Методические указания по определению карбосульфана в зерне кукурузы тонкослойной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6208-91)
29 июля 1991 г. № 6208-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ КАРБОСУЛЬФАНА В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Карбосульфан-2,3-дигидро-2,2-диметил-7-бензофуранил [дибутиламино)тио]метил карбамат является действующим веществом инсектицидного препарата «Маршал», ф. ФМС, США.
Эмпирическая формула: C_{20}H_{32}N_{2}O_{3}S .
Вязкая коричневая жидкость; Т. кип. 124 — 128 °C при ~ 0,1 Па (1 \cdot 10^{- 3}\text{мм рт}.\text{ст}.) . Растворимость в воде 0,3 мг/л; растворим в большинстве органических растворителей. Давление паров 0,041 мПа. Препарат разлагается при температуре > 150 °C. Период полураспада (25 °C) при pH = 4 — 1 час, pH = 6 — 22 часа, pH = 7 — 184 часа, pH = 8 — 340 часов, pH = 9 — 1400 часов.
Выпускается в виде 2,5; 4 и 25%-ных концентратов эмульсии, а также 15%-ных гранул.
Рекомендован для борьбы с рядом почвообитающих и листогрызущих насекомых — вредителей цитрусовых, люцерны, кукурузы, сорго, сои, овощных и полевых культур (включая картофель, рис, сахарную свеклу) при нормах расхода 2,5 — 10 г/кг семян.
\text{ЛД}_{50} для крыс 209 мг/кг, для мышей 138 мг/кг.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБОСУЛЬФАНА В ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на экстракции препарата смесью органических растворителей (различные сочетания н-гексана, 2-пропанола, этилацетата и хлороформа), очистке экстракта ацетонитрилом и на колонке с сорбентом (силикагель, флоризил), хроматографировании вещества в тонком слое силикагеля (пластинки «Силуфол») с последующим проявлением пятен реактивом Драгендорфа.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Число параллельных определений — 5.
Размах варьирования — 85,4 — 90,4%.
Среднее значение определения — 87,9%.
Стандартное отклонение — 2,08%
Относительное стандартное отклонение — 2,36%.
Доверительный интервал среднего (p = 0,95) — +/- 2,5%.
Предел обнаружения — 0,10 — 0,15 мг/кг.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, ос.ч., ТУ 6-09-3513-86.
Н-гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.
2-пропанол (изопропиловый спирт), ч., ТУ 6-09-402-81.
Этиловый эфир уксусной кислоты, х.ч., ТУ 6-09-6515-70.
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.
Натрий хлористый, ч.д.а., ГОСТ 4233-77.
Натрий сернокислый, безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.
Карбосульфан, ан. ст., фирма ФМС.
Силикагель 40/100 мк, произв. ЧССР.
Висмут азотнокислый, ч.д.а., ГОСТ 4110-75.
Винная кислота, ч., ГОСТ 5817-77.
Уксусная кислота, ледяная, х.ч., ГОСТ 18290-72.
Калий йодистый, х.ч., ГОСТ 4232-74.
Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77, 40%-ный раствор.
Реактив Драгендорфа для проявления хроматограмм: исходный раствор получают смешиванием в соотношении 1:1 растворов 1,7 г нитрата висмута и 20 г винной кислоты (или 20 мл ледяной уксусной кислоты, или 20 мл 40% раствора серной кислоты) в 80 мл воды и 16 г йодида калия в 40 мл воды. Эта смесь устойчива в течение 3-х месяцев. Перед опрыскиванием смешивают 10 мл исходного раствора, 20 г винной кислоты (или 20 мл уксусной кислоты или 40% раствора серной кислоты) и 100 мл воды.
2.3. Посуда и оборудование
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 8613-75.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Испаритель ротационный, ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Камера для опрыскивания, ТУ 2511-430-70.
Пластинки «Силуфол» размером 15 x 15 см.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-11081-73.
Камера для хроматографирования размером 150 x 200 мм, ГОСТ 10565-75.
Колонки для хроматографирования стеклянные для очистки экстрактов, 20 x 1 см.
2.4. Отбор и хранение проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утв. 21.08.79 г., № 2051-79.
Пробы хранят при необходимости в холодильнике.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция пестицида из анализируемой пробы
К 20 г измельченного материала добавляют 60 мл смеси н-гексана и 2-пропанола (2:1), либо смеси н-гексана и этилацетата (2:1), либо смеси н-гексана и хлороформа (2:1). Содержимое взбалтывают на аппарате для встряхивания в течение 15 мин. Пробу фильтруют через фильтр («синяя лента»). Повторяют экстракцию тем же количеством растворителя в тех же условиях. Пробу фильтруют. Экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием и упаривают досуха на ротационном испарителе. К сухому остатку добавляют 2 мл ацетонитрила, оставляют на 5 мин, сливают раствор, повторяют эту процедуру тем же количеством растворителя. Ацетонитрильные экстракты объединяют. В делительную воронку вливают 150 мл дистиллированной воды, добавляют 12 г хлористого натрия, взбалтывают раствор в течение 2 мин, вносят ацетонитрильный экстракт. Добавляют 50 мл н-гексана и взбалтывают в течение 2 мин. Экстракцию н-гексаном повторяют еще дважды. Экстракты объединяют и сушат безводным сернокислым натрием.
Упаривают н-гексановый экстракт до объема 1 — 2 мл. Далее производят очистку экстракта колоночной хроматографией.
2.5.2 Очистка на колонке
Стеклянную колонку высотой 20 см и диаметром 1 см тщательно моют, сушат и последовательно заполняют обезжиренной ватой (0,5 г), силикагелем 100/160 меш (или флоризилом, 60/100 меш) — 10 г и безводным сульфатом натрия — 5 г. Пропускают через колонку 60 мл смеси н-гексана и этилацетата (95:5 по объему). Вводят анализируемую пробу и элюируют 40 мл вышеуказанной смеси.
После того, как слой сульфата натрия поглотит растворитель, полученный элюат сливают. Приливают в колонку еще 50 мл смеси н-гексана и этилацетата (95:5), элюат собирают и упаривают его до объема 1 мл. Аликвотную часть (200 — 300) мкл наносят на пластинку «Силуфол». Рядом с пробой на расстоянии 1,5 см (друг от друга) наносят серию стандартных растворов карбосульфана в количестве 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 мкг. Производят хроматографирование в смеси растворителей н-гексан-ацетон (3:1) или н-гексан-ацетон (4:1).
После поднятия фронта растворителя на высоту 10 см пластинку вынимают, сушат и обрабатывают для проявления зон локализации пестицида реактивом Драгендорфа.
При наличии в пробах карбосульфана появляются пятна темно-вишневого цвета на светло-желтом фоне. Коэкстрактивные вещества располагаются на хроматограмме выше, чем изучаемый пестицид и окрашены в желто-зеленый цвет R_{f} карбосульфана 0,55 (0,47).
Обработку результатов анализа производят путем сопоставления площади и интенсивности пятна пробы и серии стандартов.
Содержание карбосульфана в анализируемой пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
X = \frac{C \cdot V}{V_{0} \cdot P} , где
C — количество карбосульфана, найденное на пластинке методом сопоставления со стандартом, мкг;
P — навеска анализируемой пробы, г.
Примечание: Если в данном объеме пестицид не обнаружится, то на пластинку наносят весь сконцентрированный объем, соответствующий данной пробе.
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.