Временные методические указания по определению остаточных количеств трибенурон-метила в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых культур хроматографическими методами
(утв. Минздравом СССР 29.07.1991 № 6076-91)
29 июля 1991 г. № 6076-91
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИБЕНУРОН-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
Калинин В.А. — к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. — к.б.н.
Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. — зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. — к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.
Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.
1. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПРЕПАРАТА
Трибенурон-метил-метиловый эфир 2-[4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил(метил)карбамоилсульфамоил]-бензойной кислоты метиловый эфир.
Торговое название: Гранстар, фирма Дюпон, США.
Хорошо растворим в ацетонитриле, хлороформе, метаноле, воде (pH 6).
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРАНСТАРА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ЗЕРНОВЫХ КУЛЬТУР ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
2.1. Принцип метода
Метод основан на извлечении гранстара водой при pH 6,0; очистке экстрактов путем реэкстракции органическим растворителем и дальнейшем определении методом ГЖХ или ТСХ.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Трибенурон-метил, ан. стандарт, фирма Дюпон.
Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.
Толуол, ч.д.а., ГОСТ 5789-78.
Этиловый спирт, 96%, ТУ 6-09-17-10-77.
Основной стандартный раствор трибенурон-метила, содержащий 100 мкг/мл готовят растворением препарата в силиканизированной мерной колбе на 100 мл в хлороформе. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы 1 — 10 мкг/мл готовят из основного раствора разведением в хлороформе. Хранят в силиканизированной посуде в холодильнике не более 5 дней.
Ацетон, ос.ч. 9-5 ТУ 6-09-3513-86.
Лимонная кислота, ГОСТ 3652-74, 2%-ный водный раствор.
Бромфеноловый синий, ТУ 6-09-1058-76.
Пластинки «Силуфол» (Хемапол, ЧССР).
Подвижная фаза бензол-ацетон 6:1.
Проявляющий реактив: Раствор А: 100 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 1 г нитрита серебра растворяют в 40 мл воды и прибавляют 120 мл ацетона.
Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 200 мл и доводят до метки ацетоном.
Трифторуксусный ангидрид, ТУ 6-09-4135-75.
Пиридин, ч., ГОСТ 13647-78.
Диметилдихлорсилан-30 мл, ТУ 6-09-14-700-78, ч., растворяют в 1 л толуола.
2.3. Приборы и посуда
Посуда мерная по ГОСТ 1770-74.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.
Водяная баня, ТУ 64-1-2850-76.
Воронки химические, ГОСТ 8613-75.
Воронки делительные, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.
Колбы конические 50, 100 мл, ГОСТ 10394-72.
Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации (тип Цвет, 3 Газохром или др.).
Микрошприцы на 10 мкл, МШ-10, ТУ 283.3-106.
Колонки стеклянные хроматографические, длина 1 м, d = 3 мм.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Подготовка стеклянной посуды
Всю стеклянную посуду перед началом анализа силиканизируют. Для этого посуду погружают в раствор для силиканизирования на 5 мин. Затем ополаскивают толуолом, несколько раз тщательно промывают этиловым спиртом, дистиллированной водой, снова этанолом и высушивают в сушильном шкафу при температуре +105 °C. По окончании анализа посуду моют раствором детергента, ополаскивая дистиллированной водой. Операцию силиканизирования повторяют через каждые 2 недели непрерывной работы.
2.4.2 Отбор проб
Отбор проб проводится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Отобранные пробы зерна подсушивают до стационарной влажности и хранят в сухом, хорошо вентилируемом помещении. Перед анализом пробы размалывают на лабораторной мельнице до размера частиц менее 1 мм.
Пробы зеленой массы замораживают и хранят в холодильнике при температуре ниже -5 °C.
