Методические указания по определению триасульфурона в растительном материале, соломе, воде и почве методами газожидкостной и тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6177-91)
Утверждено Министерством здравоохранения СССР 29 июля 1991 г. № 6177-91
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ТРИАСУЛЬФУРОНА В РАСТИТЕЛЬНОМ МАТЕРИАЛЕ, СОЛОМЕ, ВОДЕ И ПОЧВЕ МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Разработчики: Кошарновская Т.А., Гиренко Д.Б., ВНИИГИНТОКС, г. Киев.
Логран, /ЦГА 131036/, 75% в.г.
Триасульфурон, 3-(6-метокси-4-метил-1,3,5-триазин-2-ил)-1-2-(2-хлорэтокси) фенилсульфонил-мочевина (ИЮПАК).
Триасульфурон относится к группе сульфонилмочевин.
Белые кристаллы с Tпл. 186 °C. Растворимость в воде при 20 °C 1,5 г/л, незначительная растворимость в большинстве органических растворителей.
Логран используется в качестве гербицида против однолетних двудольных сорняков, в том числе устойчивых к 2,4-Д и 2М-4Х на посевах пшеницы и ячменя при норме расхода 6,5 — 13 г/га.
Триасульфурон умеренно токсичен для теплокровных. Оральная ЛД50 для крыс > 5000 мг/кг, дермальная ЛД50 > 2000 мг/кг. Вещество не токсично для рыб, птиц и дафний. Не раздражает слизистую глаз у кроликов, при попадании на кожу наблюдается слабое раздражение.
2.1 Основные положения.
2.1.1 Принцип метода.
Метод основан на извлечении триасульфурона из анализируемой пробы метанол-сульфатным буфером (pH 7) в соотношении 2:1. Очистка экстрактов осуществляется распределением между несмешивающимися фазами. Количественное определение остаточных количеств проводят хроматографическими методами (ГЖХ, ТСХ).
2.1.2 Определению не мешают наполнители технического препарата.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода.
2.2 Реактивы и растворы.
Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-77.
Фосфорная кислота, х.ч., ГОСТ 6552-80.
Фосфатный буфер (pH 7), ГОСТ 8.135-74.
Бикарбонат натрия, х.ч., (чда), ГОСТ 2156-76.
Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74.
Хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30.
Едкий кали, ч., ГОСТ 9285-78.
Нитрат серебра, ч., ГОСТ 1277-75.
Бромфеноловый синий, ч., ТУ 6-09-3719-83.
Лимонная кислота, осч., ТУ 6-09-584-75, 2% раствор.
2.3 Приборы и посуда.
Газовый хроматограф, снабженный термоионным детектором (Цвет, газохром или др.).
Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-77.
Колбы конические на шлифе емкостью 250 — 500 мл, ГОСТ 10394-74.
Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.
Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.
Делительные воронки, ГОСТ 23336-82.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1081-73.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.
Микрошприц МШ-10, ТУ 2-833-106.
Прибор для получения диазометана:
- колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);
- холодильник Либиха на шлифах;
- делительная воронка на шлифе (капельница);
- П-образный переходник на шлифах;
- капилляр.
Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.
Пластинки «Силуфол» (Хемапол, ЧССР).
2.4 Отбор, хранение и подготовка проб.
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 г. за № 2051-79.
Хранят пробы в морозильной камере (-14 — 20 °C).
2.5 Подготовка к определению.
2.5.1 Приготовление стандартного раствора.
Стандартный раствор лограна, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл хлороформа. Хранят в холодильнике не более 6 месяцев.
2.5.2 Приготовление проявляющего реактива.
Проявляющий реактив: Раствор А: 50 мл бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 20 мл дистиллированной воды и прибавляют 60 мл ацетона. Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим, пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.
2.5.3 Подвижная фаза хлороформ:ацетон 9:1.
2.5.4 Получение диазометана.
В реакционную колбу на 500 мл помещают 6 г едкого кали, 3 мл гидразингидрат, 3 мл метанола. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 кап. за 1 — 2 с. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, конец которого снабжен газоотводной трубкой, которая погружена в слой исследуемого ацетонового раствора, находящегося на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.
Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.
После окончания насыщения исследуемого ацетонового раствора (не менее 4 мин), прекращают подачу в реакционную колбу хлороформ, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.
