ГОСТ 29138-91. Межгосударственный стандарт. Мука, хлеб и хлебобулочные изделия пшеничные витаминизированные. Метод определения витамина B1 (тиамина)
(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 29.11.1991 № 1835)
Примечание
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 24.12.2019 № 236). Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов, а в случае их отсутствия — национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 16.10.2018 № 168). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза «О безопасности отдельных видов специализированной пищевой продукции, в том числе диетического лечебного и диетического профилактического питания» (ТР ТС 027/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 18.10.2012 № 191). Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента «О безопасности пищевой продукции» (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 № 880). Документ был включен в Перечень используемых в Республике Казахстан документов в области стандартизации, а также документов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения обязательных требований, предусмотренных перечнем, утв. Постановлением Правительства РФ от 09.03.2010 № 132, и осуществления оценки соответствия в отношении отдельных видов продукции и связанных с требованиями к ней процессов (Приказ Ростехрегулирования от 26.03.2010 № 867). С 01.07.2003 до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в п. 1 ст. 46 Федерального закона от 27.12.2002 № 184-ФЗ. Документ введен в действие с 01.01.1993.
стандартизации и метрологии СССР от 29 ноября 1991 г. № 1835
МУКА, ХЛЕБ И ХЛЕБОБУЛОЧНЫЕ ИЗДЕЛИЯ ПШЕНИЧНЫЕ ВИТАМИНИЗИРОВАННЫЕ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА B_{1} (ТИАМИНА)
Wheat vitaminized flour, bread and bakery products.
9209
Дата введения 1 января 1993 года
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. Разработан и внесен ВНПО «Зернопродукт».
Разработчики: Г.С. Зелинский, канд. техн. наук; К.А. Чурусов, канд. техн. наук (руководитель темы); А.Ф. Шухнов, канд. техн. наук; А.М. Каменецкая, канд. техн. наук; Н.А. Игорянова, канд. техн. наук; А.И. Быстрова; Л.И. Гусева, канд. биол. наук; Е.Н. Степанова, канд. с.-х. наук.
2. Утвержден и введен в действие Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 29.11.91 № 1835.
| Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта |
| ГОСТ 199-78 | 2 |
| ГОСТ 1770-74 | 2 |
| ГОСТ 3118-77 | 2 |
| ГОСТ 4025-95 | 2 |
| ГОСТ 4206-75 | 2 |
| ГОСТ 4328-77 | 2 |
| ГОСТ 4453-74 | 2 |
| ГОСТ 5667-65 | 1.2 |
| ГОСТ 5789-78 | 2 |
| ГОСТ 6709-72 | 2 |
| ГОСТ 7128-91 | 1.4 |
| ГОСТ 8494-96 | 1.3 |
| ГОСТ 9536-79 2 | |
| ГОСТ 12026-76 | 2 |
| ГОСТ 21400-75 | 2 |
| ГОСТ 25336-82 | 2 |
| ГОСТ 27668-88 | 1.1 |
| ОСТ 64-037-87 | 2 |
| ТУ 09-664-77 | 2 |
| ТУ 23.2.2068-89 | 2 |
| ФС 42-2413-85 | 2 |
| 5. Переиздание. | |
Настоящий стандарт распространяется на витаминизированные пшеничные муку, хлеб и хлебобулочные изделия, обогащаемые смесью витаминов, и устанавливает метод определения в продукте суммарного количества витамина B_{1} (тиамина) — свободной и связанной форм.
Сущность метода заключается в освобождении связанных форм тиамина гидролизом, экстракционной очистке полученного гидролизата от соединений, мешающих флюорометрическому определению, количественном переводе в щелочной среде тиамина в тиохром, экстракции тиохрома и измерении интенсивности флюоресценции тиохрома в сравнении со стандартным раствором с помощью флюорометра.
1. ОТБОР ПРОБ
1.1 Отбор проб муки — по ГОСТ 27668.
1.2. Отбор проб хлеба и хлебобулочных изделий — по ГОСТ 5667.
1.3 Отбор проб сухарей — по ГОСТ 8494.
1.4 Отбор проб бараночных изделий — по ГОСТ 7128.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Флюорометр лабораторный электронный марки ЭФ-ЗМА или медицинский марки ФМ-Ц-2 или других марок, обеспечивающий длины волн возбуждения в области 360 — 390 нм и флюоресценции 400 — 450 нм.
Мельница типа ЛЗМ или аналогичного типа, обеспечивающая необходимую степень измельчения продукта.
Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025.
Термостат, обеспечивающий создание и поддержание температуры 37 °C с погрешностью +/- 2 °C.
Баня глицериновая или песчаная.
Весы лабораторные общего назначения с допускаемой погрешностью взвешивания +/- 0,01 г.
Весы лабораторные общего назначения с допускаемой погрешностью взвешивания +/- 0,001 г.
Полотно решетное типа I № 11 по ТУ 23.2.2068.
