Временные методические указания по определению набу в воде, почве, капусте, сое и зеленых листьях методом хроматографии в тонком слое

(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3880-85)

ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ НАБУ В ВОДЕ, ПОЧВЕ, КАПУСТЕ, СОЕ И ЗЕЛЕНЫХ

Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.

Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.

1. Характеристика анализируемого пестицида

1.1 Селективный, послевсходовый гербицид набу.

1.2. Действующее вещество препарата — 2/1-(этоксиимино)бутил-/-5-/2-(этилтио)пропил/-3-гидрокси-2-циклогексен-1. Обычное название — сетоксидим.

1.3 Структурная и эмпирическая формулы:

                   OH    N-O-C H
                   |    //    2 5
                  /\\  C
                 /  \\/ \

| C H S |  | CH -CH -CH C H O N 2 2 3 17 29 3 |

| --- | --- | --- |

     2 5 \     / \  /\\
          CHH C   \/  O                                   Мол. масса 327,5.
         /   2

  CH
    3

1.4. Растворимость: при 20 °С легко растворим в метаноле, гексане, толуоле, октаноле, ксилоле, оливковом масле, ацетоне, этилацетате и других органических растворителях.

    1.5. Химически чистое соединение - маслянистая жидкость  желтого цвета.
Стойкость  к  температуре:  при 25°  устойчив  до  одного  месяца  и  менее
устойчив   после   8   месяцев;   при  50  °С  -  неустойчив.   Температура

                   -5

кипения — 90 °С (4 х 10 мм рт. ст.).

1.6 Биологические свойства

    Набу - новый, высокоэффективный, селективный, послевсходовый  гербицид,
подавляющий одно- и  многолетние  сорняки,  произрастающие на полях овощных
культур.  Имеет  широкий  спектр  действия  и может  использоваться в любой
стадии развития защищаемой культуры. ЛД   для мышей - 6300 мг/кг.

                                   50

2. Методика определения набу

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на хроматографическом определении набу в тонком слое стандартных пластинок «Силуфол» и «Армсорбсил» <*> после дифференцированной подготовки анализируемых проб.

---

<*> «Армсорбсил» — пластинки армянского производства, выпускаемые Ереванским отделом неорганических материалов. Ереванский силикагель обладает высочайшей химической чистотой, механической прочностью частиц, однородной структурой пор и узким фракционным составом. По своей активности пластинки «Армсорбсил» не уступают «Силуфол».

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Метрологические параметры	Анализируемые объекты
	соя	капуста	зеленые листья	почва	вода
Предел обнаружения, мг/кг или мг/л Число параллельных определений Размах варьирования Среднее значение определения (%) Стандартное отклонение (%) Относительное стандартное отклонение (%) Доверительный интервал при р = 0,95	0,10 10 72 — 80 75 1,10 1,45 0,80	0,01 6 73 — 85 80 2,00 2,50 2,07	0,05 10 77 — 90 83 1,47 1,80 1,03	0,03 6 80 — 89 85 1,59 1,87 1,64	0,01 5 88 — 92 90 0,67 0,75 0,82

2.1.3 Избирательность метода

Метод специфичен и другие соединения (например: прометрин, 2,4-Д, 2,4-ДА, 2,4-Д, карахол, фенагон, далапон, рамрод, тербацил, стомп, трефлан, блеизер, раундап) при данных условиях хроматографирования определению не мешают.

    R  арезина, семерона совпадают  с R  набу, поэтому  хроматографированию
     f                                 f

мешают.

    Примечание:  Из  капусты   извлекается  много коэкстрактивных  веществ,
которые  при  опрыскивании   проявителями  (AgNO   и  бромфеноловый  синий)

                                            3

приобретают  тот же цвет, что и набу. Поэтому при определении остатков набу
в  капусте  мы  рекомендуем  всегда  брать  контрольную пробу без препарата
и по R  определять место нахождения гербицида.

  f

2.2. Реактивы и растворы

Ацетон, х.ч., ГОСТ 2603-79, ТУ 6-09-3513-83.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-84.

Бромфеноловый синий, ч., ТУ 6-09-1058-76.

Вода дистиллированная.

н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Лимонная кислота, ч.д.а., ГОСТ 3652-74.

Натр едкий, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрий сернокислый безводный, ч., ГОСТ 4166-76.

Серебро азотнокислотное, х.ч., ГОСТ 1277-81.

Соляная кислота, х.ч., ГОСТ 3118-67.

Толуол, ч.д.а., ГОСТ 5789-69.

Уксусная кислота, х.ч., ГОСТ 18290-72.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 20015-74.

Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.

Этилацетат, х.ч., ТУ 6-09-6515-70.

Стандартный раствор набу в этаноле (200 мкг/мл).

Примечание: Поскольку набу весьма неустойчивый препарат и при 25 °С сохраняется в неизменном виде только в течение месяца, то соответственно следует готовить стандартный раствор каждый месяц из свежего действующего вещества, полученного при перекристаллизации.

Проявляющие реактивы:

1. а) 2-процентный водный раствор азотнокислотного серебра;

б) 0,4-процентный раствор бромфенолового синего в ацетоне.

Оба раствора смешать поровну.

2. 2-процентный водный раствор лимонной или уксусной кислоты — для осветления пластинок.

2.3. Приборы и посуда

Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.

Вентилятор.

Весы равноплечие ручные ВР-1, ВР-20, ВР-100, ГОСТ.

Весы аналитические АДВ-20.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные, ГОСТ 8613-75.

Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-81.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Колбы плоскодонные емк. 150 — 250 мл, ГОСТ 10391-72.

Колбы мерные на 25 — 50 — 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы Бунзена, ГОСТ 6514-75.

Мензурки на 25 — 50 — 100 мл.

Мельница.

Микропипетки для нанесения растворов на 0,1 — 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Палочки стеклянные.

Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 10391-74.

Сито с отверстиями 0,1 и 1,0 мм.

Фильтры бумажные, ТУ 6-09-1678-77.

Чашки фарфоровые выпарительные, ГОСТ 9147-73.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Отбор, хранение и доставка проб

Отбор, хранение и доставку проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за номером 2051-79 от 21 августа 1979 г.

2.4.2. Органические растворители перед началом работы очистить по соответствующим методикам и перегнать, сульфат натрия прокалить при 300 — 400 °С. Пластинки «Силуфол» (если старые) активизировать в термостате при 100 °С в течение 1 часа или под УФ-светом в течение 10 мин.

2.5. Проведение определения

2.5.1 Экстракция препарата из анализируемой пробы

Вода. 100 мл анализируемой воды подкисляют до pH 1, наливают 25 мл гексана и ставят на 30 мин. на аппарат для встряхивания. Препарат экстрагируют трижды гексаном и через делительную воронку отделяют гексановые экстракты. Последние объединяют, высушивают над сернокислым натрием, упаривают до 0,3 мл и наносят на хроматографическую пластинку.

    Почва.  100 г  воздушно-сухой  почвы, предварительно  просеянной  через
сито,  увлажняют  подкисленной  (pH 1)  водой,  заливают  до покрытия пробы
этилацетатом  и оставляют  на ночь  или ставят  на аппарат для встряхивания
на 30 мин. Первую  пробу  сливают  декантацией и добавляют растворителя еще
2 раза. Экстракты  этилацетата  собирают,  проводят через безводный Na SO ,
                                                                      2  4

выпаривают до сухого остатка и наносят этим же растворителем на пластинку.

Соя. 5 г сои, грубо измельченной на электромельнице (до 1 — 2 мм), заливают ацетонитрилом (30 мл) и ставят на качалку на 1 час. Затем отфильтровывают через воронку со слоями безводного сернокислотного натрия (15 г), силикагеля (15 г) и окиси алюминия (5 г) (для очистки). Обмывают воронку чистым ацетонитрилом. После фильтрации к ацетонитрилу добавляют 100 мл воды. Полученный водно-ацетонитрильный раствор подкисляют 5 н HCl до pH 1. Подкисленный раствор фильтруют через плотный фильтр и из него извлекают набу хлороформом (3 раза по 50 мл). Пробу выпаривают на ротационном испарителе или под вентилятором до 0,1 — 0,3 мл. Остаток количественно наносят на пластинки «Силуфол» или «Армсорбсил».

Капуста. К 25 г размельченной в ступке капусты прибавляют водно-ацетоновый раствор (60% ацетон) до покрытия пробы и оставляют на ночь или ставят на аппарат для встряхивания на 30 мин. Отфильтровывают через вату, ацетоновую часть выпаривают под вентилятором, а из водной части препарат извлекают гексаном фракционно при различном pH: сначала из нейтральной воды (pH 7); затем из щелочной воды (pH 10) и из кислой воды (pH 1). Каждый гексановый экстракт наносят отдельно (3 пятна), а затем суммируют для количественного сравнения со стандартом.

Зеленые листья. Растертые листья (20 г) заливают гексаном и ставят на качалку на 30 мин. Процедуру повторяют 2 — 3 раза.

Гексановые экстракты объединяют, пропускают через безводный сернокислый натрий, выпаривают на ротационном испарителе и наносят на хроматограмму.

2.5.2 Хроматография в тонком слое сорбента

Всю пробу количественно переносят на хроматографические пластинки «Силуфол» или «Армсорбсил», рядом наносят стандартные растворы с различным содержанием набу (5 — 10 — 20 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования, предварительно наполненную растворителем (свежеприготовленным). В качестве подвижной фазы для набу мы предлагаем три смеси:

1) <a id="p100094"></a>ацетон - гексан - этилацетат (22,2 + 66,6 + 11,2), R  = 0,46;
                                                       f

2) <a id="p100095"></a>ацетон - гексан - уксусная кислота (19,5 + 80 + 0,5), R  = 0,30;
                                                          f

    3) ацетон - толуол (5 + 95), R  = 0,53. R  выведен по основному пятну.
                                  f          f

После поднятия фронта до 12 — 13 см пластинку из камеры снимают, высушивают на воздухе до полного удаления растворителей.

Проявление зон локализации набу на хроматограмме производят указанными проявителями.

Если действующее вещество набу хранится больше месяца, то на пластинке набу проявляется в виде двух-трех пятен.

2.6. Обработка результатов

Содержание набу в исследуемой пробе вычисляют по формуле:

                                А х 1,2

Х = -------, Р

где:

А — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

Р — навеска, г или мл;

1,2 — поправка с учетом потерь пестицида в процессе анализа.

3. Техника безопасности

Соблюдение правил по технике безопасности, обычно рекомендуемых при работе с органическими растворителями и токсическими веществами, обязательно.

4. Настоящие Методические указания составлены по материалам лаборатории биохимии Арм. НИИЗР ст.н.с., канд. биол. наук Н.В. Бажановой, мл.н.с., канд. биол. наук М.Г. Алтунян и мл.н.с. Ж.А. Арутюнян (Научно-исследовательский институт защиты растений, Ереван).

---