2.6 Описание определения.
2.6.1 Экстракция и очистка экстрактов.
2.6.1.1. Солома. 50 г соломы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл (500 мл), приливают 200 мл смеси метанол-фосфатный буфер (pH 7) в соотношении 2:1, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Отделяют раствор. Колбу и фильтр дважды промывают 50 мл фосфатным буфером (pH 7). Объединяют экстракты и экстрагируют препарат хлороформом трижды по 75 мл. Водную фазу отбрасывают, а хлороформные экстракты объединяют.
Примечание: Логран медленно гидролизуется в кислом растворе. Поэтому следует провести операцию реэкстракции из водной фазы в органическую без перерыва.
2.6.1.2. Растительный материал. 25 г растительного материала помещают в коническую колбу емкостью 250 мл. Далее определение проводят согласно пункту 2.6.1.1.
2.6.1.3. Почва. 100 г почвы помещают в коническую колбу емкостью 500 мл. Далее определение проводят согласно пункту 2.6.1.1.
2.6.1.4. Вода. Не менее 3 л средней пробы воды экстрагируют хлороформом. Хлороформный экстракт переносят в делительную воронку и логран экстрагируют тремя порциями по 100 мл водного раствора бикарбоната натрия (5%). Органическую фазу отбрасывают, водные экстракты объединяют и переносят обратно в делительную воронку, подкисляют фосфорной кислотой до pH 3 — 4. Препарат экстрагируют тремя порциями по 75 мл хлороформа. Хлороформные экстракты объединяют и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани не более 45 °C.
2.6.2 Получение производных.
При определении триасульфурона методом ГЖХ проводят метилирование. К сухому остатку приливают 1 мл ацетона и пропускают через этот раствор диазометан в течение 4 мин. После прекращения пропуска диазометана исследуемому раствору дают постоять 30 мин. Затем выпаривают растворитель досуха. Растворяют по 4 мкл пробы. Одновременно с пробой готовят и стандартные растворы лограна с концентрацией 10 мкл/мл, 5 мкл/мл, 2 мкл/мл.
2.6.3 Условия хроматографирования.
2.6.3.1 ГЖХ.
Хроматограф с термоионным детектором (марки «Цвет 500» и др.).
Колонка стеклянная, длина 1 м, d = 3 мм.
Носитель — хроматон, N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм).
Температура: испарителя — 265 °C.
Расходы: азота — 34 мл/мин, водорода — 12 мл/мин, воздуха — 150 +/- 80 мл/мин.
Рабочая шкала электрометра: 64·10-10 А.
Скорость протяжки ленты самописца 240 мм/час.
Время удерживания при данных условиях: 4 мин 25 с.
Минимально детектируемое количество: 8 нг.
2.6.3.2 ТСХ.
Пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку «Силуфол». Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием лограна (2, 5, 7 и 10 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования. Хроматограмму развивают в смеси хлороформ-ацетон (9:1). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помешают ее под тягу и дают возможность испариться растворителям, после чего обрабатывают пластинку из пульверизатора вначале раствором бромфенолового синего, затем раствором лимонной кислоты. Препарат проявляется на пластинках в виде синих пятен на желтом фоне с Rf = 0,53 +/- 0,03.
2.6.4 Обработка результатов анализа.
2.6.4.1 ГЖХ.
Содержание триасульфурона в пробе рассчитывают по формуле:
X = \frac{C_{cm} \cdot V_{1} \cdot H_{2} \cdot V_{3}}{V_{2} \cdot H_{1} \cdot M} , где
X — количество препарата в пробе, мг/кг, мг/л;
Cст — содержание вещества в стандарте, мкг/мл;
V1 — объем стандарта, введенного в колонку газового хроматографа, мл;
V2 — объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового хроматографа, мкл;
V3 — общий объем анализируемой пробы, мл;
H1 — высота пика стандарта, мм;
H2 — высота пика анализируемой пробы, мм;
M — масса пробы, взятой для анализа, г.
2.6.4.2 ТСХ.
Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.
Содержание триасульфурона в анализируемой пробе X мг/кг:
\text{Х } = \frac{\text{А}}{\text{Р}} , где
A — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
3. Требования техники безопасности.
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.