Колба типа II, ТХС, исполнений 1, 2 вместимостью 250 см3 по ГОСТ 25336.
Колба коническая типа \text{К}_{\text{н}} , исполнений 1, 2 вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.
Колбы мерные исполнения 2 вместимостью 100, 500 и 1000 см3 по ГОСТ 1770.
Цилиндры исполнения 2 и 4 вместимостью 25 и 250 см3 по ГОСТ 1770.
Воронка делительная исполнения 3 вместимостью 250 см3, из химически стойкого стекла группы ХС, по ГОСТ 25336.
Воронки лабораторные диаметром 35 и 75 мм по ГОСТ 25336.
Стаканы химические типов В и Н, исполнений 1, 2 вместимостью 25 см3 по ГОСТ 25336.
Палочки стеклянные по ГОСТ 21400.
Пипетки исполнений 4, 5 вместимостью 1 и 2 см3.
Пипетки исполнений 6, 7 вместимостью 5 и 10 см3.
Склянки из темного стекла с притертыми пробками вместимостью 300 — 1000 см3.
Амилоризин П10Х по ОСТ 64-037.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч. или ч.д.а., раствор концентрации 0,1 моль/дм3.
Спирт изобутиловый по ГОСТ 9536, х.ч. или бутиловый по ТУ 09-664.
Толуол по ГОСТ 5789, ч.д.а.
Калий железосинеродистый по ГОСТ 4206, х.ч., или ч.д.а., раствор концентрации 0,01 г/см3; хранят в темной склянке не более 2 сут.
Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч. или ч.д.а., раствор концентрации 0,3 г/см3.
Натрий уксуснокислый по ГОСТ 199, х.ч. или ч.д.а., насыщенный водный раствор.
Уголь активный осветляющий древесный по ГОСТ 4453.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Бараночные изделия и сухари измельчают на лабораторной мельнице так, чтобы весь размолотый продукт прошел при просеивании через решетное полотно с отверстиями диаметром 1,1 мм.
Хлебные изделия разрезают на четыре части по двум взаимно перпендикулярным направлениям. Затем берут две диаметрально противоположные четверти, которые разрезают ножом на небольшие ломтики. Последние пропускают через мясорубку или тщательно измельчают ножом.
Измельченную пробу тщательно перемешивают.
3.2 Приготовление основного стандартного раствора тиамина
Навеску тиамина хлорида массой 0,126 г <*> помещают в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают, переносят в склянку из темного стекла с притертой пробкой и добавляют 0,5 см3 толуола.
<*> Данная навеска тиамина хлорида соответствует 0,100 г основного биологически активного вещества (тиамина).
Концентрация основного стандартного раствора тиамина составит 100 мкг/см3.
3.3 Приготовление рабочего стандартного раствора тиамина
3 — 5 см3 основного стандартного раствора тиамина помещают в химический стакан и выдерживают до приобретения раствором комнатной температуры.
Затем 1 см3 основного стандартного раствора тиамина, отобранного пипеткой вместимостью 1 см3, переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.
Концентрация рабочего стандартного раствора тиамина составит 0,2 мкг/см3.
Раствор готовят в день проведения анализа.
3.4 Приготовление окислительной смеси
К 2 см3 раствора железосинеродистого калия концентрации 0,01 г/см3 прибавляют 10 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0,3 г/см3 и тщательно перемешивают. Смесь пригодна к употреблению в течение 2 — 3 ч.
3.5 Очистка бутилового и изобутилового спиртов
Перед проведением анализа измеряют флюоресценцию используемых спиртов в сравнении с дистиллированной водой. При наличии флюоресценции спирт очищают.
Для этого к 1 дм3 спирта прибавляют навеску активного угля массой от 15 до 20 г, встряхивают в течение 30 мин на смесителе-качалке, оставляют на сутки, затем декантируют, фильтруют и перегоняют на глицериновой или песчаной бане при температуре 117 °C (бутанол) и 108 °C (изобутанол).
После очистки проверяют отсутствие флюоресценции спирта в сравнении с дистиллированной водой.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1 Тиамин определяют в двух параллельных навесках продукта.
4.2 Гидролиз
Навеску продукта массой 10,0 г <*> помещают в колбу вместимостью 250 см3 и приливают 150 см3 раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3.
<*> Масса навески должна обеспечить концентрацию тиамина в измеряемом растворе в диапазоне 0,10 — 0,40 мкг/см3, что при данных навеске и разведениях будет соответствовать содержанию тиамина в продукте 0,25 — 1,00 мг/100 г.
Гидролиз осуществляют на кипящей водяной бане в течение 40 мин, закрыв горло колбы воронкой диаметром 35 мм.
Содержимое колбы следует периодически перемешивать, особенно в первые 5 мин.
По окончании гидролиза колбу охлаждают до комнатной температуры и с помощью насыщенного водного раствора уксуснокислого натрия доводят pH гидролизата до (4,5 +/- 0,1) (потенциометрически).
