ГОСТ 31506-2012. Межгосударственный стандарт. Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения
(введен в действие Приказом Росстандарта от 16.11.2012 № 918-ст)
(ред. от 23.11.2015)
Примечание
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности молока и молочной продукции» (ТР ТС 033/2013) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 26.05.2014 № 80). Текст данного документа приведен с учетом поправки, опубликованной в «ИУС», № 7, 2015. Изменение № 1 введено в действие с 01.05.2016 Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст.
ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ
flowchart LR n0["ГОСТ Р 53750-2009"]:::rst click n0 "https://bukva.ai/docs/gost-r-53750-2009" "ГОСТ Р 53750-2009. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения (утв. и введен в действие Приказом Ро" n1["ГОСТ 31506-2012"]:::doc click n1 "https://bukva.ai/docs/gost-31506-2012" "ГОСТ 31506-2012. Межгосударственный стандарт. Молоко и молочные продукты. Определение наличия жиров немолочного происхождения (введен в действие Приказом Росстандарта от 16.11.2012" n0 --> n1 classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000; classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000; classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;
Введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2012 г. № 918-ст
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ ЖИРОВ НЕМОЛОЧНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ
Milk and milk products. Determination of non-milk fats
Дата введения <1> 1 июля 2013 года
<1> Дату введения стандарта в действие на территории государств устанавливают их национальные органы по стандартизации.
Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены».
1. Подготовлен Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ «ВНИМИ» Россельхозакадемии).
2. Внесен Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии.
3. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 24 мая 2012 г. № 41).
4. Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 ноября 2012 г. № 918-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 31506-2012 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2013 г.
5. Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р 53750-2009.
Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта публикуется в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальное стандарты».
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты».
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты (далее — продукт) и устанавливает метод определения наличия жиров немолочного происхождения путем сравнения формы кристаллов стеринов в жировой фракции продукта микроскопическим методом.
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты <*>
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.
(сноска введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание
ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3622-68 Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка их к испытанию
ГОСТ 4165-78 Реактивы. Медь (II) сернокислая 5-водная. Технические условия
ГОСТ 4166-76 Реактивы. Натрий сернокислый. Технические условия
ГОСТ 6672-75 Стекла покровные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 9284-75 Стекла предметные для микропрепаратов. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 13928-84 Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки, методы отбора проб и подготовка их к анализу
ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия
ГОСТ 24104-2001 Весы лабораторные. Общие технические требования
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты
(ссылка в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия
ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 5815-77 Реактивы. Ангидрид уксусный. Технические условия
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 5962-2013 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 9147-80 Посуда и оборудование лабораторные фарфоровые. Технические условия
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 24363-88 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.
(ссылка введена Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
(примечание в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
В настоящем стандарте применен следующий термин с соответствующим определением:
3.1. микроскопические методы: Методы, основанные на исследовании различных объектов с помощью микроскопа.
Метод основан на сравнении формы кристаллов стеринов в жировой фракции анализируемого продукта со сравнительным образцом.
5. Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы
Микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 200^{\times} .
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Стекла покровные по ГОСТ 6672.
Весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,001 г.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Термостат, обеспечивающий поддержание температуры (50 +/- 2) °C.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание температуры (80 +/- 5) °C и (102 +/- 2) °C.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Термометр лабораторный нертутный стеклянный по ГОСТ 28498 диапазоном измерений от 0 °C до 100 °C, ценой деления шкалы 1 °C.
Термометр лабораторный ртутный стеклянный типа Б по ГОСТ 28498 с диапазоном измерений от 0 °C до 100 °C, с ценой деления шкалы 1 °C.
Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.
Баня водяная с регулируемым обогревом.
Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.
Устройство перемешивающее лабораторное.
Колба мерная 1-100-2 по ГОСТ 1770.
Цилиндры 1-25-2, 1-50-2, 1-100-2, 1-500-2 по ГОСТ 1770.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Стаканы В-1-50, В-1-200 по ГОСТ 25336.
Воронки В-56-80, В-75-110 по ГОСТ 25336.
Бутыли пластиковые или стеклянные вместимостью 500 см3 с завинчивающимися крышками.
Бумага фильтровальная лабораторная диаметром 15 см, обезжиренная по ГОСТ 12026 ФБ-II, ФС-II.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Палочки стеклянные оплавленные.