2.4.3 Подготовка пластинок к хроматографированию
Пластинки «Силуфол» перед нанесением пробы промыть в камере ацетоном, давая растворителю подняться до верхнего края пластинки. Отметить край пластинки. Дать растворителю испариться с пластинки и подогреть ее 20 минут при 60 °C. При хроматографировании линия старта должна быть со стороны нижнего края пластинки.
2.5. Описание определения
2.5.1 Экстракция
Навеску измельченных зеленой массы и зерна — 10 г, или соломы — 5 г, или почвы — 25 г помещают в коническую колбу и заливают 120 мл дистиллированной воды с pH 6,0. Колбу встряхивают в течение 30 мин, затем экстракт фильтруют через фильтр легкофильтрующий. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя каждый раз по 100 мл воды и встряхивая по 10 минут.
После фильтрования экстракты объединяют, переносят в делительную воронку, подкисляют до pH 5,0 (0,1 н HCl) и реэкстрагируют трибенурон-метил трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформный экстракт, концентрируют до объема 0,2 — 0,3 мл при температуре не выше 35 °C.
Вода. 1 л воды помещают в делительную воронку, подкисляют до pH 5,0 и экстрагируют препарат трижды по 50 мл хлороформа. Объединяют хлороформ и концентрируют до объема 0,2 — 0,3 мл при температуре не выше 35 °C.
2.5.2 Определение методом ГЖХ
Удаляют остаток растворителя на воздухе. К сухому остатку пробы приливают 50 мкл трифторуксусного ангидрида и 10 мкл пиридина. Выдерживают приготовленный раствор в течение 30 мин, после чего добавляют 1 мл бензола и 5 мл дистиллированной воды, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз 5 мкл бензольного слоя вводят в хроматограф.
Хроматограф с ДПР (Цвет, Газохром или др.).
Колонка стеклянная, длина 1 м, d = 3 мм.
Носитель — Хроматон N-AW (0,16 — 0,20 мм).
Температура: испарителя — 220 °C, детектора — 220 °C, колонки — 160 °C.
Скорость газа-носителя — 55 мл/мин (через колонку); - 150 мл/мин (на продувку).
Время удерживания фторпроизводного трибенурон-метила — 2 мин 15 с.
Расчет концентрации трибенурон-метила в пробе мг/кг (мг/л) по формуле:
X = \frac{H_{\text{пр}} \cdot V_{\text{ст}} \cdot \text{С}_{\text{ст}} \cdot V}{H_{\text{ст}} \cdot V_{1} \cdot M} , где
\text{С}_{\text{ст}} — количество трибенурон-метила в стандартном растворе, мкг/мл;
H_{\text{ст}} — высота пика стандарта, мм;
H_{\text{пр}} — высота пика анализируемой пробы, мм;
V_{\text{ст}} — объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл;
V_{1} — объем анализируемого раствора, введенного в хроматограф, мкл;
V — объем экстракта анализируемой пробы, мл;
2.5.3 Определение методом хроматографии в тонком слое
На пластинку «Силуфол» с помощью капилляра или микропипетки количественно наносят сконцентрированную пробу так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки. Справа и слева от пробы наносят стандартные растворы, содержащие 1, 2, 5, 10 мкг трибенурон-метила.
Пластинки с нанесенными растворами помешают в хроматографическую камеру, в которую за 30 мин до хроматографирования залита смесь бензол — ацетон 6:1. После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 см пластинку вынимают и оставляют на несколько минут на воздухе для испарения подвижного растворителя. После этого пластинку обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового синего, а затем обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.
Препарат проявляется в виде пятен синего цвета на желтом фоне.
Количество препарата в пробе определяют сравнением интенсивности окраски и площади пятен и стандартного раствора.
Если содержание препарата в пробе превышает границы диапазона (10 мкг), то для нанесения на пластинку необходимо брать аликвотную часть пробы (0,1 — 0,2 мл) параллельной пробы.
Концентрацию трибенурон-метила вычисляют по формуле:
A — количество трибенурон-метила, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;
P — навеска анализируемой пробы, г.
3. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.