ГОСТ 28805-90. Государственный стандарт Союза ССР. Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов

(утв. и введен в действие Постановлением Госстандарта СССР от 21.12.1990 № 3230)

Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного

МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ И ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ОСМОТОЛЕРАНТНЫХ ДРОЖЖЕЙ И ПЛЕСНЕВЫХ ГРИБОВ

Food products. Methods for detection and determination of osmotolerantic yeast and mould quantity

ГОСТ 28805-90

Группа Н09

ОКСТУ 9109

Срок действия

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

Обозначение НТД, на который дана ссылка	Номер раздела, пункта
ГОСТ 22-78 2
ГОСТ 6672-75	2
ГОСТ 9225-84	1
ГОСТ 9284-75	2
ГОСТ 10444.1-84	2, 3.3.1
ГОСТ 10444.3-85	5.3
ГОСТ 10444.12-88	3.1.2, 3.3.2, 4.8, 5.2
ГОСТ 24104-88	2
ГОСТ 26668-85 1
ГОСТ 26669-85	1, 4.1
ГОСТ 26670-85	4.3, 5.4
	Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов посевом пищевого продукта или его разведения в агаризованную среду, определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта.
Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в селективную питательную среду, культивировании посевов в оптимальных условиях, подсчете количества или определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов. Метод определения количества посевом в агаризованную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г более 150 или в 1 см3 более 15 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащих в 1 г более 50 или в 1 см3 более 5 осмотолерантных плесневых грибов.
Метод НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150, но в 10 г более 3 или в 1 см3 менее 15, но в 100 см3 более 3 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащие в 1 г менее 50, но в 10 г более 3 или в 1 см3 менее 5, но в 100 см3 более 3 осмотолерантных плесневых грибов.

1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ

Отбор и подготовка проб пищевых продуктов — по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669. Отбор и подготовка проб сгущенных молочных консервов с сахаром — по ГОСТ 9225.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности +/- 2 мг (для взвешивания реактивов);

весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности +/- 10 мг (для взвешивания продукта);

микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 90 - 900^{x} ;

стекла предметные по ГОСТ 9284;

стекла покровные по ГОСТ 6672;

термостат с диапазоном рабочих температур 28 — 55 °C, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью +/- 1 °C;

метиленовый синий;

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1 Приготовление растворов

3.1.3. Приготовление раствора метиленового синего концентрацией 10 г/дм3: 1 г метиленового синего переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доливают до метки.

Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.

3.1.2 Растворы антибиотиков готовят по ГОСТ 10444.12.

3.2 Приготовление питательных сред

3.2.1. Среда жидкая: 610,0 г сахара-рафинада, 20,0 г глюкозы и 25 см3 дрожжевого экстракта постепенно при нагревании на водяной бане добавляют к 345 см3 дистиллированной воды. После расплавления сахаров смесь охлаждают до (50 +/- 5) °C. Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял 5,8 +/- 0,1 (в пересчете на (25 +/- 1) °C). Питательную среду разливают в колбы и (или) пробирки и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

3.2.2. Среда агаризованная: 15,0 г агара добавляют к 345 см3 дистиллированной воды и оставляют на 30 мин для набухания агара.

Затем расплавляют при нагревании и добавляют 20,0 г глюкозы, 25 см3 дрожжевого экстракта. В полученной смеси при нагревании на водяной бане постепенно растворяют 610,0 г сахара-рафинада.

После расплавления сахара смесь охлаждают до (50 +/- 5) °C.