Холодильник бытовой электрический любого типа, обеспечивающий поддержание температуры в холодильной камере (4 +/- 2) °C.
Центрифуга со скоростью вращения не менее 5000 об/мин.
Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья по ГОСТ 5962, высшей очистки.
(в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Пентан, ч.д.а., массовой долей основного вещества не менее 90%.
Хлороформ, х.ч., массовой долей основного вещества не менее 90%.
Натрий сернокислый, х.ч., по ГОСТ 4166.
Медь (II) сернокислая 5-водная, х.ч., по ГОСТ 4165, раствор массовой концентрации 70 г/дм3.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также реактивов и материалов по качеству не ниже вышеуказанных.
Баня глицериновая, обеспечивающая поддержание температуры до 150 °C с точностью до 1,0 °C.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Пипетка 1-1-2-5 по ГОСТ 29227.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Колба Кн-1-25-14/23, Кн-1-50-24/29, Кн-1-500-29/32 ТС по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Колба с тубусом (Бунзена) 2-500-29/32 по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Воронка ВД-1-100 ХС по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Воронка ВФ-3-100, с диаметром пор 80 мкм, ХС по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Насос водоструйный по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Холодильник ХШ-1-200-29/32 ХС по ГОСТ 25336.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815, ч.д.а.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Дигитонин, содержание основного вещества не менее 90%, по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт, спиртовой раствор массовой концентрации 10 г/дм3.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Калия гидроокись по ГОСТ 24363, х.ч., раствор с массовой долей 40%.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Эфир диэтиловый, ч.д.а., по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.
(введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
Отбор проб — по ГОСТ 3622, ГОСТ 13928 и ГОСТ 26809 с дополнением.
В случае если анализ не может быть проведен сразу после отбора проб, их рекомендуется хранить не более 10 сут в холодильнике при температуре не выше (4 +/- 2) °C.
7. Порядок подготовки к проведению измерений
7.1 Подготовка пробы продукта
Для выделения жира отбирают пробу продукта, которая должна обеспечить выделение из нее не менее 30 г молочного жира.
7.1.1 Сырое молоко и сырые сливки, питьевое молоко и питьевые сливки
Пробу помещают в центрифужные пробирки или стаканы и центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин.
При этом продукт разделяется на два слоя: верхний — жировой, содержащий почти весь жир, и нижний — белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом охлаждают до температуры (4 +/- 2) °C для перевода жира в твердое состояние. Верхний твердый слой жира осторожно переносят в чистый стакан вместимостью 50 см3, помещают в термостат при температуре (50 +/- 2) °C и выдерживают до прозрачного состояния. Затем жир фильтруют через сухой складчатый фильтр. Жир должен быть прозрачным.
7.1.2 Сухие молочные продукты
В стакан вместимостью 200 см3 взвешивают (100,0 +/- 0,1) г продукта и добавляют 100 см3 дистиллированной воды температурой (40 +/- 2) °C. Смесь тщательно перемешивают стеклянной палочкой до однородной консистенции и оставляют на 10 — 15 мин для набухания белков. Далее вносят безводный сульфат натрия и размельчают с помощью миксера до тех пор, пока не образуется зернистая масса.
7.1.3 Концентрированное молоко, сгущенное молоко и мороженое
В стакан вместимостью 200 см3 взвешивают (100,0 +/- 0,1) г продукта. Мороженое предварительно освобождают от глазури и других отделяемых компонентов. В пробу продукта добавляют 100 см3 дистиллированной воды, нагревают смесь на водяной бане до температуры 75 °C, добавляют 15 см3 раствора сульфата меди (II) и продолжают нагревать до получения сгустка, который фильтруют через фильтровальную бумагу, промывают его теплой водой до обесцвечивания фильтрата. Осторожно сливают осадок, перемешивают его с безводным сульфатом натрия до получения зернистой массы.
7.1.4 Жиры, масло и пасты масляные
В стакан вместимостью 100 см3 помещают (50,0 +/- 0,1) г продукта и выдерживают в термостате при температуре (50 +/- 2) °C до разделения продукта на жир и воду. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40 °C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.
