Глава IV. ЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ
Статья 24Директива № 2009/156/ЕС Совета Европейского Союза
Документ утратил силу 03.11.2026.
Актуально на 04.11.2026.
Как цитировать: Статья 24. Директива N 2009/156/ЕС Совета Европейского Союза. 2009/156/ЕС. https://bukva.ai/docs/direktiva-2009156es/statya-24
Настоящая Директива адресована государствам-членам ЕС.
От имени Совета ЕС Председатель S.O.LITTORINEN
В отношении следующих заболеваний обязательно предоставление уведомления:
- инфекционная анемия лошадей;
- бешенство;
- сибирская язва;
- африканская чума лошадей;
- везикулярный стоматит.
ТИПОВОЕ ВЕТЕРИНАРНОЕ СВИДЕТЕЛЬСТВО <а>
Я, нижеподписавшийся, подтверждаю, что b идентифицированное ниже животное соответствует следующим требованиям:
a) при проведенном сегодня обследовании животного не было обнаружено клинических признаков болезни;
b) животное не предназначено для забоя в рамках национальной программы уничтожения инфекционных и заразных заболеваний;
c) — животное не ввозится с территории или части территории государства-члена ЕС, в отношении которой установлены ограничения, связанные с африканской чумой лошадей, либо
животное ввозится с территории или части территории государства-члена ЕС, в отношении которой были установлены ветеринарные запреты и были получены удовлетворительные результаты проведенных в отношении животного анализов, предусмотренных статьей 5 (5) Директивы 2009/156/ЕС на станции карантина ________ в период с_______ по __________ c
животное было привито против африканской чумы лошадей _________ (дата) c d;
d) животное не ввозится из хозяйства, в отношении которого были установлены ветеринарные запреты, и не имело контактов с животными семейства лошадиных из хозяйства, в отношении которого были установлены ветеринарные запреты:
- в отношении животного, если имеются подозрения о возможности заражения дуриной, — в течение шести месяцев начиная с даты последнего фактического или потенциального контакта с больным животным. Однако в отношении жеребцов запрет применяется до кастрации животного,
- в случае сапа или энцефаломиелита — в течение шести месяцев, начиная с даты, когда заболевшие животные были забиты,
- в случае инфекционной анемии — до даты, когда после забоя заболевших животных были получены негативные результаты повторного анализа Коггинса, проведенного в отношении оставшихся животных три месяца спустя после первого,
- в случае везикулярного стоматита — в течение шести месяцев с даты последнего случая заболевания,
- в случае бешенства — в течение одного месяца с даты последнего случая заболевания,
- в случае сибирской язвы — в течение 15 дней с даты последнего случая заболевания,
- если все животные, подверженные обнаруженному в хозяйстве заболеванию, были забиты и на территории хозяйства проведена дезинфекция, — в течение 30 дней начиная с даты, когда животные были забиты и проведена дезинфекция, за исключением случаев сибирской язвы, когда запрет действует в течение 15 дней;
e) насколько мне известно, животное не имело контактов с животным семейства лошадиных, у которого имеется инфекционное или заразное заболевание, в течение 15 дней до даты составления данного свидетельства;
f) на дату обследования животное находится в надлежащем состоянии для транспортировки по запланированному маршруту в соответствии с положениями Регламента (ЕС) 1/2005 e
| Дата | Место | Печать и подпись официального ветеринара <*> |
|---|---|---|
<*> имя печатными буквами и должность.
a Настоящее свидетельство не требуется в случаях, когда имеется двустороннее соглашение в соответствии со статьей 6 Директивы 2009/156/ЕС.
b Действует в течение 10 дней.
d Дата вакцинации должна быть указана в паспорте.
e Настоящее заявление не освобождает перевозчиков от их обязанностей в соответствии с действующим законодательством Сообщества, в частности, относительно состояния перевозимых животных.
ТИПОВОЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ СЕРТИФИКАТ
Европейское сообщество Сертификат для торговли на территории Сообщества
┌──────────┬────────────────────────────┬─────────────────┬────────────────┐
<pre class="legal-pre">│Часть I: │I.1 отправитель │I.2 Номер │I.2.a Местный │
│подробная │имя │сертификата │номер │
│информация│ ├─────────────────┴────────────────┤
│о партии │адрес │I.3 Центральный компетентный орган│
│ │почтовый индекс ├──────────────────────────────────┤
│ │ │I.4 Местный компетентный орган │
│ ├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
│ │I.5 получатель │I.6 Номер связанных сертификатов, │
│ │имя │Номера сопроводительных документов│
│ │ ├──────────────────────────────────┤
│ │адрес │I.7 │
│ │почтовый индекс │ │
│ ├─────────────┬──────────────┼─────────────────┬────────────────┤
│ │I.8 │I.9 Регион │I.10 Страна │I.11 Регион │
│ │Страна │происхождения │назначения Код │назначения код │
│ │происхождения│код │ISO │ │
│ │Код ISO │ │ │ │
│ ├─────────────┴──────────────┼─────────────────┴────────────────┤
│ │I.12 Место происхождения / │I.13 Место назначения │
│ │место разведения │Хозяйство ┌─┐ Сортировочный │
│ │Хозяйство ┌─┐ Сортировочный │ └─┘ │
│ │ └─┘ │центр ┌─┐ Учреждение ┌─┐ Иное ┌─┐ │
│ │центр ┌─┐ Иное ┌─┐ │ └─┘ └─┘ └─┘ │
│ │ └─┘ └─┘ │ │
│ │Имя Номер одобрения │Имя Номер одобрения │
│ │Адрес │Адрес │
│ │Почтовый индекс │Почтовый индекс │
│ ├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
│ │I.14 место погрузки │I.15 Дата и время отправления │
│ │Почтовый индекс │ │</pre>
└──────────┼────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.16 Средство перевозки │I.17 Перевозчик: │
│Авиа ┌─┐ морская ┌─┐ ж/д ┌─┐│Имя Номер одобрения │
│ └─┘ └─┘ └─┘│Адрес │
│Автомобильная ┌─┐ Иное ┌─┐ │ │
│ └─┘ └─┘ │ │
│Идентификация │Почтовый индекс государство-член │
│ │ЕС │</pre>
├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.18 описание товара │I.19 Код товара (код CN) │
│ ├──────────────────────────────────┤
│ │I.20 Число/количество │</pre>
├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
│I.21 │I.22 Число упаковок │
├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.23 Номер контейнера / │I.24 Тип упаковки │
│печати │ │</pre>
├────────────────────────────┴──────────────────────────────────┤
│I.25 Товар сертифицирован для: │
│Разведение ┌─┐ Зарегистрированные животные семейства лошадиных │
<pre class="legal-pre"> │ └─┘ │
│┌─┐ Забой ┌─┐ │
│└─┘ └─┘ │
│Иное ┌─┐ │
│ └─┘ │</pre>
├────────────────────────────┬──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.26 транзит через третью │I.27 транзит через государство - │
│страну ┌────┐ │член ЕС ┌────┐ │
│ └────┘ │ └────┘ │
│Третья страна код ISO │Государство код ISO │
│Место выезда код │Государство код ISO │
│Место въезда номер BIP │Государство код ISO │
│ │ │</pre>
├────────────────────────────┼──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.28 Экспорт ┌────┐ │I.29 Оценочное время перевозки │
│ └────┘ │ │
│Третья страна код ISO │ │
│Место выезда код │ │</pre>
├────────────────────────────┴──────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.30 Маршрут │
│Да ┌────┐ Нет ┌────┐ │
│ └────┘ └────┘ │</pre>
├───────────────────────────────────────────────────────────────┤
<pre class="legal-pre"> │I.31 Идентификация товара │
│Виды (научное название) Система идентификации │</pre>
└───────────────────────────────────────────────────────────────┘
Европейское сообщество Зарегистрированные, предназначенные для развода и размножения, а также для забоя животные семейства лошадиных
| Часть II: сертификация | II. Ветеринарная информация <1> | II.a номер сертификата | II.b местный номер |