Устанавливают pH среды таким образом, чтобы он составлял 5,8 +/- 0,1 (в пересчете на (25 +/- 1) °C). Питательную среду разливают в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

3.3 Приготовление питательных сред, применяемых для испытания сгущенных молочных консервов с сахаром

3.3.1 Солодовое агаризованное сусло с сахарозой

Приготовление сусла с сахарозой: к 500 см3 солодового сусла, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 420,0 г сахара-рафинада, нагревая перемешивают до полного его растворения, фильтруют, охлаждают до (50 +/- 5) °C. Устанавливают с помощью молочной кислоты pH таким образом, чтобы он составлял 3,6 +/- 0,1 (в пересчете на (25 +/- 1) °C). Сусло с сахарозой разливают по 60 см3 в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Приготовление агаризованного сусла: к 500 см3 солодового сусла с pH 3,6 +/- 0,1 добавляют 30,0 г агара, нагревают, при перемешивании расплавляют агар. Среду фильтруют и разливают по 40 см3 в колбы, затем стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Непосредственно перед посевом агаризованное сусло расплавляют на водяной бане, а сусло с сахарозой нагревают до температуры (50 +/- 5) °C и две эти части смешивают.

3.3.2. Питательные среды с антибиотиками и сахарозой: к 1 дм3 дистиллированной воды добавляют 20,0 г агара и оставляют на 30 мин для набухания агара, затем добавляют 10,0 г пептона и, постоянно перемешивая, нагревают до полного расплавления агара, добавляют 40,0 г мальтозы или глюкозы и 450,0 г сахара-рафинада, перемешивают до полного растворения составных частей, при наличии осадка фильтруют. Устанавливают с помощью молочной кислоты pH таким образом, чтобы он составлял 6,5 +/- 0,1 (в пересчете на (25 +/- 1) °C).

Питательную среду разливают по 100 см3 в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.

Непосредственно перед использованием к среде добавляют в соответствии с ГОСТ 10444.12 растворы антибиотиков.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см3) предполагаемое количество осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов или количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.

4.2. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов по методу НВЧ высевают в трехкратной повторности три последовательных навески продукта и (или) разведения продукта, отличающиеся по количеству продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) разведение продукта высевают в колбу или пробирку с питательной средой, приготовленной по п. 3.2.1.

Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения и питательной среды 1:9.

4.3. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов методом посева в агаризованные среды по 1 см3 навески продукта или его разведения вносят одновременно в две чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 агаризованной питательной средой, приготовленной по п. 3.2.2.

4.4. При определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении, эту навеску или разведение вносят в жидкую питательную среду по п. 3.2.1 (в соотношении 1:9) или высевают по п. 4.3 в агаризованную среду.

При испытании сгущенных молочных консервов с сахаром навеску продукта массой (10,0 +/- 0,1) г тщательно перемешивают со 100 см3 охлажденной до (45 +/- 2) °C агаризованной питательной средой по п. 3.3.1 или п. 3.3.2. Смесь разливают в 6 — 7 чашек Петри.

4.5 Посевы инкубируют в течение 7 сут при температуре (30 +/- 1) °C.

4.6. Через 3 сут проводят предварительную оценку результатов инкубирования посевов, а через 7 сут — окончательную.

Колонии осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.

Рост осмотолерантных дрожжей на агаризованных питательных средах сопровождается образованием выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Рост осмотолерантных дрожжей на жидких питательных средах сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.

Рост осмотолерантных плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.

4.7. Для подсчета количества отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

4.8. При необходимости для разделения дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из культуральной жидкости или отдельных колоний готовят мазки и окрашивают их раствором метиленового синего. На подсушенный мазок наносят раствор метиленового синего, приготовленного по п. 3.1.1, выдерживают 5 мин, сливают краску, высушивают на воздухе и микроскопируют для определения дрожжевых клеток или гифов плесневых грибов.

Допускается проводить микробиологические исследования по ГОСТ 10444.12.

4.9. Колбы (пробирки), в которых обнаружен рост осмотолерантных дрожжей и (или) плесневых грибов, считают положительными.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1 Результаты испытания оценивают на каждой пробе отдельно.

5.2. Пересчет количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов на 1 г (см3) продукта проводят по ГОСТ 10444.12.

5.3. Наиболее вероятное число (НВЧ) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в 1 г (см3) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок), пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 10444.3.

5.4. Результаты определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов записывают по ГОСТ 26670.

5.5. Результаты выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов с указанием навески продукта записывают следующим образом:

осмотолерантные дрожжи и (или) плесневые грибы обнаружены или не обнаружены.

---