ФС.3.3.1.0067.18. Фармакопейная статья. Аллерген бруцеллезный жидкий, раствор для внутрикожного введения

(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)

(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Аллерген бруцеллезный жидкий, раствор для внутрикожного введения	ФС.3.3.1.0067.18
	Взамен ГФ X, ст. 114, Взамен ФС 42-3552-98

Настоящая фармакопейная статья распространяется на аллерген бруцеллезный жидкий, раствор для внутрикожного введения (Бруцеллин), представляющий собой полисахаридно-белковый комплекс, полученный из вакцинного штамма Brucella abortus 19 BA в процессе химической обработки в 0,9% растворе натрия хлорида для инъекций. В ампуле содержится 10 внутрикожных доз, одна внутрикожная доза (0,1 мл) содержит от 3,8 до 5,4 мкг белка. Аллерген бруцеллезный жидкий не содержит консервантов и антибиотиков.

Препарат предназначен для специфической диагностики повышенной чувствительности к бруцеллам.

ПРОИЗВОДСТВО

Технология производства аллергена бруцеллезного жидкого предусматривает получение производственных посевных культур штамма B. abortus 19 BA I, II, III и IV генераций; процесс накопления биомассы для приготовления микробной взвеси с необходимой концентрацией; инактивацию IV генерации микробной массы бруцелл ацетоном; осаждение и высушивание микробной массы; получение гидролизата из микробной массы, выделение из гидролизата действующего вещества — полисахаридно-белкового комплекса; очистку и лиофилизацию полуфабриката; приготовление раствора аллергена из лиофилизированного полуфабриката путем добавления 0,9% раствора натрия хлорида до содержания белка (46 +/- 8) мкг/мл, стерилизацию в водяной бане при температуре (98 +/- 2) °C; розлив, герметизацию и маркировку ампул с препаратом.

На стадиях приготовления посевных культур проводят контроль на отсутствие посторонних микроорганизмов и грибов и на отсутствие диссоциации пробой с трипафлавином (отсутствие агглютинации); определяют концентрацию микробных клеток; проводят контроль специфической стерильности инактивированной бактериальной массы бруцелл; на этапе приготовления аллергена определяют белок, pH, стерильность.

Вакцинный штамм B. abortus 19 BA биовар I должен иметь типичные культуральные, морфологические, биохимические и серологические свойства; не должен содержать бруцеллезного бактериофага; остаточная вирулентность для белых мышей массой 18 — 20 г должна находиться в пределах инфицирующих доз (ИД50) от 5·102 до 5·105 микробных клеток (м.к.); не должен вызывать гибель белых мышей массой 18 — 20 г при подкожном введении дозы 2·109 м.к. в течение 6 сут наблюдения; при подкожном введении морским свинкам дозы 2·109 м.к./мл через 14 сут должен определяться от 5·102 до 5·104 м.к./мл в 1 мл суспензии селезенки; должен предохранять от инфицирования вирулентным штаммом B. melitensis 565 не менее 8 из 10 морских свинок, иммунизированных подкожно 2·109 живых м.к./мл.

Перед приготовлением очередной серии производственной культуры вакцинного штамма B. abortus 19 BA проводят пассаж штамма через организм морской свинки с последующим отбором типичных колоний, выросших на плотной питательной среде из посевов селезенки или регионарных лимфатических узлов.

Работу с культурой штамма B. abortus 19 BA проводят с соблюдением санитарных правил «Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней», с культурой вирулентного штамма B. melitensis 565 — санитарные правила «Безопасность работы с микроорганизмами I — II групп патогенности (опасности)», действующих в РФ.

ИСПЫТАНИЯ

Описание. Прозрачная бесцветная или светло-желтого цвета жидкость. Определение проводят визуально.

Подлинность. Должны наблюдаться гиперемия и инфильтрат (отек) размером не менее 8 мм вокруг места при внутрикожном введении 0,1 мл аллергена морской свинке. Определение проводят биологическим методом в соответствии с разделом «Специфическая активность».

Прозрачность. Прозрачный раствор (определение проводят в соответствии с ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей») или раствор с оптической плотностью не более 0,05 (определение проводят в соответствии с ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях» в кюветах с толщиной слоя 3 мм при длине волны 540 нм). Метод определения указывают в нормативной документации.

Механические включения. Должны соответствовать требованиям ОФС «Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах».

pH. От 6,8 до 7,2. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального (не менее 1,0 мл). Испытание проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Белок. От 38 до 54 мкг/мл. Определение проводят колориметрическим методом в соответствии с ОФС «Определение белка колориметрическим методом (метод Лоури) в биологических лекарственных препаратах» без предварительного осаждения белка.

Стерильность. Препарат должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Стерильность» методом, указанным в нормативной документации.

Специфическая стерильность. Препарат не должен содержать живых бруцелл. Специфическую стерильность проверяют высевом по 0,1 мл аллергена на чашки Петри с печеночным или картофельным агаром и на 2 пробирки с печеночным бульоном. Учет результатов проводят через 6 сут выдерживания посевов при температуре (37 +/- 1) °C. Посевы должны быть стерильными.

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Определение проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность». Испытания проводят путем внутрибрюшинного введения по 0,1 мл 5 белым мышам массой 18 — 20 г и подкожного введения по 0,1 мл одной морской свинке массой 250 — 300 г, если нет других указаний в нормативной документации. Период наблюдения за животными составляет 7 сут.

Специфическая активность. Препарат должен вызывать на месте введения реакцию в виде гиперемии и инфильтрата (отека) размером от 8 до 14 мм при внутрикожном введении 0,1 мл аллергена иммунизированным морским свинкам.

Двух морских свинок массой 325 — 375 г иммунизируют подкожно вакциной бруцеллезной живой в дозе 2·109 м.к./мл шприцем вместимостью 2 мл. Через 30 — 40 сут иммунизированным и одной контрольной (неиммунизированной) морской свинке в центр депилированного участка кожи размером 4 x 4 см на боковой поверхности туловища, предварительно обработанной спиртом, строго внутрикожно вводят 0,1 мл аллергена.

Учет проводят через 48 ч по реакции в виде гиперемии и инфильтрата (отека) вокруг места введения аллергена. Положительной считают реакцию в виде гиперемии и инфильтрата не менее 8 мм. Отрицательной реакцией считают отсутствие кожных проявлений или наличие гиперемии и инфильтрата менее 8 мм.

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Лекарственные формы» и ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств».

Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °C в условиях, исключающих замораживание препарата в соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственных средств».

---