7.1.5 Сметана и продукты на ее основе
В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 см3 помещают пробу продукта, центрифугируют при 5000 об/мин в течение 30 мин. При этом продукт разделяется на два слоя: верхний — жировой, содержащий почти весь жир, и нижний — белковый. Центрифужные емкости с расслоившимся продуктом нагревают до температуры (50 +/- 2) °C. Отделяют верхнюю жировую фракцию при температуре не более 40 °C, аккуратно перелив ее в другой стакан, фильтруют через сухую фильтровальную бумагу так, чтобы вода не попадала на фильтр.
7.1.6 Творог и творожные продукты
В пластиковую или стеклянную бутыль вместимостью 500 см3 помещают (200,0 +/- 0,1) г продукта и добавляют 300 см3 смеси хлороформа и этилового спирта в соотношении 2:1 (по объему). Бутыль закрывают крышкой, закрепляют на лабораторном перемешивающем устройстве и перемешивают в течение 0,5 — 1,0 ч.
Полученный экстракт фильтруют в стакан вместимостью 200 см3 через сухой складчатый фильтр. Для отделения жировой фракции стакан помещают на 1 ч на водяную баню или в сушильный шкаф при температуре (50 +/- 2) °C.
7.1.7 Сыр и сырные продукты
Пробу продукта измельчают в ступке с раствором безводного сульфата натрия до получения зернистой массы.
7.1.8. Из пробы продукта, подготовленной по 7.1.1 - 7.1.7, пентаном экстрагируют жир. Пентан удаляют выпариванием на водяной бане при температуре (75 +/- 2) °C до получения прозрачного жира. Не допускают выплескивания и кипения.
7.2 Приготовление раствора калия гидроокиси с массовой долей 40%
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (40,000 +/- 0,005) г калия гидроокиси, добавляют небольшое количество дистиллированной воды и аккуратно перемешивают. Объем раствора доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают.
Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре (20 +/- 5) °C — не более 1 мес.
(п. 7.2 введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
7.3 Приготовление спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 г/дм3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (1,000 +/- 0,005) г дигитонина и растворяют в небольшом количестве этилового ректификованного спирта. Объем раствора доводят этиловым ректификованным спиртом до метки.
Срок хранения раствора в бутыли из темного стекла при температуре (20 +/- 5) °C — не более 1 мес.
(п. 7.3 введен Изменением № 1, введенным Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
8. Условия проведения измерений
При проведении измерений в лаборатории необходимо соблюдать следующие условия:
- <a id="p100130"></a>температура окружающего воздуха ........ (20 +/- 2) °C;
- <a id="p100131"></a>относительная влажность воздуха ........ от 30% до 80%;
- <a id="p100132"></a>атмосферное давление ................... от 84 до 106 кПа.
(раздел 9 в ред. Изменения № 1, введенного Приказом Росстандарта от 23.11.2015 № 1944-ст)
9.1 В коническую колбу вместимостью 500 см3 помещают от 100 мг до 15 г жира, выделенного в соответствии с требованиями раздела 7, добавляют 10 см3 раствора гидроокиси калия с массовой долей 40% и 20 см3 этилового спирта.
Присоединяют к колбе воздушный холодильник и нагревают смесь на водяной бане до получения прозрачного раствора. Затем продолжают нагревание еще 30 мин или 1 ч.
9.2 Добавляют 60 см3 дистиллированной воды, затем 180 см3 этилового спирта, нагревают смесь на водяной бане до 40 °C. Добавляют 30 см3 спиртового раствора дигитонина массовой концентрации 10 г/дм3, перемешивают вращательными движениями и охлаждают при температуре 5 °C в течение 12 ч.
9.3 Собирают выделившийся дигитонин стерина, пропуская полученный раствор через фильтрующую воронку с диаметром пор 80 мкм и фильтровальную бумагу.
Промывают осадок на фильтре водой температурой 5 °C до прекращения пенообразования, затем промывают последовательно с 25 — 50 см3 этилового спирта и с 25 — 50 см3 диэтилового эфира.
9.4 Полученный осадок вместе с фильтровальной бумагой помещают в сушильный шкаф и высушивают при температуре (102 +/- 2) °C в течение 10 — 15 мин. Сухой остаток на фильтре является дигитонином стерина.