| Я, нижеподписавшийся, подтверждаю, что описанное выше животное (описанные выше животные) соответствует (соответствуют) следующим требованиям: II.1 животные были обследованы и при этом не было обнаружено клинических признаков заболевания; II.2 животные не предназначены для забоя в рамках национальной программы уничтожения инфекционных и заразных заболеваний; Либо [II.3 животные не ввозятся с территории или части территории государства-члена ЕС, в отношении которой установлены ограничения в связи с африканской чумой животных;] Или II.3 если животные ввозятся с территории или части территории государства-члена ЕС, в отношении которой установлены ограничения в связи с африканской чумой лошадей, они как минимум в течение 40 дней содержались на карантинной станции ___________ ; в отношении животных был проведен анализ для выявления антител вируса африканской чумы лошадей в соответствии с [Приложением IV к Директиве 2009/156/ЕС, причем анализ проводился одновременно на двух образцах, которые были взяты с промежутком 21 день — 30 дней _____ (укажите дату) и в течение 10 дней до отправки _______ (укажите дату);] Либо <3> [результаты анализа были негативными, если животные не были привиты от африканской чумы лошадей;] Или <2> [анализ продемонстрировал, что количество антител не увеличилось, если животные были привиты от африканской чумы лошадей] | |||
| Либо <3> [II.4 животные не были привиты от африканской чумы лошадей;] Или <2> II.4 животные были привиты от африканской чумы лошадей _______(укажите дату), Либо [<3> как минимум за два месяца до сертификации;] Или <2> как минимум за два месяца до отправки на станцию карантина;] II.5 животные не ввозятся из хозяйства (хозяйств), в отношении которого (которых) установлены ветеринарные запреты в связи с наличием по крайней мере одного из следующих факторов: Либо <3> не все животные вида, подверженного заболеваниям, перечисленным в [пунктах «a» - «g» ниже, были забиты в хозяйстве, и запрет продолжался как минимум: a) в отношении животных, которые, возможно, заражены дуриной: Либо <2> шесть месяцев с даты последнего фактического или возможного контакта с больным животным или животным, зараженным Trypanosoma equiperdom;] Или <2> в отношении жеребца — пока животное не будет кастрировано; b) в случае сапа — шесть месяцев с даты, когда было забито животное семейства лошадиных, зараженное либо показавшее положительные результаты анализа на наличие Burkholderia mallei или обнаружившее антитела к указанному патогену; c) в случае лошадиного энцефаломиелита любого вида — в течение шести месяцев с даты забоя заболевшего животного, за исключением случая энцефалита Западного Нила, когда период начинает исчисляться с даты, когда пораженное животное умерло, было вывезено с хозяйства или полностью выздоровело; d) в случае инфекционной анемии — до даты, когда после забоя заболевших животных были получены негативные результаты повторного анализа Коггинса, проведенного в отношении оставшихся животных три месяца спустя после первого; e) в случае везикулярного стоматита — в течение шести месяцев с даты последнего случая заболевания; f) в случае бешенства — в течение одного месяца с даты последнего случая заболевания;] g) в случае сибирской язвы — в течение 15 дней с даты последнего случая заболевания;] Или <2> [после обнаружения случаев дурины, сапа, лошадиного энцефаломиелита любого вида, инфекционной анемии лошадей, везикулярного стоматита, сибирской язвы или бешенства все животные видов, подверженных заболеванию, в хозяйстве были забиты, и запрет действовал в течение 30 дней (15 в случае сибирской язвы), начиная с даты, когда после забоя животных была успешно проведена дезинфекция;] II.6 насколько мне известно, животные не имели контактов с животными семейства лошадиных, зараженными инфекционными или заразными болезнями в течение 15 дней до отправки; II.7 во время обследования животные находились в надлежащем состоянии для транспортировки по намеченному маршруту в соответствии с положениями Регламента (ЕС) 1/2005 <3>. | |||
