксуснокислый 2-водный [Zn(CH_{3}COO)_{2} \cdot 2H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 5823.

3.2.1.14. Натрия бисульфит [NaHSO_{3}] с содержанием основного вещества не ниже 99%, Acros Organics, каталожный номер № 7631-90-5.

3.2.1.15 Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299.

3.2.2 Отбор и подготовка проб

3.2.2.1 Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.2.2.2 Подготовка пробы — по 3.1.4.

3.2.3 Приготовление рабочих растворов

3.2.3.1 Приготовление растворов Карреза I и II

3.2.3.3 Приготовление раствора бисульфита натрия

3.2.4 Проведение анализа и обработка результатов анализа

3.2.4.1 Проведение анализа

(5,00 +/- 0,1) г меда, подготовленного по 3.1.4, взвешивают в стакане (см. 3.2.1.4) вместимостью 50 см3, растворяют в 25 см3 свежекипяченой и остывшей дистиллированной воды и количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см3. Пипеткой добавляют две капли (~ 0,05 см3) раствора Карреза I по 3.1.5.4, перемешивают, добавляют две капли (~ 0,05 см3) раствора Карреза II по 3.1.5.5, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. Для подавления пенообразования пипеткой можно добавить одну каплю этанола (см. 3.2.1.15). Затем раствор фильтруют через бумажный фильтр (см. 3.2.1.7), первые 10 см3 фильтрата отбрасывают и получают раствор В.

В две пробирки (см. 3.2.1.9) пипеткой вносят по 5,0 см3 раствора В. В первую пробирку добавляют 5 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают (анализируемый раствор). Во вторую пробирку добавляют 5 см3 0,2%-ного раствора бисульфита натрия, приготовленного по 3.2.3.2, и тщательно перемешивают (раствор сравнения).

Приготовление анализируемого раствора и раствора сравнения проводят в соответствии с таблицей 4.

3.2.4.2 Измерение оптической плотности

В течение часа измеряют оптическую плотность анализируемой пробы меда относительно раствора сравнения при длинах волн 284 и 336 нм. Если оптическая плотность при длине волны 284 нм превышает значение 0,6, то для получения более низкого значения оптической плотности и повышения точности измерения анализируемый раствор разбавляют дистиллированной водой, а раствор сравнения — бисульфитом натрия в равных объемах.

В случае разбавления применяют формулу

D = \frac{\text{Конечный объект исследуемого раствора}}{10} ,(4)

где D — фактор разбавления;

10 — коэффициент разбавления.

3.2.4.3 Обработка результатов измерений

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде M_{\text{ГМФ}},\text{мг}/\text{кг} , рассчитывают по формуле

A_{336} — оптическая плотность при 336 нм;

149,7 = \frac{126 \cdot 1000 \cdot 1000}{16830 \cdot 10 \cdot 5} ,

5 — объем раствора В, см3;

3.2.5 Точность метода

3.2.5.1 Повторяемость результатов

Таблица 6

3.2.5.2 Воспроизводимость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений M_{\text{ГМФ},1} и M_{\text{ГМФ},2} , которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости

|\overline{M_{\text{ГМФ},1}} - \overline{M_{\text{ГМФ},2}}| \leq R , R = 2,8\sigma_{R}0,01\overline{M_{\text{ГМФср}}}.

Значения R и \sigma_{R} представлены в таблицах 5 и 6.

3.2.5.3. При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью P = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 5 и 6.

3.2.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

(M_{\text{ср}} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг} , P = 0,95,

где \pm \Delta — границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

\pm \Delta = \pm \delta M_{\text{ср}}/100 , значение относительной погрешности \pm \delta представлено в таблице 5.

3.3 Определение содержания гидроксиметилфурфураля (ГМФ) по методу Винклера

Метод основан на колориметрическом определении окраски, полученной в результате взаимодействия ГМФ с барбитуровой кислотой и п-толуидином, относительно раствора сравнения. Диапазон измерений содержания ГМФ в меде от 1,0 до 85 мг/кг.

3.3.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.3.1.1. Колориметр фотоэлектрический, снабженный светофильтром с максимумом пропускания при длине волны (540 +/- 10) нм.

3.3.1.2 Кюветы кварцевые с толщиной поглощающего слоя 1 см.

3.3.1.3. Весы лабораторные по ГОСТ 24104 с пределом абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг.

3.3.1.4 Баня водяная.

3.3.1.5 Секундомер.

3.3.1.6 Электроплитка, шкаф сушильный по ГОСТ 14919.

3.3.1.7. Термометр ртутный стеклянный лабораторный до 100 °C по ГОСТ 28498.

3.3.1.8. Колбы мерные исполнений 1, 2, вместимостью 50, 100 см3, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.1.9. Стаканы стеклянные исполнения 1 вместимостью 50 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.1.10. Пробирки стеклянные с притертой пробкой вместимостью 10 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.1.11. Пипетки 2-2-1-1, 2-2-1-2, 2-2-1-5 по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

3.3.1.12. Пипетки по 2-2-10, 2а-2-20, 2а-2-50 по ГОСТ 29169.

3.3.1.13 Фильтры обеззоленные.

3.3.1.14 Барбитуровая кислота.

3.3.1.15 П-толуидин.

3.3.1.16 Изопропиловый спирт по ГОСТ 9805.

3.3.1.17. Кислота уксусная ледяная, х.ч., по ГОСТ 61.

3.3.1.18. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, освобожденная от кислорода путем кипячения.

3.3.1.19. Калий железистосинеродистый 3-водный [K_{4}Fe(CN)_{6} \cdot 3H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 4207.

