Методические указания по определению стомпа в эфиромасличных растениях и эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1987 № 4326-87)
8 июня 1987 г. № 4326-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СТОМПА В ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Ю.С. Барановым (ВНИИЭМК).
Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях № 3252-85.
Принцип метода. Метод основан на извлечении стомпа из растений ацетоном, очистке экстрактов перераспределением в системе двух несмешивающихся жидкостей, дополнительной очистке растительных экстрактов на колонке с оксидом алюминия и газохроматографическом определении с помощью ДПР и ТИД. Из эфирного масла стомп извлекают концентрированной серной кислотой, перераспределяют из разбавленной кислоты в н-гексан, очищают на колонке с оксидом и определяют методом ГЖХ.
Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 51.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТОМПА
В ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ
(p = 0,95, n = 5)
| Параметры | Исследуемый объект | ДПР | ТИД |
|---|---|---|---|
| Минимально детектируемое количество, нг | Растения и масла | 0,1 | 2,0 |
| Нижний предел определения, мг/кг | Растения Масла | 0,004 0,02 | 0,08 0,4 |
| Среднее значение определения, % | Растения Масла | 73,6 72,2 | 75,3 72,3 |
| Стандартное отклонение, % | Растения Масла | +/- 2,50 +/- 2,43 | +/- 2,66 +/- 1,24 |
| Доверительный интервал среднего, % | Растения Масла | +/- 6,10 +/- 5,95 | +/- 6,51 +/- 3,05 |
Избирательность метода. Метод селективен. Прочие пестициды, используемые на плантациях эфироносов, в том числе трефлан и нитрофор, определению не мешают.
Реактивы и растворы. Ацетон ч. н-Гексан ч. Серная кислота ч. Оксид алюминия для хроматографии ч. (размер частиц 100 — 200 мк, II степени активности по Брокману). Сульфат натрия безводный ч. Хроматон N-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% XE-60. Стандартные растворы стомпа в ацетоне с содержанием 100; 10 и 1 мкг/мл. Для приготовления стандартного раствора на аналитических весах взвешивают 10 +/- 0,2 мг стомпа и помещают навеску в мерную колбу вместимостью 100 мл. Навеску растворяют в 10 — 15 мл ацетона и доводят до метки тем же растворителем. Раствор содержит 100 мкг стомпа в 1 мл. Из раствора пипеткой переносят в мерную колбу на 100 мл 10 мл раствора и доводят до метки ацетоном. Раствор содержит 10 мкг/мл стомпа. Растворы с концентрацией 1,0 и 0,1 мкг/мл готовят соответственно из исходных растворов с концентрацией 100 и 10 мкг/мл, отбирая по 1 мл раствора в мерную колбу на 100 и 10 мл и доводя до метки ацетоном. Растворы стомпа стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 мес.
Приборы и посуда. Хроматограф газовый «Цвет-106» или аналогичный. Аппарат для встряхивания. Весы аналитические ВЛА-200 второго класса точности. Весы технические четвертого класса точности. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор. Делительные воронки типа ВД. Воронки лабораторные типа В. Колбы: плоскодонные конические типа КНКШ; грушевидные остродонные типа ОКШ; мерные на 100 мл. Мензурки на 50 и 100 мл. Пипетки на 1 и 10 мл. Микрошприцы на 1 мкл (МШ-1) и 10 мкл (МШ-10). Колонки для хроматографирования длиной 100 мм с внутренним диаметром 15 мм.
Подготовка к определению. Органические растворители (ацетон, н-гексан) перед началом работы необходимо перегнать, сульфат натрия прокалить при температуре 300 — 400 °C. Хроматографическую колонку и детектор кондиционируют в режимных условиях в течение 2 ч. Для анализа отбирают среднюю пробу растений эфиромасличных культур — 50 г, эфирного масла — 10 г.
Ход анализа. Свежесрезанные эфиромасличные растения (50 г) гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение 15 — 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 — 40 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 мл. Стакан гомогенизатора промывают ацетоном трижды порциями по 20 мл и через фильтр присоединяют смыв к основному фильтрату. Упаривают ацетон на ротационном испарителе до объема 10 мл при температуре бани 50 °C. Остаток количественно с 50 мл н-гексана переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл с 250 мл дистиллированной воды. Встряхивают 1 — 2 мин. и отделяют верхний слой. Операцию повторяют еще дважды. Верхние слои объединяют, высушивают, пропуская через 100 г безводного сульфата натрия, и упаривают до объема 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на колонку с 6 г оксида алюминия, предварительно промытую 12 мл смеси н-гексан-ацетон (9:1). После того как раствор полностью поглотится сорбентом, отгонную колбу смывают 5 мл смеси н-гексан-ацетон (9:1) и переносят на колонку. Операцию проделывают три раза. Стомп элюируют 50 мл смеси гексан-ацетон (9:1). Элюат упаривают на ротационном испарителе досуха. Остаток растворяют в 1 мл ацетона и 2 мкл вводят в испаритель хроматографа.
Навеску эфирного масла мяты, герани, кориандра (10 г) помещают в коническую колбу на 100 мл, добавляют 10 мл н-гексана и выдерживают 20 мин. для растворения. Затем прибавляют 20 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и выдерживают 5 мин. Раствор переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл с 250 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют стомп н-гексаном трижды порциями по 30 мл. Объединенные экстракты сушат, пропуская через 100 г безводного сульфата натрия, и концентрируют до объема 5 мл на ротационном испарителе. Остаток переносят на хроматографическую колонку. Дальнейший анализ проводят так же, как анализ растений.
Условия хроматографирования. Используют стеклянные колонки спиральной формы длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Расход газа-носителя при работе с ТИД 40 мл/мин., при работе с ДПР — 60 мл/мин. Расход водорода 16 мл/мин., воздуха — 400 мл/мин. Температура (°C): испарителя — 230, термостата колонок — 190, термостата детекторов — 230. Хроматографируемый объем 2 мкл. Остальные условия хроматографирования приведены в таблице 52.
| Параметры | 5% SE-30 | 5% XE-60 | ||
| ТИД | ДПР | ТИД | ДПР | |
| Время удерживания стомпа Линейный динамический диапазон, нг Рабочая шкала электрометра, А | 5 мин. 30 с 2 — 2000 -12 100 x 10 | 7 мин. 15 с 0,1 — 10 -12 20 x 10 | 6 мин. 42 с 2 — 2000 -12 100 x 10 | 8 мин. 30 с 0,1 — 10 -12 20 x 10 |
Обработка результатов анализа. Количество стомпа в пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
HV
1
где:
H — высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;
V — объем анализируемой пробы, мл; 1
V — объем инъектируемой пробы, мкл; 2
K — калибровочный коэффициент, который определяют по следующей формуле:
H H H
1 1 2 n
K = — (--- + --- + ... + ---),
n CV CV CV
1 2 n
где:
H , H , H - высоты пиков стандартного раствора стомпа, мм; 1 2 n V , V , V - объемы стандартного раствора стомпа, вводимые в 1 2 n
хроматограф, мкл;
C — концентрация стандартного раствора — 10 мкг/мл (ТИД), 0,1 мкг/мл (ДПР).
Содержание стомпа в пробах растений и эфирных масел вычисляют как среднее из трех параллельных определений.
Требования безопасности. Следует руководствоваться правилами безопасности при работе с соединениями третьего класса токсичности и легколетучими растворителями.