ФС.2.3.0001.22. Фармакопейная статья. Хондроитина сульфат натрия
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 11.04.2022 № 246 данный документ введен в действие с 01.04.2022. Взамен ФС 42-3741-99.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Хондроитина сульфат натрия | ФС.2.3.0001.22 |
|---|---|
| Хондроитина сульфат | |
| Chondroitini sulfate sodium | Взамен ФС 42-3741-99 |
Настоящая фармакопейная статья распространяется на хондроитина сульфат натрия [4)-( \beta -D-глюкопиранозилуроновая кислота)- (1 \rightarrow 3) -[2-(ацетиламино)-2-дезокси- \beta -D-галактопиранозил 4-сульфат]- (1 \rightarrow ) и [4)-( \beta -D-глюкопиранозилуроновая кислота)- (1 \rightarrow 3) -[2-(ацетиламино)-2-дезокси- \beta -D-галактопиранозил 6-сульфата]- (1 \rightarrow 3) , натриевая соль, получаемый из сырья животного происхождения и соответствующий требованиям ОФС «Фармацевтические субстанции животного происхождения», и применяемый для производства лекарственных препаратов.
 | |
| H2O(C14H19NNa2O14S)n | М.м. (503,4)n |
Содержит не менее 95,0% и не более 105,0% хондроитина сульфата натрия в пересчете на сухое вещество.
Описание. Белый или белый с желтоватым оттенком порошок.
<*> Гигроскопичен.
Растворимость. Легко растворим в воде, практически нерастворим в ацетоне и этаноле 96%.
ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца хондроитина сульфата натрия. В соответствии с требованиями ОФС «Спектрометрия в инфракрасной области».
Электрофорез. На электрофореграмме испытуемого раствора, полученной для определения родственных примесей, положение основной зоны должно совпадать с положением основной зоны на электрофореграмме раствора стандартного образца хондроитина сульфата натрия.
Субстанция должна давать реакцию А на натрий. В соответствии с требованиями ОФС «Общие реакции на подлинность».
Удельное вращение. От -20 до -30 в пересчете на сухое вещество (5% раствор). В соответствии с требованиями ОФС «Поляриметрия».
Характеристическая вязкость. От 0,01 м3/кг до 0,15 м3/кг в пересчете на сухое вещество. В соответствии с требованиями ОФС «Вязкость».
Натрия хлорида раствора 1,17%. 11,7 г натрия хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в 950 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
Испытуемый раствор А. Около 5 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 80 мл натрия хлорида раствора 1,17% в течение 30 мин, интенсивно перемешивая, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. Полученный раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывая первые 10 мл.
Испытуемые растворы Б, В и Г готовят после проверки времени истечения испытуемого раствора А.
Испытуемый раствор Б. К 15,0 мл испытуемого раствора А прибавляют 5,0 мл натрия хлорида раствора 1,17%.
Испытуемый раствор В. К 10,0 мл испытуемого раствора А прибавляют 10,0 мл натрия хлорида раствора 1,17%.
Испытуемый раствор Г. К 5,0 мл испытуемого раствора А прибавляют 15,0 мл натрия хлорида раствора 1,17%.
Время истечения натрия хлорида раствора 1,17% (t0) и время истечения испытуемых растворов (tА, tБ, tВ, tГ) определяют при температуре (25 +/- 0,1) °C. Измерение проводят на капиллярном вискозиметре Уббелоде с висячим уровнем, номинальным значением К около 0,005 мм2/с2, диапазон измерения вязкости от 1 до 5 мм2/с. Один и тот же вискозиметр используют для всех испытания, проводя измерения времени истечения не менее трех раз для каждого испытуемого раствора. Испытание считается достоверным, если отношение времени истечения испытуемого раствора А к времени истечения натрия хлорида раствора 1,17% составляет 1,6 — 1,8. В случае невыполнения данного требования, измеряют концентрацию испытуемого раствора А и повторяют испытание.