| Примечания Часть I Графа 1.6: соответствует номеру разрешения CITES в отношении животных семейства лошадиных, перечисленных в Вашингтонской конвенции об охраняемых видах. Графа 1.16: регистрационный номер (ж/д вагоны, контейнеры и грузовые автомобили), номер рейса (авиаперевозка) или название (корабля). Графа 1.19: используйте соответствующий код Гармонизованной системы (HS) Всемирной таможенной организации: 01.01.01 или 01.01.06.19. Графа 1.31: виды — лошадь, осел, мул, лошак, зебра (включая виды, полученные путем их скрещивания). Идентификационная система: до 31 декабря 2009 г. соответствует идентификационному номеру согласно статье 2 Решения 2000/68/ЕС Европейской комиссии, а с 1 января 2010 г. — уникальному номеру согласно статье 2 (2) «d» и разделу 1 (A) (4) приложения I к Регламенту (ЕС) 504/2008. Часть II <1> информация в графах 2.1 - 2.6 не требуется при наличии двустороннего договора в соответствии со статьей 6 Директивы 2009/156/ЕС. <2> Удалите неприменимое. <3> Настоящее заявление не освобождает перевозчиков от их обязанностей в соответствии с действующим законодательством Сообщества, в частности, относительно состояния перевозимых животных. - Сертификат действителен в течение 10 дней - Цвет печати и подписи должен отличаться от цвета остального текста сертификата | |||
| Официальный ветеринар или официальный инспектор Имя (прописными буквами) Квалификация и должность Местное ветеринарное подразделение Номер соответствующего LVU Дата Подпись Печать | |||
АФРИКАНСКАЯ ЧУМА ЛОШАДЕЙ ДИАГНОСТИКА
Реагенты для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA), описанного ниже, можно получить в Эталонной лаборатории Европейского сообщества или эталонных лабораториях Международного эпизоотического бюро по африканской чуме лошадей.
Для выявления специфических антител к AHSV в сыворотках от видов лошадиных используют конкурентный ELISA. Поликлональная, иммунная анти-AHSV сыворотка морских свинок широкого спектра действия (далее «антисыворотка морских свинок») является специфичной в отношении серогрупп, и способна выявить все известные серотипы вируса AHS.
Принцип теста заключается в прерывании реакции между антигеном AHSV и антисывороткой морской свинки при помощи образца тест-сыворотки. Антитела к AHSV в образце тест-сыворотки будут конкурировать с антителами в антисыворотке морской свинки, что приводит в результате к редуцированию ожидаемого цвета (после добавления меченых ферментом антител против морских свинок и субстрата). Сыворотки можно проверить в разовом разведении 1 к 5 (капельный метод) или титровать (метод титрования сывороток), чтобы получить конечные точки разведения. Показатели ингибирования выше 50% можно считать положительными.
Протокол тестирования, описанный далее в настоящем документе, используется в Региональной эталонной лаборатории по африканской чуме лошадей в Пирбрайте (Соединенное Королевство).
1.1.1 Подготовка планшетов
1.1.1.1. Сенсибилизировать планшеты ELISA антигеном AHSV, экстрагированным из зараженных культур клеток и разведенных в карбонатном/бикарбонатном буфере, pH 9,6. Инкубировать планшеты ELISA в течение ночи при температуре 4 °C.
1.1.1.2. Промыть планшеты три раза фосфатно-буферным раствором (ФБР), pH 7,2 — 7,4 pH, промокнуть насухо абсорбирующей бумагой.
1.1.2 Контрольные лунки
1.1.2.1. Титровать положительные контрольные сыворотки в серии двукратного разведения от 1 к 5 до 1 к 640 по колонке 1 в блокирующем буфере (PBS, содержащий 0,05% (о/о) Твин-20, 5,0% (в/о) сухого обезжиренного молока (Cadbury's Marvel TM) и 1% (о/о) сыворотки от взрослой коровы), чтобы полученный конечный объем составил 50 мкл/лунку.
1.1.2.2. Добавить 50 мкл отрицательной контрольной сыворотки, разведенной 1 к 5 (10 мкл сыворотки + 40 мкл блокирующего буфера), в лунки A и B колонки 2.
1.1.2.3. Добавить 100 мкл/лунку блокирующего буфера в лунки C и D колонки 2 (пустая).
1.1.2.4. Добавить 50 мкл блокирующего буфера в лунки E, F, G и H колонки 2 (контрольная морская свинка).
1.1.3 Капельный метод
1.1.3.1. Добавить разведение 1 к 5 каждой тест-сыворотки в блокирующий буфер, чтобы удвоить лунки колонок 3 — 12 (10 мкл сыворотки + 40 мкл блокирующего буфера).
