ФС.2.1.0186.18. Фармакопейная статья. Тетрациклин
(утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749)
(«Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том III»)
Примечание
В соответствии с Приказом Минздрава России от 31.10.2018 № 749 данный документ введен в действие с 01.12.2018. Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/femb/pharmacopea.php по состоянию на 26.12.2018. Взамен ГФ X, ст. 664.
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
| Тетрациклин | ФС.2.1.0186.18 |
|---|---|
| Тетрациклин | |
| Tetracyclinum | Взамен ГФ X, ст. 664 |
| (4S,4aS,5aS,6S,2aS)-3,6,10,12,12a-Пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид | |
 | |
| C22H24N2O8 | М.м. 444,4 |
Содержит не менее 88,0% и не более 102,0% тетрациклина C22H24N2O8 в пересчете на сухое вещество.
Описание. Желтый кристаллический порошок.
<*> Гигроскопичен. При хранении на свету темнеет.
<*> Приводится для информации.
Растворимость. Очень мало растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%.
1. Тонкослойная хроматография (ОФС «Тонкослойная хроматография»).
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля октадецилсилильного F254.
Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил-метанол-щавелевой кислоты раствор 6,3%, доведенный до pH 2 +/- 0,1 аммиака раствором концентрированным 20:20:60.
Испытуемый раствор. Растворяют 5,0 мг субстанции в 10,0 мл метанола.
Стандартный раствор А. Растворяют 5,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида в 10,0 мл метанола.
Стандартный раствор Б. Растворяют 5,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, 5,0 мг демеклоциклина гидрохлорида и 5 мг окситетрациклина гидрохлорида в 10,0 мл метанола.
Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора, стандартного раствора А и стандартного раствора Б. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей, и просматривают в УФ-свете при 254 нм.
Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора Б должны наблюдаться три четко разделенных зоны адсорбции.
Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению и совокупности интенсивности поглощения и величины должна соответствовать основной зоне адсорбции на хроматограмме стандартного раствора А.
2. Качественная реакция. К 50 мг субстанции прибавляют 2,0 мл серной кислоты концентрированной; появляется фиолетовое окрашивание, прибавляют 1 мл воды; окраска становится темно-желтой; при добавлении 1 капли железа (III) хлорида раствора 3% окраска переходит в коричневую или красно-коричневую.
3. Качественная реакция. Растворяют 10,0 мг субстанции в смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 5,0 мл воды, свободной от диоксида водорода. Встряхивают и прибавляют 1,0 мл серебра нитрата раствор 1,7%. Опалесценция полученного раствора не должна превышать таковую смеси 1,0 мл азотной кислоты разведенной 12,5% и 5,0 мл воды, свободной от диоксида водорода и 1 мл серебра нитрата раствор 1,7%.
Удельное вращение от -260 до -280 в пересчете на сухое вещество (0,5% раствор субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты, ОФС «Поляриметрия»).
Удельный показатель поглощения. От 380 до 410 при длине волны 380 нм в пересчете на сухое вещество. Около 50 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, растворяют в 2,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл полученного раствора, прибавляют 75 мл воды, 5,0 мл гидроксида натрия раствора 5 М и доводят объем раствора водой до метки. Измерение проводят точно через 6 мин после добавления раствора гидроксида натрия (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).
pH. От 3,0 до 7,0 (1% суспензия, ОФС «Ионометрия», метод 3).
Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС «Высокоэффективная жидкостная хроматография»).
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
Подвижная фаза (ПФ). В мерную колбу вместимостью 1 л помещают 80,0 г 2-метил-2-пропанола, прибавляют 200 мл воды, свободной от диоксида углерода, 100 мл дикалия гидрофосфата раствора 3,5%, доведенного до pH 9,0 фосфорной кислотой разведенной 10%, 200 мл тетрабутиламмония гидросульфата раствора 1%, доведенного до pH 9,0 натрия гидроксида раствором 8,5% и 10 мл натрия эдетата раствора 4%, доведенного до pH 9,0 натрия гидроксида раствором 8,5%. Доводят объем раствора до метки водой, свободной от диоксида углерода.
Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25,0 мг субстанции, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор А. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 25,0 мг стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 12,5 мг стандартного образца 4-эпитетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси A), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор В. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мг стандартного образца ангидротетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси C), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Стандартный раствор Г. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10,0 мг стандартного образца 4-эпиангидротетрациклина гидрохлорида (гидрохлорид примеси D), растворяют в хлористоводородной кислоты растворе 0,01 М и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.
Раствор сравнения А. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл стандартного раствора А, 2,0 мл стандартного раствора Б и 5,0 мл стандартного раствора Г, доводят объем полученного раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.
Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 40,0 мл стандартного раствора Б, 20,0 мл стандартного раствора В и 5,0 мл стандартного раствора Г, доводят объем полученного раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.
Раствор сравнения В. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 1,0 мл стандартного раствора В и доводят объем раствора до метки хлористоводородной кислоты раствором 0,01 М.
примесь A: (4R,4aS,5aS,6S,2aS)-3,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,11-диоксо-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-октагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS 79-85-6;
примесь B: (4S,4aS,5aS,6S,2aS)-2-ацетил-3,4a,6,10,12,12a-пентагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-4a,5a,6,12a-тетрагидротетрацен-1,11(4H,5H)-дион, CAS 6542-44-5;
примесь C: (4S,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS 1665-56-1;
примесь D: (4R,4aS,12aS)-3,10,11,12a-тетрагидрокси-4-(диметиламино)-6-метил-1,12-диоксо-1,4,4a,5,12,12a-гексагидротетрацен-2-карбоксамид, CAS 7518-17-4.
Хроматографируют испытуемый раствор и растворы сравнения А, Б, В.
Пригодность хроматографической системы определяют в соответствии с ОФС «Хроматография» со следующими уточнениями.
На хроматограмме раствора сравнения А:
- разрешение (R) между пиками примеси A (первый пик) и тетрациклина (второй пик) должно быть не менее 2,5;
- разрешение (R) между пиками тетрациклина и примеси D (третий пик) должно быть не менее 8,0;
- фактор асимметрии пика (AS) тетрациклина должен быть не более 1,25.
На хроматограмме раствора сравнения В отношение сигнал/шум (S/N) для основного пика должно быть не менее 3.
При необходимости корректируют концентрацию 2-метил-2-пропанола в ПФ.
Для идентификации примесей A и D используют хроматограмму раствора сравнения А: порядок выхода компонентов: примесь A, тетрациклин, примесь D. Примесь C — присутствует на хроматограмме раствора сравнения Б и отсутствует на хроматограмме раствора сравнения А. Примесь B выходит на «хвосте» пика тетрациклина.
Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:
- площадь пика примеси A не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 5,0%);
- площадь пика примеси B не должна быть более 0,4 площади пика примеси A на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 2,0%);
- площадь пика примеси C не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 1,0%);
- площадь пика примеси D не должна быть более площади соответствующего пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,5%).
Потеря в массе при высушивании. Не более 13% (ОФС «Потеря в массе при высушивании», способ 1). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.
Сульфатная зола. Не более 0,5% (ОФС «Сульфатная зола»). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.
Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в зольном остатке, полученном после сжигания 1,0 г субстанции, с использованием эталонного раствора 2 (ОФС «Тяжелые металлы», метод 2).
Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС «Остаточные органические растворители».
Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания «Родственные примеси» со следующими изменениями.
Хроматографируют испытуемый раствор и стандартный раствор А.
Содержание тетрациклина C22H24N2O8 в субстанции в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:
X = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot 25 \cdot P \cdot 0,9241 \cdot 100}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot 25 \cdot (100 - W)} = \frac{S_{1} \cdot a_{0} \cdot P \cdot 92,41}{S_{0} \cdot a_{1} \cdot (100 - W)} ,
где S1 — площадь пика тетрациклина на хроматограмме испытуемого раствора;
S0 — площадь пика тетрациклина на хроматограмме стандартного раствора А;
a0 — навеска стандартного образца тетрациклина гидрохлорида, мг;
W — потеря в массе при высушивании, %;
P — содержание основного вещества в стандартном образце тетрациклина гидрохлорида, %;
0,9241 — коэффициент пересчета тетрациклина гидрохлорида в тетрациклин.
Хранение. В плотно закрытой упаковке в защищенном от света месте.