Относительную вязкость \eta_{ri} ( \eta_{r\text{А}} , \eta_{r\text{Б}} , \eta_{r\text{В}} , \eta_{r\text{Г}} ) вычисляют по формуле:
\eta_{ri} = \frac{t_{i} - \frac{B}{t_{i}^{2}}}{t_{0} - \frac{B}{t_{0}^{2}}} = \frac{(t_{i}^{3} - B) \cdot t_{0}^{2}}{(t_{0}^{3} - B) \cdot t_{i}^{2}} ,
где: ti — время истечения соответствующего раствора (tА, tБ, tВ, tГ), с;
t0 — время истечения натрия хлорида раствора 1,17%, с;
B — коррекционный фактор кинетической энергии для капилляра (30800 с3).
Концентрацию хондроитина сульфата натрия в испытуемом растворе А в кг/м3 (CА) вычисляют по формуле:
C_{\text{А}} = \frac{a_{\text{А}} \cdot X \cdot (100 - W) \cdot 1000000}{100 \cdot 100 \cdot 100 \cdot 1000} = \frac{a_{\text{А}} \cdot X \cdot (100 - W)}{1000} ,
где: aА — навеска субстанции в испытуемом растворе А, г;
X — содержание хондроитина сульфата натрия в субстанции, полученное при количественном определении, %;
W — потеря в массе при высушивании, %.
Концентрацию хондроитина сульфата натрия в испытуемом растворе Б в кг/м (CБ) вычисляют по формуле:
Концентрацию хондроитина сульфата натрия в испытуемом растворе В в кг/м (CВ) вычисляют по формуле:
Концентрацию хондроитина сульфата натрия в испытуемом растворе Г в кг/м (CГ) вычисляют по формуле:
Относительную вязкость \eta_{si} для каждого испытуемого раствора ( \eta_{s\text{А}} , \eta_{s\text{Б}} , \eta_{s\text{В}} , \eta_{s\text{Г}} ) вычисляют по формуле:
где \eta_{ri} — относительная вязкость \eta_{ri} ( \eta_{r\text{А}} , \eta_{r\text{Б}} , \eta_{r\text{В}} , \eta_{r\text{Г}} ).
Для расчета характеристической вязкости строят зависимость приведенной вязкости (\eta_{si}/C_{i}) от концентрации (Ci) и экстраполируют приведенную вязкость к нулевой концентрации.
<**> Прозрачность раствора. 10% раствор субстанции должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I. В соответствии с требованиями ОФС «Прозрачность и степень мутности жидкостей».
<**> Цветность раствора. 10% раствора субстанции должен выдерживать сравнение с эталоном Y6. В соответствии с требованиями ОФС «Степень окраски жидкостей».
pH. От 5,5 до 7,5 (5% раствор). В соответствии с требованиями ОФС «Ионометрия», метод 3.
Родственные примеси. Определение проводят методом электрофореза в соответствии с требованиями ОФС «Электрофорез».
Испытуемый раствор. Около 0,75 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
Раствор стандартного образца (СО) хондроитина сульфат натрия. Около 0,06 г (точная навеска) СО хондроитина сульфата растворяют в 2,0 мл воды и перемешивают.
Раствор сравнения А. 1,0 мл раствора СО хондроитина сульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Раствор сравнения Б. 5,0 мл раствора СО хондроитина сульфата натрия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Растворы используют свежеприготовленными.
Раствор А. 225 мл 0,1 М бария ацетата буферного раствора pH 5,0 помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают.
Раствор Б. 175 мл 0,1 М бария ацетата буферного раствора pH 5,0 помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают.
Окрашивающий раствор. 0,2 г толуидинового синего и 0,4 г натрия хлорида помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором хлористоводородной кислоты до метки, перемешивают и фильтруют.
Срок годности раствора не более 30 сут при хранении в холодном месте.