1.1.4 Метод титрования сыворотки
1.1.4.1. Приготовить серию двукратного разведения каждого образца для испытания (1 к 5 до 1 к 640) в блокирующем буфере через 8 лунок отдельных колонок (3 до 12).
1.1.5. Добавить 50 мкл антисыворотки морских свинок, предварительно разведенных в блокирующем буфере, во все лунки за исключением пустых лунок планшета ELISA (все лунки сейчас содержат конечный объем 100 мкл).
1.1.5.1 Инкубировать на 1 час при 37 °C на орбитальном шейкере.
1.1.5.2 Промыть планшеты три раза и промокнуть досуха, как ранее.
1.1.5.3. Добавить 50 мкл конъюгата пероксидазы хрена с антителами кролика против иммуноглобулина морской свинки, который был предварительно разведен в блокирующем буфере в каждой лунке.
1.1.5.4 Инкубировать на 1 час при 37 °C на орбитальном шейкере.
1.1.5.5 Промыть планшеты три раза и промокнуть насухо, как ранее.
1.1.6 Хромоген
Приготовить раствор хромогена (ортофенилдиамина ОФД) в соответствии с инструкциями производителя (0,4 мг/мл в стерильной дистиллированной воде) непосредственно перед использованием. Добавить субстрат (перекись водорода H_{2}O_{2} ), чтобы получить итоговую концентрацию 0,05% (о/о) (1 к 2000 30% раствора H_{2}O_{2} ). Добавить 50 мкл ОФД раствора в каждую лунку и оставить планшеты на рабочей поверхности на 10 минут при средней температуре. Остановить реакцию путем добавления 50 мкл/лунку 1М серной кислоты (H_{2}SO_{4}) .
1.1.7 Считывание результатов
Спектрофотометрическое считывание результатов при 492 нм.
1.2.1. Используя пакет программного обеспечения, распечатайте показатели оптической плотности (OD), процентного ингибирования (PI) для тестовых и контрольных сывороток на основе среднего показателя, записанного в четырех контрольных лунках с сыворотками от морских свинок. Сведения, выраженные через показатели OD и PI, используют для определения того, проведен ли тест в допустимых пределах. Верхние контрольные пределы (UCL) и нижние контрольные пределы (LCL) варьируются в промежутке показателей OD от 1,4 до 0,4 соответственно. Титр в конечной точке для положительного контроля, основанный на 50% ингибировании, должен быть 1 к 240 (в рамках от 1 к 120 до 1 к 480). Любой планшет, который не соответствует вышеупомянутым критериям, следует отбраковать. Однако если показатель титра положительной контрольной сыворотки больше чем 1 к 180 и образцы для тестирования по-прежнему отрицательные, тогда можно принять отрицательные образцы для тестирования.
Лунки с отрицательной контрольной сывороткой в двух повторах и пустые лунки в двух повторах должны фиксировать показатели PI между + 25% и — 25%, между + 95% и 105% соответственно. Невозможность оказаться в этих пределах не позволяет считать планшет недействительным, но показывает образование фонового цвета.
1.2.2. Диагностический порог (точка разделения) для тест-сывороток составляет 50% (PI 50%).
Образцы, фиксирующие PI показатели больше 50%, учитывают как положительные. Образцы, которые фиксируют PI показатели ниже 50%, записывают как отрицательные. Образцы, которые фиксируют PI показатели выше и ниже порога для лунок в двух повторах, считают сомнительными. Такие образцы можно повторно протестировать капельным методом и путем титрования. Положительные образцы можно также титровать, чтобы определить показатель степени положительности.
Описанный ниже анализ соответствует описанию в главе 2.1.11 Руководства МЭБ по стандартам для диагностических тестов и вакцин, 4 издание, 2000 г.
Рекомбинантный белок VP7 был использован в качестве антигена для выявления антител против вируса AHS с высоким индексом чувствительности и специфичности. Другие преимущества белка заключаются в том, что он стабилен и не является инфекционным.
2.1.1 Твердая фаза
2.1.1.1. Планшеты ELISA сенсибилизируют рекомбинантным VP7 AHSV-4, разведенным в карбонатном/бикарбонатном буфере, pH 9,6. Инкубировать планшеты в течение ночи при 4 °C.