3.3.1.20. Цинк уксуснокислый 2-водный [Zn(CH_{3}COO)_{2} \cdot 2H_{2}O] , х.ч., по ГОСТ 5823.

3.3.1.21 Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299.

3.3.2 Подготовка к испытанию

3.3.2.1 Отбор проб — по ГОСТ 19792.

3.3.2.2 Подготовка пробы — по 3.1.4.

3.3.2.3 Приготовление раствора барбитуровой кислоты

3.3.2.4 Приготовление раствора п-толуидина

(10,00 +/- 0,1) г п-толуидина (см. 3.3.1.15) растворяют в 50 см3 изопропилового спирта (см. 3.3.1.16) при температуре 44 °C — 45 °C на водяной бане, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 с небольшим количеством изопропилового спирта, охлаждают до 20 °C и смешивают с 10 см3 ледяной уксусной кислоты (см. 3.3.1.17), доводят до метки изопропиловым спиртом. Раствор ставят в темное место и используют через 24 ч после приготовления. Срок хранения в прохладном темном месте — 1 мес.

3.3.2.5 Приготовление растворов Карреза I и II

Приготовление растворов Карреза I и II — по 3.1.5.4 и 3.1.5.5.

3.3.2.6 Приготовление раствора меда

(10,00 +/- 0,1) г меда, подготовленного по 3.1.4, растворяют в 20 см3 свежепрокипяченной и остывшей дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), количественно переносят в мерную колбу по ГОСТ 1770 вместимостью 50 см3.

Добавляют пипеткой три капли (~ 0,1 см3) раствора Карреза I по 3.1.5.4, перемешивают, добавляют пипеткой три капли (~ 0,1 см3) раствора Карреза II по 3.1.5.5, перемешивают и доводят до метки дистиллированной водой. В случае пенообразования пипеткой добавляют одну каплю этанола (см. 3.3.1.21).

Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр (см. 3.3.1.13), первые 10 см3 фильтрата отбрасывают. Раствор используют немедленно. Хранению не подлежит.

3.3.3 Проведение испытания

В две пробирки (см. 3.3.1.10) наливают по 2,0 см3 раствора меда и 5,0 см3 раствора п-толуидина по 3.3.2.4. В первую пробирку (раствор сравнения) добавляют 1,0 см3 дистиллированной воды (см. 3.3.1.18), перемешивают, во вторую пробирку приливают 1,0 см3 раствора барбитуровой кислоты по 3.3.2.3, осторожно перемешивают. Смешивание растворов проводят быстро в течение 1 — 2 мин.

Измерение оптической плотности анализируемого раствора проводят на фотоэлектроколориметре (см. 3.3.1.1) при длине волны 550 нм относительно раствора сравнения ежеминутно (или чаще) в течение 6 мин. Наибольшая интенсивность окраски достигается через 3 — 4 мин после добавления барбитуровой кислоты.

3.3.4 Обработка результатов

Содержание гидроксиметилфурфураля в анализируемом меде M_{\text{ГМФ}},\text{мг}/\text{кг} , рассчитывают по формуле

192 — постоянный коэффициент, учитывающий фактор разбавления и коэффициент экстинкции, вычисляемый по формуле

192 = \frac{126 \cdot 1000 \cdot 50 \cdot 8 \cdot 1000}{1 \cdot 13125 \cdot 2 \cdot 10 \cdot 1000} ,(7)

где 126 — молекулярный вес ГМФ, г/моль;

1 — толщина слоя раствора в кварцевой кювете, см;

3.3.5 Точность метода

3.3.5.1 Повторяемость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений M_{\text{ГМФ},1} и M_{\text{ГМФ},2} , которые получены в условиях повторяемости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, одна и та же лаборатория, один и тот же оператор, одно и то же оборудование, короткий промежуток времени), не должно превышать предела повторяемости r = 2,8\sigma_{r}0,01M_{\text{ГМФср}} . Значения r и \sigma_{r} представлены в таблицах 7 и 8.

Таблица 8

3.3.5.2 Воспроизводимость результатов

Абсолютное расхождение между результатами двух независимых измерений \overline{M_{\text{ГМФ},1}} и \overline{M_{\text{ГМФ},2}} , которые получены в условиях воспроизводимости (одна и та же методика, идентичный объект испытания, разные лаборатории, разные операторы, различное оборудование), не должно превышать предела воспроизводимости:

|\overline{M_{\text{ГМФ}1}} - \overline{M_{\text{ГМФ}2}}| \leq R , R = 2,8\sigma_{R}0,01\overline{M_{\text{ГМФср}}}.

Значения R и \sigma_{R} представлены в таблицах 7 и 8.

3.3.5.3. При соблюдении всех регламентируемых методикой условий проведения измерений характеристики погрешности результата измерения с вероятностью P = 0,95 не должны превышать значений, приведенных в таблицах 7 и 8.

3.3.6 Форма представления результата

Результат измерения в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде

(M_{\text{ср}} \pm \Delta),\text{мг}/\text{кг} , P = 0,95,

где \pm \Delta — границы характеристик абсолютной погрешности результатов измерения для данного содержания ГМФ, мг/кг;

3.4 Реакция Селиванова-Фиге на гидроксиметилфурфураль (ГМФ)

3.4.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, материалы и реактивы

3.4.1.4 Эфир для наркоза стабилизированный.

3.4.1.5 Резорцин по ГОСТ 9970.

3.4.2 Подготовка к испытанию

3.4.2.1 Приготовление раствора резорцина

3.4.2.2 Проведение испытания