Методические указания по определению синтетических пиретроидов (амбуш, цимбуш) в биологическом материале методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 04.10.1988 № 4704-88)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ (АМБУШ, ЦИМБУШ) В БИОЛОГИЧЕСКОМ МАТЕРИАЛЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>

---

<*> Разработаны: Л.Г. Адейшвили, Э.В. Твалчерелидзе, О.Н. Сейнишвили (ГрузНИИЗР); Р.В. Чирикашвили (Грузинский зоотехническо-ветеринарный учебно-исследовательский институт).

Дополнение к «Методическим указаниям по определению синтетических пиретроидов в растениях, почве, воде водоемов методом газожидкостной хроматографии» № 2473-81 от 22.10.81.

Краткая характеристика препаратов приведена в Методических указаниях № 2473-81.

Принцип метода. Метод основан на экстракции препаратов из мяса, внутренних органов и яиц птиц хлороформом, очистке экстрактов ледяной смесью ацетон-вода (2:1) и активированным углем и количественном определении препаратов на хроматографе с ДПР.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 76.

Таблица 76

АМБУША И ЦИМБУША В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

Исследуемый объект	Предел определения, мг/кг		Среднее значение определения, %		Стандартное отклонение, %		Доверительный интервал среднего при p = 0,95, %
	а	ц	а	ц	а	ц	а	ц
Мясо Мышцы Печень Легкие Сердце Яйцо	0,1 0,1 0,1 0,1 0,1 0,3	0,05 0,05 0,05 0,05 0,05 0,10	79 80 75 69 82 62	80 82 76 73 77 66	5,3 5,5 7,4 6,0 7,2 8,4	6,5 6,3 4,0 5,2 5,8 6,0	6,7 7,0 8,6 6,7 9,2 8,2	7,2 8,6 5,7 6,0 7,0 6,4

Примечание: а — амбуш, ц — цимбуш.

Реактивы и растворы. Ацетон ч.д.а. Хлороформ ч.д.а. н-Гексан ч. Бензол ч.д.а. Сульфат натрия безводный. Уголь активированный. Фильтры «синяя лента». Наполнитель газохроматографической колонки — инертный носитель хроматон N-AW-DMCS с 5% XE-60. Газ-носитель — аргон особой чистоты.

Стандартные растворы: № 1 — раствор амбуша (или цимбуша) концентрацией 100 мкг/мл. Для его приготовления 10 мг х.ч. вещества растворяют в гексане в 100-миллилитровой мерной колбе. Срок хранения готового раствора в холодильнике 2 мес.; № 2 — растворы амбуша (или цимбуша) концентрацией 1; 5 и 10 мкг/мл. Из стандартного раствора амбуша (или цимбуша) № 1 отбирают 1; 5 или 10 мл в мерные колбы и доводят объем растворов гексаном до 100 мл. Приготовленные растворы хранят в холодильнике не дольше 2 недель.

Приборы и посуда. Ротационный испаритель. Механический встряхиватель. Хроматограф с ДПР. Колбы: конические с притертой пробкой на 150 и 250 мл; мерные на 50 и 100 мл. Воронки химические диаметром 2 — 6 см. Пипетки вместимостью 1; 2; 5 и 10 мл. Микропипетки на 0,1 и 0,2 мл. Пробирки с притертой пробкой на 10 мл. Колонка стеклянная для хроматографа длиной 0,5 м с внутренним диаметром 3 мм.

Подготовка к определению. Для подготовки газохроматографической колонки ее промывают бензолом (до набивки сорбентом) и затем высушивают, продувая сухим воздухом. Для заполнения колонки готовую набивку заводского изготовления засыпают в подсоединенную к вакуумному насосу колонку, в один конец которой помещена стекловата. С другого конца в нее засыпают сорбент. Для полной набивки при заполнении колонки постукивают по ее стенкам. Заполненную колонку помещают в термостат хроматографа и продувают газом-носителем в течение 48 ч при температуре 280 °C. При этом скорость газа-носителя 200 мл/мин.

Отбор проб. Пробы мяса и внутренних органов птиц отбирают из трех птиц, а яиц — из 20 штук. Для анализов образцы берут по 10 г в двух повторностях. Пробы хранят в морозильной камере холодильника не дольше 3 сут.

Ход анализа. Экстракция и очистка экстрактов. По 10 г мелкоизмельченных навесок мяса, мышц, печени, легких, сердца и взболтанной массы яиц помещают в конические колбы и в каждую из них добавляют по 15 мл хлороформа. Содержимое встряхивают в течение 10 мин., после чего его фильтруют через бумажный фильтр, а массу яиц — через вату. Экстракцию пиретроидов повторяют дважды. Остаток на фильтре (или на вате) промывают 5 — 10 мл хлороформа. Экстракты объединяют и высушивают безводным сульфатом натрия. Объединенные экстракты упаривают при температуре 40 °C на ротационном испарителе до минимального объема 0,5 мл (экстракты можно упаривать при комнатной температуре под током воздуха). Остаток затем растворяют в 30 мл охлажденного раствора ацетона с водой (2:1) и в течение 30 мин. выдерживают на холоде. После этого экстракт фильтруют, остаток промывают холодным раствором ацетона с водой. Из фильтрата выпаривают ацетон на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Из водного раствора пиретроиды трижды экстрагируют в делительной воронке н-гексаном порциями по 10 мл. Если экстракт получился окрашенным, к нему добавляют 0,5 г активированного угля и в течение 5 мин. выдерживают при 40 °C, после чего фильтруют и конечный объем фильтрата доводят до 2 мл. Из этих 2 мл и берут аликвотную порцию для количественного определения пестицида (5 мкл).

    Условия   хроматографирования.   Используют  колонку  длиной   0,5 м  с
внутренним  диаметром  3  мм.  Носитель - хроматон  N-AW-DMCS  с  5% XE-60.
Газ-носитель - аргон  особой  чистоты.  Расход  газа-носителя  60  мл/мин.,
воздуха - 200 мл/мин.  Температура  (°C):   детектора  и  испарителя - 270,

                                        -12

колонки — 230. Шкала электрометра 20 x 10 А. Скорость протяжки ленты 600 мм/ч. Время удерживания амбуша — 4 мин. 15 с, цимбуша — 7 мин. 10 с.

Обработка результатов анализа. Количество препаратов в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                AH V
                                  2 2

X = -----, H V P 1 1

где:

A — количество препарата в стандартном растворе, введенном в хроматограф, нг;

H — высота пика стандартного раствора препарата, введенного в 1 хроматограф, мм;

H — высота пика препарата в пробе, мм; 2

V — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл; 1

V — объем экстракта, из которого берут аликвотный объем для ввода в 2 хроматограф, мл;

P — масса анализируемой пробы, г.

Требования безопасности. Необходимо соблюдать правила безопасности, рекомендуемые для работ с органическими растворителями и огнеопасными веществами, а также со сжатыми газами.

---