Агарозный гель. 0,5 г агарозы для электрофореза помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл воды и перемешивают. Колбу нагревают на водяной бане, периодически взбалтывая, до получения прозрачного раствора. Полученный раствор охлаждают до температуре 60 °C, заливают в гелевую рамку размером 125 x 75 мм и высотой 4 — 5 см, с одной стороны геля сразу помещают гребенку из оргстекла на 10 зубцов. Через 10 мин после начала полимеризации выдерживают гель, не вынимая гребенку, при температуре 4 °C в течение 10 мин, после чего вынимают гребенку из геля.
Проверка пригодности электрофоретической системы. Система считается пригодной, если выполняются следующие условия:
- на электрофореграмме раствора сравнения Б должна отчетливо проявляться основная зона;
- на электрофореграмме раствора сравнения А должна отчетливо проявляться основная зона по положению, совпадающая с зоной на электрофореграмме СО хондроитина сульфата натрия.
| Температура растворов | 4 °C |
|---|---|
| Сила тока, мА/гель | 75 |
| Напряжение, В | 100 — 150 |
| Объем пробы, мкл | 1 |
| Время анализа, мин | 12 |
Агарозный гель выдерживают в течение 1 мин в 0,1 М бария ацетата буферного раствора pH 5,0, осторожно удаляют избыток жидкости с геля фильтровальной бумагой и сушат на воздухе в течение 5 мин. В лунки геля вносят по 1 мкл испытуемого раствора, стандартного раствора СО хондроитина сульфата натрия, раствора сравнения А и раствора сравнения Б. Гель помещают в камеру с 1,0 М бария ацетата буферного раствора pH 5,0 и проводят электрофорез. Гель вынимают, осторожно сливают с него жидкости, сушат на воздухе в течение 5 мин, затем помещают гель на 2 мин в раствор А и проводят электрофорез в течение 20 мин. Гель снова вынимают, осторожно сливают с него жидкости, сушат на воздухе в течение 5 мин, затем помещают гель на 2 мин в раствор Б и проводят электрофорез в течение 20 мин.
Гель проявляют в окрашивающем растворе в течение 10 мин, после чего отмывают проточной водой в течение 15 мин до проявления зоны раствора сравнения Б, затем подсушивают на воздухе.
На электрофореграмме испытуемого раствора основная зона по положению должна совпадать с положением зоны хондроитина сульфата натрия на электрофореграмме стандартного раствора СО хондроитина сульфата натрия; любая другая зона должна быть не интенсивнее зоны, соответствующей раствору сравнения А (не более 2,0%).
Результаты считаются достоверными, если выполняются требования проверки пригодности электрофоретической системы.
Допустимое содержание примесей:
Белок. Не более 3,0% в пересчете на сухое вещество. В соответствии с требованиями ОФС «Определение белка», метод 2 А.
Раствор стандартного образца (СО) бычьего сывороточного альбумина. Около 50 мг (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 0,01 М растворе натрия гидроксида, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (около 1 мг/мл).
Раствор СО бычьего сывороточного альбумина А. 5,0 мл раствора (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают (около 0,1 мг/мл).
Раствор СО бычьего сывороточного альбумина Б. 4,0 мл раствора (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают (около 0,08 мг/мл).
Раствор СО бычьего сывороточного альбумина В. 3,0 мл раствора (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают (около 0,06 мг/мл).
Раствор СО бычьего сывороточного альбумина Г. 2,0 мл раствора (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают (около 0,04 мг/мл).
Раствор СО бычьего сывороточного альбумина Д. 1,0 мл раствора (точная навеска) СО бычьего сывороточного альбумина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора 0,01 М раствором натрия гидроксида до метки и перемешивают (около 0,02 мг/мл).
Растворы используют свежеприготовленными.
Около 100 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 0,01 М раствором натрия гидроксида, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (испытуемый раствор).
Испытания проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение белка», метод 2 А, в качестве контрольного раствора используют 0,01 М раствор натрия гидроксида.
Расчет содержания белка проводят по калибровочному графику зависимости оптической плотности от содержания белка в мг в 1 мл соответствующего раствора СО бычьего сывороточного альбумина. Параллельно измеряют оптическую плотность испытуемого раствора.
