ФС.3.3.1.0069.18. Фармакопейная статья. Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2b, субстанция раствор, раствор замороженный

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-2b, субстанция раствор, раствор замороженный	ФС.3.3.1.0069.18
	Вводится впервые

Аминокислотная последовательность интерферона альфа-2b:

[M]CDLPQTHSLG	SRRTLMLLAQ	MRRISLFSCL
KDRHDFGFPQ	EEFGNQFQKA	ETIPVLHEMI
QQIFNLFSTK	DSSAAWDETL	LDKFYTELYQ
QLNDLEACVI	QGVGVTETPL	MKEDSILAVR
KYFQRITLYL	KEKKYSPCAW	EVVRAEIMRS
FSLSTNLQES	LRSKE

Настоящая фармакопейная статья распространяется на субстанцию интерферона человеческого рекомбинантного альфа-2b, представляющего собой раствор белка, полученного с помощью технологии рекомбинантной ДНК.

Продуцентом интерферона альфа-2b являются генетически модифицированные клетки Escherichia coli, полученные путем трансформации исходного штамма вектором, содержащим ген интерферона альфа-2b человека.

В зависимости от особенностей технологии производства возможно наличие/отсутствие в молекуле интерферона альфа-2b N-концевого метионина [M].

Субстанция предназначена для производства лекарственных препаратов.

ПРОИЗВОДСТВО

Производство субстанции интерферона альфа-2b должно проводиться в условиях соблюдения правил надлежащей производственной практики и в соответствии с требованиями ОФС «Лекарственные средства, получаемые методом рекомбинантной ДНК» и ОФС «Биотехнологические лекарственные препараты».

Экспрессирующая конструкция, штамм-продуцент, должны быть охарактеризованы в полном объеме и в соответствии с требованиями, изложенными в ОФС «Лекарственные средства, получаемые методами рекомбинантных ДНК». Производственные штаммы и штаммы для контроля должны быть депонированы в официальной коллекции.

При производстве субстанции должны быть предусмотрены требования и испытания микробиологической чистоты до стерилизующей фильтрации.

ИСПЫТАНИЯ

Описание. Раствор (или раствор после размораживания) представляет собой бесцветную или слегка желтоватую, прозрачную, опалесцирующую жидкость.

Замороженный раствор представляет собой плотную затвердевшую беловатого цвета массу. В нормативной документации должны быть указаны условия размораживания субстанции.

Подлинность. Должна представлять собой интерферон альфа-2b типа, ее подлинность может быть подтверждена несколькими независимыми валидированными методами, среди которых обязательно должен быть биологический метод и метод пептидного картирования. Выбор методов оценки подлинности должен быть обоснован.

Биологический метод. Субстанция должна инактивироваться анти-альфа-интерфероновыми поликлональными или моноклональными антителами аналогично международному стандартному образцу активности интерферона альфа-2b (МСО) с активностью 70000 МЕ в ампуле или стандартному образцу (СО), откалиброванному в международных единицах (МЕ) относительно международного стандартного образца. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферонов с использованием культур клеток», разделом «Подлинность» по методике, указанной в нормативной документации.

Изоэлектрическое фокусирование. Положение основных полос на изоэлектрофореграмме испытуемого образца должно соответствовать положению основных полос на изоэлектрофореграмме стандартного образца. Изоэлектрическая точка должна находиться в диапазоне pH 5,8 — 6,3. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Изоэлектрическое фокусирование» по методике, указанной в нормативной документации.

Пептидное картирование. Профиль хроматограммы испытуемого раствора после ферментативного гидролиза трипсином должен принципиально соответствовать профилю хроматограммы стандартного раствора. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Пептидное картирование», по методике, указанной в нормативной документации.

Подлинность безметиониновой формы интерферона устанавливается по международному стандартному образцу интерферона альфа-2b — CRS.

Подлинность метиониновой формы интерферона альфа-2b — по стандартному образцу предприятия, аттестованному в установленном порядке.

Электрофорез в полиакриламидном геле в восстанавливающих условиях. Положение основной полосы на электрофореграмме испытуемого раствора должно соответствовать положению основной полосы на электрофореграмме стандартного раствора интерферона альфа-2b. Испытания проводят методом электрофореза в восстанавливающих условиях в соответствии с разделом «Чистота. Метод электрофореза в восстанавливающих условиях при окрашивании нитратом серебра».

Прозрачность. Раствор (или раствор после размораживания) должен быть прозрачным или по степени мутности не должен превышать эталон I. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей» (в случае размораживания — через 2 ч после полного размораживания субстанции).

