Методические указания по определению набу в моркови методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1987 № 4388-87)
8 июня 1987 г. № 4388-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НАБУ В МОРКОВИ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Т.В. Ушаковой, С.В. Тулуповой (ВНИИССОК).
Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях № 3880-85.
Принцип метода. Метод заключается в проведении реакций превращения ряда промежуточных продуктов разложения набу в соединение типа M SO , экстракции
2 2 препарата хлороформом, очистке экстракта перераспределением в несмешивающихся растворителях, дополнительной очистке хроматографией в
тонком слое и количественном определении методом ГЖХ с применением ПИД.
Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество M SO с ПИД 50 нг. Линейный диапазон определения 50 - 400 нг. 2 2 Нижний предел определения 0,01 мг/кг. Среднее значение определения в пробе 82,0%. Относительная ошибка определения (при p = 0,95, n = 5) составляет
+/- 5,3%.
Реактивы и растворы. Спирт этиловый 96-процентный. Универсальная индикаторная бумага. Пероксид водорода, 30-процентный раствор. М-Хлорнадбензойная кислота х.ч. Гидроксид натрия х.ч. Сульфат натрия безводный х.ч. Хлороформ ч. Пластинки "Силуфол". Гипосульфит натрия ч.д.а. Хлорид натрия ч.д.а. Едкий натр, 0,05 н раствор. Этилацетат х.ч. Гексан х.ч. Стандартный раствор M SO (100 мкг/мл) хранится в холодильнике в 2 2
течение недели.
Приборы и посуда. Газожидкостный хроматограф «Хром-4» или другой с ПИД. Аппарат для встряхивания проб. Воронки химические и делительные (ВД-3-250). Испаритель ротационный ИР-1М. Камера для хроматографирования (любой сосуд с притертой крышкой). Автоматические пипетки с дискретными объемами 5; 10; 20; 50; 100; 200; 500; 1000 мкл. Конические колбы на 100 и 250 мл. Микрошприц на 10 и 100 мкл. Стаканчики. Пробирки вместимостью 5 мл с конусообразным дном.
Хранение проб. Пробы хранятся в течение 1 — 2 дней.
Ход анализа. Экстракция и очистка экстракта. Измельченную пробу моркови (50 г) помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 150 мл смеси этилового спирта с водой (1:1) и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 1 ч. Полученный экстракт фильтруют через бумажный фильтр в колбу на 200 мл. Пробу и фильтр дважды промывают смесью спирта с водой. Далее подкисляют раствор до pH 3,0, промывают 0,5 мл 30-процентного раствора пероксида водорода и помещают в термостат при температуре 50 °C на 15 — 17 ч, после чего к инкубационной смеси добавляют 15 г хлорида натрия и 100 мл гексана. После встряхивания и разделения в делительной воронке гексановый слой отбрасывают. Препарат экстрагируют трижды хлороформом порциями по 10 мл. Объединенный хлороформный слой промывают 100 мл 0,05 н водного раствора едкого натра, содержащего 10 г хлорида натрия. Органическую фракцию фильтруют над безводным сульфатом натрия и затем выпаривают досуха на ротационном испарителе.
Остаток растворяют в 20 — 30 мг хлороформа и добавляют 20 мг М-хлорнадбензойной кислоты. Далее раствор помещают на 30 мин. в термостат при 30 °C. После этого его промывают 30 мл 3-процентного водного раствора гипосульфита натрия, содержащего 3 г хлорида натрия. Водный слой раствора отбрасывают. Органический слой фильтруют над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют его до объема 0,1 — 0,2 мл.
Экстракт количественно переносят на пластинку "Силуфол" размером 2 х 15 см (в пять точек по горизонтали на высоте 15 мм от края пластинки). Пробу хроматографируют дважды: в начале в системе этилацетат-гексан (3:1), а затем, после подсушивания, в системе гексан-ацетон (2:1). Величина R
f
препарата при этих условиях хроматографирования составляет 0,20 - 0,25. Основываясь на этом, с пластинки счищают полосу силикагеля с R 0,18 - 0,40
f
на воронку с бумажным фильтром, затем смывают ацетоном препарат в конусообразную пробирку вместимостью 5 мл. Растворитель в пробирке выпаривают досуха, и далее автоматической пипеткой приливают необходимое
количество ацетона в зависимости от предполагаемого содержания гербицида.
Условия хроматографирования. Хроматограф «Хром-4» с ПИД. Стеклянная колонка длиной 1,2 м с внутренним диаметром 3 мм, заполненная 5% OV-210 на хромосорбе N-AW-HCMS (80 — 100 меш). Температура (°C): испарителя — 280, колонки — 270. Скорость потока азота 30 мл/мин., водорода — 34, воздуха — 300 мл/мин. Рабочая шкала электрометра 1:10. Время удерживания 9 мин. 36 с. В колонку хроматографа вводит аликвоту ацетонового раствора (5 — 10 мкл).
Обработка результатов анализа. Количественное определение проводят путем сравнения рассчитываемого пика с пиком, полученным при введении известного количества стандартного вещества, при условии, что пики близки по величине и определение ведется в диапазоне линейности детектора. Количественную оценку пиков хроматограммы проводят по площади пика.
Количество препарата в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
C V S
ст 2
где:
C — количество препарата во введенном в хроматограф стандартном ст растворе, мг;
S и S — площади пика рабочей пробы и стандартного раствора препарата, ст введенных в хроматограф, кв. мм;
V — объем экстракта, введенный в хроматограф, мл; 1
V — общий объем экстракта после упаривания, мл; 2
P — масса анализируемой пробы, кг.
Требования безопасности. Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.