ФС.2.1.0099.18. Фармакопейная статья. Желатин

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Желатин Gelatina	ФС.2.1.0099.18 Взамен ГФ X, ст. 309

Желатин представляет собой очищенный белок, получаемый неполным щелочным или неполным кислотным, или ферментативным гидролизом животного коллагена (включая рыбий и птичий). В результате гидролиза получают гелеобразующий или негелеобразующий желатин. Требования данной статьи распространяются на оба сорта желатина.

<*> Изоэлектрическая точка для желатина, полученного неполным кислотным гидролизом, при pH 6,0 и 9,5. Изоэлектрическая точка для желатина, полученного неполным щелочным гидролизом при pH 4,7 и 5,6.

Описание. Твердое вещество от светло-желтого до желтого цвета, в виде полупрозрачных листков, кусков, гранул или порошка.

Растворимость. Набухает в холодной воде и при нагревании образует коллоидный раствор, переходящий при охлаждении в гель. Растворим в горячей воде. Практически нерастворим в органических растворителях.

Подлинность.

1. Качественная реакция (биуретовая реакция). 1 г субстанции растворяют в воде, свободной от углерода диоксида, при температуре около 55 °C, доводят водой до 100 мл и выдерживают раствор при этой температуре до испытания.

К 2 мл полученного раствора прибавляют 1 каплю 12,5% раствора меди сульфата. Перемешивают и прибавляют 0,5 мл 8,5% раствора натрия гидроксида; должно появиться фиолетовое окрашивание.

2. Качественная реакция. 0,2 г субстанции растворяют в 20 мл воды при нагревании до температуры 60 — 70 °C. К 2 мл полученного раствора прибавляют 0,5 мл 5% раствора танина; должен образоваться хлопьевидный осадок.

3. Качественная реакция (для не образующего гель желатина). 0,5 г испытуемого образца помещают в колбу вместимостью 250 мл. Прибавляют 10 мл воды и 5 мл концентрированной серной кислоты. Накрывают часовым стеклом и нагревают при температуре 105 °С течение 4 часов. После охлаждения прибавляют 200 мл воды. Доводят 20% раствором натрия гидроксида до pH 6,0 — 8,0. К 2 мл полученного раствора прибавляют 2 мл свежеприготовленного раствора хлорамина 14 г/л в фосфатном буферном растворе pH 6,8. Перемешивают и выдерживают 20 минут. Прибавляют 2 мл свежеприготовленного цветного реагента (готовят непосредственно перед использованием растворяя 1,0 г диметиламинобензальдегида в 3,5 мл хлорной кислоты и медленно добавляя 6,5 мл 2-пропанола). Перемешивают и нагревают на водяной бане в течение 15 минут; должно появиться красное окрашивание.

4. Качественная реакция. 0,5 г испытуемой субстанции помещают в пробирку с внутренним диаметром 15 мм и прибавляют 10 мл воды. Выдерживают 10 минут при комнатной температуре, затем нагревают при 60 °C в течении 15 минут и выдерживают в течение 6 ч при 0 °C. Переворачивают пробирку. Негелеобразующий желатин вытекает сразу, а гелеобразующий желатин удерживается в пробирке.

Посторонний запах. 10 г субстанции растворяют в 100 мл горячей воды. Сразу после приготовления не должно быть гнилостного запаха.

pH. От 3,8 до 7,6 (1% раствор при температуре 55 °C, ОФС «Ионометрия», метод 3).

Электропроводность. Не более 1 мСм·см-1 (1% раствор при температуре 30 +/- 1,0 °C, ОФС «Электропроводность», без использования температурного компенсатора).

Серы диоксид. Не более 0,005% (50 ppm). Определение проводят методом титриметрии.

В круглодонную колбу вместимостью 1 л помещают 50 г субстанции, прибавляют 250 мл воды и выдерживают в течение 15 мин для набухания. Прибавляют еще 250 мл воды, 25 мл фосфорной кислоты и подвергают смесь перегонке с водяным паром. Отгон собирают в приемник со 150 мл воды. Перегонку проводят в течение 1 ч, регулируя струю водяного пара таким образом, чтобы получилось около 400 мл отгона.

К отгону прибавляют 1,0 мл 0,1% раствора крахмала и титруют 0,05 М раствором йода до синего окрашивания.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 3,203 мг серы диоксида SO2.

Пероксиды. Не более 0,001% (10 ppm). Определение проводят с использованием пероксидных тест-полосок. Используют готовые полоски с соответствующей шкалой от 0 до 25 ppm.

Органический окислительно-восстановительный индикатор тест-полоски при окислении приобретает синее окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна количеству пероксида и для определения его концентрации может сравниваться с цветовой шкалой, прилагаемой к тест-полоскам.