Цветность. Раствор (или раствор после размораживания) должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9. Определение проводят в соответствии с ОФС «Степень окраски жидкостей» (в случае размораживания — через 2 ч после полного размораживания субстанции).

pH От 4,7 до 7,5. Границы установленной нормы для данного значения не должны быть более 1,0. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Белок. Не менее 1,0 мг/мл, если нет других указаний в нормативной документации. Определение проводят методом Лоури (метод А) в соответствии с требованиями ОФС «Определение белка» по методу, указанному в нормативной документации.

Стерильность. Должна быть стерильной. Испытание проводят в соответствии с требованиями ОФС «Стерильность» методом прямого посева или мембранной фильтрации.

Бактериальные эндотоксины. Не более 100 ЕЭ/мг белка, если нет других указаний в нормативной документации. Испытание проводят в соответствии с ОФС «Бактериальные эндотоксины» по методу, указанному в нормативной документации.

Чистота. Оценивается двумя методами.

Электрофорез в полиакриламидном геле:

• в восстанавливающих условиях на электрофореграмме испытуемого раствора должна выявляться основная интенсивная полоса с молекулярной массой около 19000 Да, допускается присутствие дополнительных менее интенсивных полос с более низкой молекулярной массой, чем основная полоса. Ни одна из дополнительных полос не может быть более интенсивной, чем основная полоса, полученная для 1,0% стандартного раствора, и должно быть не более трех дополнительных полос, более интенсивных, чем основная полоса, полученная для 0,2% стандартного раствора;
• в невосстанавливающих условиях на электрофореграмме испытуемого раствора должна выявляться основная интенсивная полоса с молекулярной массой около 19000 Да, допускается присутствие дополнительных менее интенсивных полос с более высокой молекулярной массой, чем основная полоса. Ни одна из дополнительных полос не может быть более интенсивной, чем основная полоса, полученная для 1,0% стандартного раствора, и должно быть не более трех дополнительных полос, более интенсивных, чем основная полоса, полученная для 0,2% стандартного раствора.

Испытания проводят в соответствии с ОФС «Электрофорез в полиакриламидном геле». Методика должна быть указана в нормативной документации.

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ). На хроматограмме испытуемого раствора площадь основного пика должна составлять не менее 95% от суммы площадей всех пиков. Площадь любого дополнительного пика должна составлять не более 3% от суммы площадей всех пиков. Сумма площадей всех дополнительных пиков должна составлять не более 5% от суммы площадей всех пиков. Испытания проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в соответствии с ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография» в сравнении с международным стандартным образцом интерферона альфа-2b — CRS или стандартным образцом предприятия, аттестованным в установленном порядке. Используют исходный и окисленный стандартный образец, хроматографические условия и особенности методики должны быть указаны в нормативной документации.

Остаточные белки штамма продуцента. Не более 200 нг на мг белка. Определение проводят иммунохимическим методом по ОФС «Метод иммуноферментного анализа». Методика должна быть указана в нормативной документации. Допускается использование набора реагентов в соответствии с инструкциями по применению.

Остаточная ДНК штамма продуцента. Не более 10 пг на 1 млн МЕ, если не обосновано иное. Определение проводят одним из методов с установленным пределом обнаружения/пределом количественного определения: методом молекулярной гибридизации с использованием ДНК-зондов, методом на основе полимеразной цепной реакции в соответствии с ОФС «Полимеразная цепная реакция» или другими валидированными методами, например, иммуноферментным методом «Threshold system». Методики испытания должны быть изложены в нормативной документации.

Аномальная токсичность. Должна быть нетоксична. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Вид животных, тест-доза, способ введения и срок наблюдения должны быть указаны в нормативной документации.

Специфическая активность. Должна быть не менее 2,0·108 МЕ/мл, если нет других указаний в нормативной документации. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Биологические методы испытания препаратов интерферонов с использованием культур клеток» по разделу «Специфическая активность», методика должна быть указана в нормативной документации.

Удельная активность. Расчетная величина. Не менее 1,4·108 МЕ антивирусной активности субстанции/мг белка, если в нормативной документации нет других указаний.

Удельную активность вычисляют путем деления значения специфической активности (МЕ/мл) на значение содержания белка (мг/мл).

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств» и ОФС «Лекарственные формы».

Транспортирование. Раствор. При температуре от 2 до 8 °C. Замороженный раствор. При температуре не выше минус 18 °C в течение не более 30 дней, если иное не указано в нормативной документации.

Хранение. Раствор. При температуре от 2 до 8 °C. Замороженный раствор. При температуре не выше минус 40 °C. После размораживания раствора допустимо его хранение при температуре от 2 до 8 °C в течение не более 30 дней, если иное не указано в нормативной документации.

---