2.1.1.2. Промыть планшеты пять раз, используя дистиллированную воду, содержащую 0,01% (о/о) Твин 20 (промывочный раствор). Аккуратно встряхните планшет над абсорбирующим материалом, чтобы удалить остатки промывочного раствора.
2.1.1.3. Блокировать планшеты фосфатно-буферным раствором (ФБР) + 5% (в/о) обезжиренного молока (Nestle Dry Skim Milk TM), 200 мкл/лунку на 1 час при 37 °C.
2.1.1.4. Удалите блокирующий раствор и аккуратно встряхните планшет над абсорбирующим материалом.
2.1.2 Образцы для испытаний
2.1.2.1. Образцы сыворотки, которые необходимо протестировать, положительные и отрицательные контрольные сыворотки, разведены 1 к 25 в ФБР + 5% (в/о) обезжиренного молока + 0,05% (о/о) Твин 20, 100 мкл на лунку. Инкубировать на 1 час при 37 °C.
Для проведения титрования приготовьте серию двукратного разведения из 1 к 25 (100 мкл/лунку), одна сыворотка на колонку планшета, сделать то же самое с положительными и отрицательными контролями. Инкубировать на 1 час при 37 °C.
2.1.2.2 Промыть планшеты, как описано на этапе 2.1.1.2.
2.1.3 Конъюгат
2.1.3.1. Разлить 100 мкл/лунку конъюгированный пероксидазой хрена антилошадиный гамма-глобулин, разведенный в ФБР + 5% молоко Твин 20, pH 7,2. Инкубировать на час при 37 °C.
2.1.3.2 Промыть планшеты, как описано в пункте 2.1.1.2.
2.1.4 Хромоген/Субстрат
2.1.4.1. Добавить 200 мкл/лунку раствора хромоген/субстрат (10 мл 80,6 мМ DMAB (диметиламинобензальдегида) + 10 мл 1,56 мМ MBTH (3-метил-2-бензтиазолинон-гидразон гидрохлорида) + 5 мкл H_{2}O_{2} ).
Проявление цвета останавливается при добавлении 50 мкл 3NH_{2}SO_{4} после приблизительно 5 — 10 минут (до тех пор, как отрицательный контроль начинает окрашиваться).
Можно также использовать другие хромогены. Например, ABTS (2,2'-азино-бис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты)), ТМВ (тетраметилбензидин), или OPD (ортофенилдиамин).
2.1.4.2 Снимите показатели с планшетов при 600 нм (или 620 нм).
2.2.1. Рассчитать значение точки разделения путем добавления 0,6 к показателю отрицательного контроля (0,6 стандартное отклонение, полученное с группой 30 отрицательных сывороток).
2.2.2. Образцы для тестирования, дающие показатели абсорбции ниже, чем точка разделения, считают отрицательными.
2.2.3. Образцы для тестирования, дающие показатели абсорбции больше, чем точка разделения + 0,15 считают положительными.
2.2.4. Образцы для тестирования, дающие средние показатели абсорбции, являются сомнительными, и следует использовать второй метод, чтобы подтвердить результат.
Блокирующий ELISA разработан, чтобы выявить специфические антитела к вирусу африканской чумы лошадей в сыворотках от восприимчивых видов. VP7 является основным антигенным вирусным белком AHSV и сохраняется в девяти серотипах. Так как моноклональные антитела также выявляют против VP7, то проба даст более высокий уровень чувствительности и специфичности. Далее, антиген рекомбинантного белка VP7 является абсолютно нетоксичным, следовательно, гарантирует высокую степень безопасности.
Принцип теста заключается в прерывании реакции между рекомбинантным VP7 как антигеном, связанным с планшетом ELISA, и конъюгированными антителами, специфичными для VP7. Антитела в тестовых сыворотках заблокируют реакцию между антигеном и моноклональными антителами, что приводит в результате к редукции цвета.
Тест, описанный далее в настоящем документе, проводят в Эталонной лаборатории Европейского сообщества по африканской чуме лошадей в Альхете, Испания.
3.1.1 Планшеты ELISA
3.1.1.1. Сенсибилизировать планшеты ELISA рекомбинантным VP7 AHSV-4, разведенным в карбонатном/бикарбонатном буфере, pH 9,6. Инкубировать в течение ночи при 4 °C.
3.1.1.2. Промыть планшеты пять раз фосфатно-буферным раствором (ФБР), содержащим 0,05% (о/о) Твин 20 (ФБРТ).
3.1.1.3. Провести стабилизацию планшета путем его обработки стабилизирующим раствором (чтобы обеспечить долгосрочное хранение при 4 °C без потери активности) и промокнуть насухо абсорбирующим материалом.
3.1.2 Образцы для тестирования и контрольные
3.1.3 Конъюгат
Добавить 50 мкл/лунку предварительно разведенных моноклональных антител, конъюгированных пероксидазой хрена (моноклональные антитела, специфические к VP7) в каждую лунку и аккуратно перемешать до получения однородной массы. Инкубировать в течение 30 минут при 37 °C.
3.1.4 Промыть планшеты пять раз при помощи ФБРТ и промокнуть насухо.
3.1.5 Хромоген/Субстрат
Добавить 100 мкл/лунку раствора хромоген/субстрат (1 мл ABTS (2,2'-азино-бис 3-этилбензотиазолин-6-сульфоновой кислоты) 5 мг/мл + 9 мл субстратного буфера (0,1 М фосфат-цитратный буфер с pH 4, содержащий 0,03% H_{2}O_{2} ) и инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре.
Проявление цвета остановить путем добавления 100 мкл/лунку 2% (в/о) SDS (додецилсульфата натрия).
3.1.6 Считывание результатов
Считать при 405 нм с помощью ELISA-ридера
3.2.1 Валидация анализа
Тест является валидным, когда оптическая плотность (OD) отрицательного контроля (ОК) выше 1,0 и OD положительного контроля (ПК) ниже 0,2.
3.2.2 Расчет точки разделения
Где ОК является OD отрицательного контроля и ПК является OD положительного контроля.
3.2.3 Интерпретация результатов
Образцы с OD ниже, чем положительная точка разделения, необходимо считать положительными к антителам против вируса AHS.
Образцы с OD выше, чем отрицательная точка разделения, необходимо считать отрицательными к антителам против вируса AHS.
Образцы с OD между этими двумя показателями следует считать сомнительными, и следует повторно взять у животных образцы после 2 — 3 недель.
Отмененная Директива со списком изменений (указана в статье 22)
| Директива 90/426/ЕЭС Совета ЕС (ОЖ № L 224, 18.8.1990, стр. 42) |
|
|---|---|
| Директива 90/425/ЕЭС Совета ЕС (ОЖ № L 224, 18.8.1990, стр. 29) |
Только статья 15 (3) |
| Директива 91/496/ЕЭС Совета ЕС (ОЖ № L 268, 24.9.1991, стр. ) |
Только в отношении ссылки на Директиву 90/426/ЕЭС в статье 26 (2) |
| Решение 92/130/ЕЭС Европейской комиссии (ОЖ № L 47, 22.2.1992, стр. 26) |
|
| Директива 92/36/ЕЭС Совета ЕС (ОЖ № L 157, 10.6.1992, стр. 28) |
Только статья 1 |
| Акт о присоединении 1994 г., приложение I, пункт V.E.I.A 3 (ОЖ № С 241, 28.9.1994, стр. 132) |
|
| Решение 2001/298/ЕЭС Европейской комиссии (ОЖ № L 102 12.4.2001, стр. 63) |
Только в отношении ссылки на Директиву 90/426/ЕЭС в статье 1 (1), и приложении I, пункт 2 |
| Решение 2002/160/ЕС Европейской комиссии (ОЖ № L 53, 23.2.2007, стр. 37) |
|
| Регламент (ЕС) 806/2003 Совета ЕС (ОЖ № L 122, 16.5.2003, стр. 1) | Только приложение III, пункт 10 |
