ФС.3.3.1.0068.18. Фармакопейная статья. Аллерген туляремийный жидкий, суспензия для накожного скарификационного применения
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 15.01.2019. Взамен ГФ X, ст. 708, ФС 42-3928-00.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Аллерген туляремийный жидкий, суспензия для накожного скарификационного применения | ФС.3.3.1.0068.18 |
| Взамен ГФ X, ст. 708, Взамен ФС 42-3928-00 |
Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген туляремийный жидкий (Тулярин), суспензию для накожного скарификационного применения, представляющий собой убитую нагреванием взвесь культуры вакцинного штамма Francisella tularensis 15 НИИЭГ в 0,9% растворе натрия хлорида.
В ампуле содержится 20 накожных доз, одна доза (0,05 мл) содержит 5·108 микробных клеток (м.к.). Препарат содержит консервант.
Препарат предназначен для определения специфического иммунитета и диагностики туляремии.
Технология производства аллергена туляремийного жидкого (Тулярина) предусматривает получение производственных посевных культур F. tularensis 15 НИИЭГ I, II, III, IV и V генераций; накопление и разведение бактериальной массы V генерации 0,9% раствором натрия хлорида с 3% глицерином до необходимой концентрации; первая и вторая инактивация микробной массы V генерации при температуре (75 +/- 5) °C; разведение микробной массы 0,9% раствором натрия хлорида до рабочей концентрации; розлив, герметизацию; инактивацию при температуре (75 +/- 5) °C и маркировку ампул с препаратом.
На стадиях приготовления производственных посевных культур проводят испытания на отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов, определяют концентрацию микробных клеток. На стадии приготовления аллергена проводят анализ специфической стерильности инактивированной микробной массы и определяют концентрацию микробных клеток.
Вакцинный штамм F. tularensis 15 НИИЭГ должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и серологические свойства; остаточная вирулентность (LD50) вакцинного штамма для белых мышей массой 18 — 20 г должна находиться в пределах от 102 до 2·106 живых микробных клеток (м.к.); штамм не должен вызывать гибель морской свинки при введении дозы, равной 5·109 м.к.; при накожной иммунизации морских свинок дозами 5·106 и 5·107 м.к. должен вызывать появление инфильтрата и гиперемии диаметром от 5 до 15 мм; показатель иммуногенности (ED50) для морских свинок должен быть не более 1·103 живых микробных клеток при инфицировании вирулентным штаммом F. tularensis 503/840.
Перед приготовлением производственной культуры вакцинного штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводят его пассаж через организм морской свинки с последующим отбором типичных иммуногенных (белых) колоний, образующихся на плотной питательной среде при посеве селезенки и регионарных лимфатических узлов.
Работу с культурой штамма F. tularensis 15 НИИЭГ проводят с соблюдением санитарных правил «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», с культурой вирулентного штамма F. tularensis 503/840 — санитарных правил «Безопасность работы с микроорганизмами I — II групп патогенности (опасности)», действующих в РФ.
Описание. Гомогенная суспензия белого цвета с сероватым или желтоватым оттенком, без посторонних включений, при отстаивании разделяющаяся на 2 слоя: верхний — бесцветная прозрачная жидкость, нижний — осадок белого цвета с сероватым или желтоватым оттенком, легко разбивающийся при встряхивании. Определение проводят визуально.
Подлинность. Должна быть чистая культура туляремийного микроба. Определение проводят прямым иммунофлуоресцентным методом с помощью иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих туляремийных сухих соответствующего года выпуска.
В мазках из препарата, окрашенных в соответствии с инструкцией по применению иммуноглобулинов диагностических флуоресцирующих туляремийных сухих, при просмотре не менее 30 полей зрения микробные клетки должны иметь яркое зеленовато-желтое свечение по периферии.
pH. От 6,8 до 7,2. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».
Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального (не менее 1,0 мл). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».
Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом, указанным в нормативной документации.
Специфическая стерильность. Аллерген не должен содержать живых клеток туляремийного микроба. Испытание проводят путем высева по 0,1 мл аллергена на одну пробирку с рыбно-дрожжевой цистеиновой питательной средой или с питательной средой для культивирования и выделения туляремийного микроба (FT-агар) и на одну пробирку с питательной средой Мак-Коя. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 7 сут. Посевы должны быть стерильными.
Приготовление питательных сред (рыбно-дрожжевая цистеиновая и Мак-Коя) должно быть указано в нормативной документации.
Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».
Испытания проводят путем внутрибрюшинного введения по 0,5 мл 5 белым мышам массой 18 — 20 г и подкожного введения по 0,5 мл одной морской свинке массой 250 — 300 г. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.
Специфическая активность. Концентрация микробных клеток должна составлять 9,0·109 — 10,0·109 0,5 мл м.к./мл. Определение проводят визуально путем сравнения со стандартом мутности бактериальных взвесей 10 МЕ, эквивалентного содержанию 5·109 м.к. туляремийного микроба.
При накожном скарификационном нанесении 0,1 мл аллергена, иммунизированным морским свинкам на месте введения должна быть реакция в виде инфильтрата и гиперемии не менее 10 мм поперек сделанных насечек.
Двух морских свинок массой 375 — 425 г предварительно иммунизируют накожно вакциной туляремийной живой в дозе 2·108 живых м.к./мл. Для этого содержимое ампулы с вакциной разводят водой для инъекций в объеме, который рассчитан для накожного применения для данной серии аллергена туляремийного. Затем микробную взвесь разводят 0,9% раствором натрия хлорида в 10 раз до концентрации 2·108 м.к./мл. На участок депилированной кожи размером 4 x 4 см боковой поверхности туловища, предварительно обработанной спиртом, затем эфиром, после испарения эфира наносят одноразовым шприцем 2 капли (0,1 мл) микробной взвеси, концентрацией 2·108 м.к./мл на расстоянии 23 — 27 мм одну от другой. Через каждую каплю оспопрививательным пером делают по 2 параллельные насечки длиной от 8 до 12 мм, которые не должны кровоточить. Нанесенную на кожу взвесь тщательно втирают в течение 1 мин плоской стороной оспопрививательного пера. Через 25 — 30 сут иммунизированным и одной контрольной (неиммунизированной) морской свинке ставят скарификационную кожную пробу с аллергеном. Для этого на участке депилированной кожи противоположной боковой поверхности животного, предварительно обработанной спиртом, затем эфиром, одноразовым шприцем наносят две капли аллергена (0,1 мл) на расстоянии 23 — 27 мм одной от другой. Через каждую каплю оспопрививательным пером делают по 2 параллельные насечки длиной 8 — 12 мм, которые не должны кровоточить.
Учет проводят через 48 ч по кожной реакции в виде гиперемии и инфильтрата на месте нанесения препарата. Положительной считают реакцию в виде гиперемии и инфильтрата не менее 10 мм поперек сделанных насечек. Отрицательной реакцией считают отсутствие кожных проявлений или наличие гиперемии и инфильтрата менее 10 мм поперек сделанных насечек. У контрольной морской свинки кожная реакция на месте нанесения препарата должна отсутствовать.
Вещества, входящие в состав препарата. Консервант — 3% глицерин (расчетная величина).
Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Лекарственные формы» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств».
Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °C в условиях, исключающих замораживание препарата в соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств».