Методические указания по определению дроппа в семенах хлопчатника и винограде методом тонкослойной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1989 № 5013-89)
8 июня 1989 г. № 5013-89
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ДРОППА В СЕМЕНАХ ХЛОПЧАТНИКА И ВИНОГРАДЕ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Н.А. Грузинской, К.Ф. Новиковой, Л.М. Шехтман (ВНИИХСЗР).
Краткая характеристика препарата дана в Методических указаниях № 2807-83.
Принцип метода. Метод основан на извлечении дроппа из анализируемого объекта этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в соляную кислоту, а затем, после подщелачивания раствора, — в этилацетат и определении дроппа методом ТСХ.
Метрологическая характеристика метода. Предел обнаружения в хроматографической пробе 0,03 мкг. Предел определения в семенах хлопчатника 0,025, винограде 0,001 мг/кг. Среднее значение определения стандартных количеств дроппа при n = 13 для семян хлопчатника 85 +/- 12%; при n = 30 в винограде 77 +/- 5,6%. Доверительный интервал (при p = 0,95, n = 5), %: для семян хлопчатника +/- 15, винограда +/- 7%.
Избирательность метода. Метод селективен. Хлор- и фосфорорганические пестициды, применяющиеся в хлопководстве и виноградарстве, определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. Гексан х.ч. Этилацетат свежеперегнанный х.ч. Гидроксид натрия 4 н. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлороводородная кислота 0,1 н. Ледяная уксусная кислота 5-процентная. Пластинки «Силуфол». Стандартный раствор дроппа в ацетоне концентрацией 10 и 100 мкг/мл. Бромфеноловый реагент (растворяют 0,05 г бромфенолового синего в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 0,5-процентным раствором азотнокислого серебра в смеси ацетон-вода (3:1). Раствор хранят в темноте в прохладном месте. Раствор стабилен в течение 2 недель.
Приборы, аппаратура и посуда. Хроматографическая камера. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Кофейная мельница. Делительные воронки на 500 мл. Колбы конические на 250 и 500 мл; круглодонные на 250 мл; мерные на 50 и 100 мл. Пипетки на 0,1; 1; 5 и 10 мл. Пульверизатор.
Подготовка к определению. Хроматографические камеры заполняют системами подвижных растворителей гексан-ацетон (4:3) за 1 ч до начала хроматографирования для насыщения парами растворителей. Уровень подвижных растворителей в камере не должен превышать 0,7 — 1 см от уровня дна камеры.
Хранение проб. Срок хранения проб 3 мес.
Ход анализа. Пробу семян измельчают с помощью кофейной мельницы до размера частиц, равного размеру частиц манной крупы. Виноград измельчают ножницами. Навеску семян (20 г) или винограда (30 г) помещают в
плоскодонную колбу на 250 мл, заливают этилацетатом (100 мл) и оставляют на
ночь. Утром экстракт фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента" в круглодонную колбу на 250 мл. Экстракцию повторяют еще дважды этилацетатом порциями по 75 мл, встряхивая по 15 мин. Из объединенного экстракта этилацетат полностью отгоняют на ротационном испарителе. В колбе остается масло в случае анализа семян или сахара при анализе винограда. Колбу промывают 0,1 н HCl (150 мл), собирая солянокислый раствор в делительную воронку на 500 мл, и дважды промывают гексаном порциями по 30 мл, встряхивая по 5 мин. В случае анализа винограда к солянокислому экстракту добавляют 150 мл дистиллированной воды. После второй промывки гексаном солянокислый раствор фильтруют через бумажный фильтр "синяя лента". Гексановый слой отбрасывают. К солянокислому раствору добавляют 4 мл 4 н раствора едкого натра до pH 10 и дропп трижды экстрагируют этилацетатом порциями по 50 мл. Этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, фильтруют в круглодонную колбу на 250 мл и с помощью ротационного вакуумного испарителя полностью отгоняют растворитель. Сухой остаток после удаления растворителя смывают со стенок колбы количественно 2 - 3 мл ацетона в пробирку с оттянутым кончиком. В пробирку помещают заплавленный сверху стеклянный капилляр и упаривают ацетон нагреванием пробирки на горячей водяной бане до объема около 0,1 мл. Остаток с помощью того же капилляра, но с отломленным заплавленным концом наносят на
хроматографическую пластинку, предварительно промытую ацетоном. Параллельно на пластинку микрошприцем наносят серию стандартных растворов с содержанием дроппа 2; 1; 0,5 и 0,2 мкг. Хроматограмму развивают в системе гексан-ацетон
(4:3). После поднятия фронта подвижного растворителя на 10 - 12 см пластинку вынимают из камеры и оставляют при комнатной температуре на 5 - 10 мин. для испарения растворителя, а затем хроматограмму обрабатывают из пульверизатора раствором бромфенолового реагента. Пластинку помещают в сушильный шкаф и выдерживают в течение 10 мин. при температуре 60 - 80 °C. После охлаждения пластинку обрабатывают 5-процентным раствором уксусной кислоты. Дропп на пластинках проявляется в виде синих пятен на лимонно-желтом фоне с R 0,41 +/- 0,02.
f
Обработка результатов анализа. Содержание дроппа (тидиазурона) в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
A
A — количество дроппа, найденное в хроматографируемой пробе методом соотношения со стандартами, мкг;
P — навеска анализируемой пробы, г.