Пригодность испытания. Погружают тест-полоску на 1 с в эталонный раствор водорода пероксида (10 ppm H2O2). Вынимают тест-полоску, стряхивают избыток жидкости и через 15 с сравнивают с цветовой шкалой. Цвет тест-полоски должен соответствовать концентрации 10 ppm. В противном случае испытание является недействительным.

Испытание. 20,0 +/- 0,1 г испытуемой субстанции помещают в химический стакан и прибавляют 80,0 +/- 0,2 мл воды, свободной от углерода диоксида. Перемешивают до полного увлажнения желатина и выдерживают образец при комнатной температуре в течение 1 — 3 ч. Накрывают стакан часовым стеклом. Помещают стакан в водяную баню с температурой 65 +/- 2 °C на 20 +/- 5 мин для растворения образца. Перемешивают содержимое стакана стеклянной палочкой до получения однородного раствора. Погружают тест-полоску на 1 с в испытуемый раствор. Вынимают тест-полоску, стряхивают избыток жидкости и через 15 с сравнивают с цветовой шкалой. Для расчета содержания пероксида в испытуемом образце в ppm концентрацию, определенную по цветовой шкале, умножают на 5.

Прочность геля (число Блюм). От 80% до 120% от заявленного. Сила (прочность) студня выражается в массе в граммах, необходимой для такой силы, которая при приложении на плунжер диаметром 12,7 мм дает погружение 4 мм в студень с концентрацией 6,67% (м/м), выдержанный при 10 °C.

Оборудование. Текстурный анализатор, или желометр с цилиндрическим плунжером диаметром 12,7 +/- 0,1 мм с ровной напорной поверхностью с круглыми краями и колбой с внутренним диаметром 59 +/- 1 мм и высотой 85 мм. Прибор регулируют в соответствии с инструкцией к прибору.

Параметры настройки: расстояние 4 мм, скорость 0,5 мм/с.

Методика. По 7,5 г испытуемого образца помещают в каждую колбу. Добавляют 105 мл воды. Каждую колбу накрывают часовым стеклом и оставляют на 1 — 4 ч. Нагревают на водяной бане в течение 15 мин при температуре 65 +/- 2 °C, помешивая стеклянной палочкой. Полученный раствор должен быть однородным, капли конденсата должны отсутствовать. Раствор охлаждают при комнатной температуре в течение 15 мин и переносят в термостат с температурой 10,0 +/- 0,1 °C и горизонтальной платформой для колб. Закрывают колбы резиновыми пробками и оставляют на 17 +/- 1 ч. Затем сосуды вынимают из термостата и быстро протирают насухо. Последовательно устанавливают сосуды на платформу прибора, настроив так, чтобы плунжер соприкасался с поверхностью студня без усилий. Проводят измерение. За результат принимают среднее значение двух измерений.

Железо. Не более 0,003% (30 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 248,3 нм.

Испытуемый раствор. 5,00 г субстанции помещают в коническую колбу, прибавляют 10 мл хлористоводородной кислоты концентрированной. Закрывают колбу и нагревают на водяной бане при температуре от 75 °C до 80 °С в течение 2 ч, охлаждают и доводят содержимое колбы до 100,0 г водой, свободной от диоксида углерода.

Стандартный раствор (8 ppm). 8 мл стандартного образца железа 1 г/л в 0,5 М азотной кислоте помещают в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки. Допускается использование коммерческих стандартов.

Хром. Не более 0,001% (10 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 357,9 нм.

Испытуемый раствор. Готовят, как описано в испытании на железо.

Стандартный раствор (100 ppm Cr). 0,283 г K2Cr2O7, помещают в мерную колбу вместимостью 1 л, растворяют в 0,5 М растворе азотной кислоты и доводят объем тем же растворителем до метки. Допускается использование коммерческих стандартов.

Цинк. Не более 0,003 (30 ppm). Определение проводят методом атомно-абсорбционной спектрометрии с пламенной атомизацией при длине волны 213,9 нм.

Испытуемый раствор. Готовят, как описано в испытании на железо.

Стандартный раствор. 0,440 г цинка сульфата гептагидрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,5 М растворе азотной кислоты и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки. Используют свежеприготовленным. Допускается использование коммерческих стандартов.

Мышьяк. Не более 0,0001%. (1 ppm, ОФС «Мышьяк», метод 1). Для определения используют 0,5 г субстанции.

Потеря в массе при высушивании. Не более 15,0% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют около 5,0 г (точная навеска) субстанции.

Общая зола. Не более 2,0%. (ОФС «Зола общая»). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

<**> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС «Аномальная токсичность»). Тест-доза — 40 мг субстанции в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно со скоростью 0,1 мл/с. Срок наблюдения 48 ч.

<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,7 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС «Бактериальные эндотоксины»).

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Хранение. В сухом месте.

---

<*> Приводится для информации.

<**> Контроль по показателям качества «Аномальная токсичность» и «Бактериальные эндотоксины» проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

---