9.5 В коническую колбу вместимостью 25 см3 помещают (100 +/- 5) мг дигитонина стерина, добавляют 1 см3 уксусного ангидрида, нагревают на глицериновой бане при температуре 130 °C — 145 °C до растворения дигитонина, после чего нагревание продолжают еще 2 мин. Затем раствор охлаждают до 80 °C.
Не используют прямой нагрев раствора, так как возможно разбрызгивание.
9.6 К охлажденному до 80 °C раствору (9.5) добавляют 4 см3 этилового спирта, перемешивают, слегка нагревают для растворения стерил ацетата, который может кристаллизоваться.
9.7 Теплый раствор фильтруют через бумажный фильтр средней фильтрации, промывая этиловым спиртом. Полученный фильтрат постепенно нагревают до слабого кипения. В кипящий раствор аккуратно по каплям из пипетки с одновременным энергичным встряхиванием добавляют 1,0 — 1,5 см3 дистиллированной воды до такого состояния, пока стерил ацетат не начнет выпадать в осадок, но при этом еще возвращаясь в раствор (до насыщенного раствора). В образующийся осадок стерил ацетата добавляют несколько капель этилового спирта. Охлаждают на воздухе 2 ч и затем окончательно в холодной воде 30 мин.
9.8 Выделившийся стерил ацетат фильтруют через фильтровальную бумагу высокой фильтрации, применяя фильтрующее устройство (колба Бунзена и воронка Бюхнера) с водоструйным насосом, и промывают кристаллы 1 см3 этилового спирта (80% об.).
9.9 Выделившиеся кристаллы для повторного растворения нагревают с 1 см3 этилового спирта. Охлаждают 15 мин на воздухе, затем 5 мин в холодной воде. Выкристаллизовавшийся стерил ацетат фильтруют по 9.8.
9.10 При необходимости (для лучшей очистки) рекристаллизацию и фильтрацию повторяют 3 — 4 раза.
9.11 В коническую колбу вместимостью 25 см3 помещают 10 мг стерил ацетата, добавляют 1 см3 этилового спирта, аккуратно перемешивают и добавляют 1 — 2 капли раствора гидроокиси калия с массовой долей 40%.
9.12 Раствор нагревают на кипящей водяной бане до начала закипания и растворения стерил ацетата.
9.13 Добавляют 10 см3 дистиллированной воды. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 100 см3, добавляют 25 см3 диэтилового эфира и встряхивают. После разделения смеси водный слой удаляют.
9.14 Оставшийся слой промывают тремя порциями по 5 см3 дистиллированной воды. Затем переносят в коническую колбу вместимостью 50 см3 и выпаривают насухо.
9.15 Остаток растворяют в 10 см3 этанола (80% об.). Каплю раствора помещают на предметное стекло для микроскопии, равномерно распределяя ее по поверхности, закрывают покровным стеклом, выдерживают до начала кристаллообразования по краям предметного стекла, переворачивают и смотрят под микроскопом по мере кристаллизации при линейном увеличении в 200 раз. Формы кристаллов стеринов оценивают визуально, сравнивая их со сравнительным образцом.
Формы сравнительных образцов представлены в Приложении А.
10. Обработка результатов измерений
Если при визуальном осмотре под микроскопом кристаллы стеринов имеют форму параллелограмма с тупым углом 100° (см. Приложение А), что характерно для холестерина (cholesterol), то считают, что анализируемая проба не содержит растительного жира.
Если при визуальном осмотре под микроскопом хотя бы отдельные кристаллы стеринов имеют удлиненную шестиугольную форму с вершиной 108° (см. Приложение А), характерную для растительных стеринов (phytosterol), или кристаллы имеют перевернутый угол («ласточкин хвост») (см. Приложение А), типичный для смеси холестерина и растительных жиров, то считают, что анализируемая проба содержит растительный жир.
При выполнении работ необходимо соблюдать следующие требования:
- помещение лаборатории должно быть оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных ГОСТ 12.1.005;
- требования техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.007;
- требования техники безопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.
ФОРМЫ КРИСТАЛЛОВ СТЕРИНОВ СРАВНИТЕЛЬНЫХ ОБРАЗЦОВ
А.1. Формы кристаллов стеринов приведены на рисунке А.1.