После этого к гидролизату добавляют навеску амилоризина массой 0,10 г, 2 — 3 капли толуола и затем колбу помещают в термостат на 14 — 16 ч при температуре 37 °C. После этого гидролизат охлаждают, доводят объем до 250 см3 дистиллированной водой и фильтруют. В фильтрате определяют содержание тиамина.
Если имеется необходимость прервать анализ на 1 — 2 дня, то перед доведением объема до 250 см3 гидролизат кипятят 5 мин, охлаждают, доводят объем до 250 см3 и фильтруют. До проведения анализа фильтрат хранят в холодильнике в плотно закрытой колбе.
4.3 Очистка фильтрата от примесей, мешающих определению
В день проведения испытания 25 см3 фильтрата переносят в делительную воронку вместимостью 250 см3, добавляют 25 см3 бутилового или изобутилового спирта. Воронку встряхивают в течение 1 мин и после отстаивания для разделения слоев водный слой (нижний) собирают в колбу вместимостью 100 см3.
Аналогичным образом поступают с приготовленным рабочим стандартным раствором тиамина.
4.4 Окисление тиамина в тиохром
В три конические колбы отмеривают по 5 см3 очищенного гидролизата. Затем в две из них добавляют по 1,2 см3 окислительной смеси, а в третью — 1,2 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0,3 г/см3 (контрольный раствор к испытуемому раствору). Все колбы энергично встряхивают, прибавляют по 10 см3 изобутилового спирта и снова энергично встряхивают в течение 1 мин для извлечения тиохрома. Водный и спиртовой слои разделяют отстаиванием в темном месте. Затем спиртовой слой (верхний) сливают в кюветы для измерения интенсивности флюоресценции.
Аналогичным образом поступают с очищенным рабочим стандартным раствором тиамина.
Время с момента начала экстракции тиохрома до измерения его флюоресценции не должно превышать 30 мин.
4.5 Измерение флюоресценции тиохрома
При работе на флюорометре марки ЭФ-ЗМА устанавливают светофильтры для B_{1} , стрелка прибора выводится на нулевое деление по воздуху, затем на деление 50 единиц — по экстракту тиохрома из рабочего стандартного раствора.
При работе на флюорометре марки ФМ-Ц-2 устанавливают светофильтры, дающие длины волн возбуждения 360 нм и флюоресценции — 420 нм.
Измерение интенсивности флюоресценции растворов осуществляют по отношению к бутиловому или изобутиловому спирту.
При работе на флюорометрах других марок интенсивность флюоресценции тиохрома измеряют при светофильтрах, дающих диапазон длин волн возбуждения в области 360 — 390 нм и флюоресценции — 400 — 450 нм.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1 Массовую долю тиамина (X), мг на 100 г продукта, вычисляют по формуле
X = \frac{(A - A_{1}) \cdot X_{1} \cdot V}{(B - B_{1}) \cdot V_{1} \cdot m \cdot 10} \text{или }X = \frac{(A - A_{1})}{(B - B_{1}) \cdot 2} ,
где A — интенсивность флюоресценции испытуемого раствора, среднее из двух параллельных определений, ед. прибора;
A_{1} — интенсивность флюоресценции контрольного раствора к испытуемому раствору, ед. прибора;
B — интенсивность флюоресценции стандартного раствора тиамина, среднее из двух параллельных определений, ед. прибора;
B_{1} — интенсивность флюоресценции контрольного раствора к стандартному раствору тиамина, ед. прибора;
X_{1} — массовая доля тиамина в используемом для окисления тиамина в тиохром объеме стандартного раствора, мкг;
m — масса пробы продукта, используемая для испытания, г;
V — общий объем гидролизата, см3;
V_{1} — объем испытуемого раствора, используемый для окисления тиамина в тиохром, см3;
10 — коэффициент пересчета из мкг/г в мг/100 г продукта;
2 — коэффициент, включающий постоянные величины: X_{1} = 1\text{мкг} , m = 10 г; V = 250 см3; V_{1} = 5\text{см}^{3} и коэффициент пересчета = 10.
5.2. Вычисления проводят до третьего десятичного знака с последующим округлением до второго десятичного знака.
Полученный результат должен быть в диапазоне 0,25 — 1,00 мг/100 г продукта. В противном случае испытание повторяют с уточненной навеской продукта (см. п. 4.2).
5.3. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение (\overline{X}) результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение (d) между которыми в мг/100 г не должно превышать 0,15\overline{X} .
5.4. При контрольных определениях допускаемое расхождение (D) между контрольным и первоначальным определениями в мг/100 г не должно превышать 0,42x (x — среднее арифметическое значение результатов контрольного и первоначального определений).
При контрольном определении за окончательный результат испытания принимают результат первоначального определения, если расхождение между результатами контрольного и первоначального определений не превышает допускаемого значения; если расхождение превышает допускаемое значение, то за окончательный результат испытаний принимают результат контрольного определения.