| Акт о присоединении 2003 г., приложение II, пункт 6.B.I.16 (ОЖ № L 236, 23.9.2003, стр. 381) |
|
| Директива 2004/68/ЕС Совета ЕС (ОЖ № L 139, 30.4.2004, стр. 321) |
Только статья 15 |
| Директива 2006/104/ЕС Совета ЕС (ОЖ № L 363, 20.12.2006, стр. 352) |
Только приложение, пункт 1.2 |
| Директива 2008/73/ЕС Совета ЕС (ОЖ № L 219, 14.8.2008, стр. 40) |
Только статья 7 |
Список сроков для преобразования в национальное право (указан в статье 22)
| 90/426/ЕЭС 90/425/ЕЭС 91/496/ЕЭС 92/36/ЕЭС 2004/68/ЕС 2006/104/ЕС 2008/73/ЕС |
1 января 1992 г. 1 июля 1992 г. 1 июля 1992 г. 31 декабря 1992 г. 19 ноября 2005 г. 1 января 2007 г. 1 января 2010 г. |
|---|
| Директива 90/426/ЕЭС | Настоящая Директива |
|---|---|
| Статья 1 | Статья 1 |
| Статья 2 «a» и «b» | Статья 2 «a» и «b» |
| Статья 2 «c» | Статья 2 «c»i» и «ii» |
| Статья 2 «d» — «i» | Статья 2 «d» - «i» |
| Статья 3 | Статья 3 |
| Статья 4 (1), (2) и (3) | Статья 4 (1), (2) и (3) |
| Статья 4 (4) «i» и «ii» | Статья 4 (4) «a» и «b» |
| Статья 4 (5) «a», абзацы 1 — 6 | Статья 4 (5) «a» «i» - «vi» |
| Статья 4 (5) «b» | Статья 4 (5) «b» |
| Статья 4 (6), первый подпараграф абзацы 1 — 8 | Статья 4 (6), первый подпараграф «a» - «h» |
| Статья 4 (6), подпараграфы 2 и 3 | Статья 4 (6), подпараграфы 2 и 3 |
| Статья 5 (1) | Статья 5 (1) |
| Статья 5 (2) «a» | Статья 5 (2), подпараграф 1, «a» и «b» |
| Статья 5 (2) «b» | Статья 5 (2), подпараграф 2, «a» и «b» |
| Статья 5 (2) «c» | Статья 5 (3) |
| Статья 5 (2) «d» | Статья 5 (4) |
| Статья 5 (3) «a» и «b» | Статья 5 (5) «a» и «b» |
| Статья 5 (3) «c», абзацы 1 и 2 | Статья 5 (5) «c», подпараграф 1, «i» и «ii» |
| Статья 5 (3) «c», второй абзац, последнее предложение | Статья 5 (5) «c», подпараграф 2 |
| Статья 5 (3) «e» и «d» | Статья 5 (5) «d» и «e» |
| Статья 6 | Статья 6 |
| Статья 7 | Статья 7 |
| Статья 8 (1), подпараграф 1, абзацы 1 и 2 | Статья 8 (1), «a» и «b» |
| Статья 8 (1) подпараграф 2 | Статья 8 (2) |
| Статья 8 (2) | Статья 8 (3) |
| Статья 9 | Статья 9 |
| Статья 10 | Статья 10 |
| Статья 11 (1) | Статья 11 |
| Статья 11 (2) | - |
| Статья 12 | Статья 12 |
| Статья 13 | Статья 13 |
| Статья 14 | Статья 14 |
| Статья 15 | Статья 15 |
| Статья 16 (1) «a» — «f» | Статья 16 (1) «a» - «f» |
| Статья 16 (1), последнее предложение | - |
| Статья 16 (2) | Статья 16 (2) |
| Статья 17 | Статья 18 |
| Статья 18 | Статья 17 |
| Статья 19 «i» — «iv» | Статья 19 «a» - «d» |
| Статья 22 | - |
| Статья 23 | Статья 20 |
| Статья 24 (1) и (2) | Статья 21 (1) и (2) |
| Статья 24 (3) | - |
| Статья 25 (1) и (2) | Статья 21 (1) и (3) |
| Статья 26 | - |
| Статья 27 | - |
| - | Статья 22 |
| - | Статья 23 |
| Статья 28 | Статья 24 |
| Приложение A | Приложение I |
| Приложение B | Приложение II |
| Приложение C | Приложение III |
| Приложение D | Приложение IV |
| - | Приложение V |
| - | Приложение VI |
Переход между статьями: Ctrl + ← / →