Содержание белка в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{C \cdot 50 \cdot 100 \cdot 100 \cdot P}{a \cdot (100 - W) \cdot 100} = \frac{C \cdot 5000 \cdot P}{a \cdot (100 - W)} ,
где: C — содержание белка в 1 мл испытуемого раствора, найденное по калибровочному графику, мг;
P — содержание основного вещества в СО бычьего сывороточного альбумина, %;
W — потеря в массе при высушивании, %.
Потеря в массе при высушивании. Не более 10,0%. Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при 100 — 105 °C до постоянной массы. В соответствии с требованиями ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1.
Азот. От 2,0 до 3,5% в пересчете на сухое вещество. В соответствии с требованиями ОФС «Определение азота в органических соединениях методом Къельдаля» (из навески 0,1 г).
Сера. Не более 7,5%. В соответствии с требованиями ОФС «Метод сжигания в колбе с кислородом» (из навески 0,05 г).
Сульфаты. Не более 0,25%. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 25,0 мл, растворяют в 20 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 10,0 мл полученного раствора должны выдерживать испытания на сульфаты. В соответствии с требованиями ОФС «Сульфаты», метод 1.
Хлориды. Не более 0,5%. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 250,0 мл, растворяют в 100 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают. 10,0 мл полученного раствора должны выдерживать испытания на хлориды. В соответствии с требованиями ОФС «Хлориды».
Сульфатная зола. Не более 30%. В соответствии с требованиями ОФС «Сульфатная зола». Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС «Тяжелые металлы» в зольном остатке, полученном после сжигания 0,5 г субстанции (ОФС «Сульфатная зола»).
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
<**> Бактериальные эндотоксины. Не более 1,75 ЕЭ/мг хондроитина сульфата натрия в пересчете на сухое вещество. В соответствии с требованиями ОФС «Бактериальные эндотоксины».
Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной. В соответствии с требованиями ОФС «Аномальная токсичность». Тест-доза — 30 мг хондроитина сульфата натрия в пересчете на сухое вещество в 0,5 мл воды для инъекций на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом титриметрии.
Раствор СО хондроитина сульфата натрия А. Около 100 мг (точная навеска) СО хондроитина сульфата натрия, предварительно высушенного при 100 — 105 °C в течение 4 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
Раствор СО хондроитина сульфата натрия Б. 5,0 раствора СО хондроитина сульфата натрия А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.
Раствор титранта. 1,0 г цетилпиридиния хлорида моногидрата помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в 500 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают.
Растворы используют свежеприготовленными.
Около 100 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл воды, доводят объем раствора тем же растворителем до метки и перемешивают (испытуемый раствор А).
5,0 мл испытуемого раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (испытуемый раствор Б).
50,0 мл раствора СО хондроитина сульфата натрия Б и 50,0 мл испытуемого раствора Б титруют раствором титранта. Определение конечной точки титрования проводят с использованием автотитранта, снабженного фототроном, при одной из длин волн; 420 нм, 550 нм, 555 нм или 660 нм.
Содержание хондроитина сульфата натрия в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:
X = \frac{V \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot 100 \cdot P}{V_{0} \cdot a \cdot (100 - W) \cdot 100} = \frac{V \cdot a_{0} \cdot 100 \cdot P}{V_{0} \cdot a \cdot (100 - W)} ,
где: V0 — объем раствора титранта, пошедшего на титрование раствора СО хондроитина сульфата натрия, мл;
V — объем раствора титранта, пошедшего на титрование испытуемого раствора Б, мл;
a0 — навеска СО хондроитина сульфата натрия, мг;
P — содержание основного вещества в СО хондроитина сульфата натрия, %;
W — потеря в массе при высушивании, %.
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственных средств».
<*> Приводится для информации.
<**> Проводят для субстанции, предназначенной для производства лекарственных форм для парентерального применения.