Временные методические указания по определению стомпа методом газожидкостной хроматографии в табаке
(утв. Минздравом СССР 12.04.1985 № 3252-85)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
12 апреля 1985 г. № 3252-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ СТОМПА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В ТАБАКЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Стомп (пеноксалин, праул, аккотаб, хербатокс) — 3,4-диметил-2,6-динитро-N(пентил-3)анилин — кристаллическое вещество оранжево-желтого цвета.
NO
─── / 2
CH -// \\-NH-CH-C H
| 3 \ ___ / / ─── \ | 2 5 C H |
|---|---|
| CH NO 3 2 | 2 5 |
| 3,4-Диметил-2,6-динитро-N(пентил-3)анилин. | |
| Эмпирическая формула C | H № O . 13 19 3 4 |
| Молекулярная масса 281,3. | |
| Температура плавления - 56 - 57 °С. | |
| Растворимость в воде при 20 °С - 0,3 мг/л. | |
| Хорошо растворяется в хлорированных и ароматических углеводородах. Стабилен в щелочных и кислых средах. | |
| По существующим в СССР методам оценки токсичности химических препаратов относится к малотоксичным препаратам: ЛД собак - 5000 мг/кг. | для крыс - 1250 мг/кг, ЛД для 50 50 |
| Технический препарат выпускается в форме 33-процентного концентрата эмульсии, 50-процентного смачивающегося порошка и 3-процентного гранулята. | |
| Как селективный почвенный гербицид эффективен для борьбы с одно- и двудольными сорными растениями на посевах кукурузы, хлопка, риса, соевых, табака. Рекомендуется вносить перед посадкой. Применяется также для химического пасынкования табака. |
2. Методика определения стомпа методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Методика основана на газохроматографическом определении стомпа с детектором постоянной скорости рекомбинации на неподвижной фазе ECSS-X после экстракции смесью вода - соляная кислота - этанол, очистки экстракта жидкость-жидкостным перераспределением в гексан и на колонке с силикагелем.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода.
Диапазон определяемых концентраций - 0,03 - 0,5 мг/кг.
Минимально детектируемое количество - 0,2 нг.
Метрологическая характеристика метода представлена в таблице 1.
ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СТОМПА В ТАБАКЕ МЕТОДОМ ГЖХ
| Объект анализа | К-во стомпа, внесен. в пробу, мг/кг | К-во стомпа, обнар. в пробе, мг/кг | Процент определения, % | Число параллельн. определен., n | Стандартное отклонение, мг/к | Относительное стандартное откл., % | Среднее отклонение, мг/кг | Доверительный интервал среднего р = 0,95; n = 5 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| табак табак табак | 0,05 0,25 0,5 | 0,043 0,23 0,42 | 84,0 90,4 86,8 | 5 5 5 | 0,0016 0,009 0,016 | 3,7 3,8 3,8 | 0,0012 0,006 0,012 | 0,002 0,01 0,02 |
2.1.3 Избирательность метода
Трефлан и паарлан, применяемые в настоящее время в табаководстве, определению не мешают.
2.2. Реактивы и материалы
Этиловый спирт ректификат, ТУ 6-09-1710-77.
Соляная кислота, ч, ГОСТ 3118-77.
Бензол, хч, ГОСТ 5955-75.
Сернокислый натрий безводный, ч, ГОСТ 4166-76.
Солянокислый этанол (к 200 мл дистиллированной воды приливают 20 мл концентрированной соляной кислоты и доводят до метки этанолом в 1 л в мерной колбе).
Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.
Силикагель для колоночной хроматографии Л 0,1/0,2 мм (ЧССР).
ECSS-X 5% на Газ-Хром 0 0,1 - 0,12 мм.
Стандартный раствор стомпа в бензоле конц. 0,0005 мг/мл.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Микрошприц на 10 мкл МШ-10, ТУ 5-2.833.0.24.
Ротационный вакуум-испаритель, ТУ 25-11-917-74.
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73.
Сушильный шкаф, ТУ 64-1-1411-76.
Колбы конические со шлифом на 250, 500 мл, ГОСТ 10394-72.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73.
Хроматографические колонки диам. 20 х 500 мм.
Колбы мерные на 1 л, ГОСТ 1770-74.
Воронки делительные на 500, 1000 мл, ГОСТ 8613-75.
Стаканы химические на 100, 150 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные на 100 мл, ГОСТ 10394-74.
Воронки химические разные, ГОСТ 8613-75.
Пипетки разные, ГОСТ 20292-74.
Вата, ГОСТ 5556-75, обезжиренная.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Установление линейного динамического диапазона
Готовят раствор стомпа в бензоле концентрацией 0,005 мг/мл. В 10 колб емкостью по 50 мл вносят пипеткой 1 - 10 мл раствора стомпа в бензоле, доводят до метки бензолом, перемешивают и полученные растворы поочередно вводят в хроматограф 4 мкл порциями. До хроматографирования растворы необходимо хранить в защищенном от света месте, так как препарат разлагается под действием ультрафиолетовых лучей.
2.4.2 Приготовление силикагеля для колоночной хроматографии
Силикагель марки Л 0,1/0,2 мм (ЧССР) перед употреблением высушивают в течение 4-х часов при температуре 140 °С и переносят в склянку с притертой пробкой. К остывшему силикагелю осторожно при перемешивании приливают небольшими порциями дистиллированную воду из расчета 20 мл на 80 г силикагеля, тщательно перемешивают встряхиванием до исчезновения комочков и оставляют на 24 часа для равномерного распределения воды. Проверяют активность каждой вновь приготовленной порции силикагеля.
2.4.3 Отбор, хранение и доставка пробы
Отбор и хранение проб табака производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб...", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР А.И. Заиченко за N 2051-79 от 21 августа 1979 г.
2.5. Проведение определения
2.5.1 Экстракция и очистка экстракта
Навеску 10 - 20 г измельченного табака помещают в стакан гомогенизатора и заливают солянокислым этанолом (соотношение экстрагирующей смеси к весу образца 20:1). Гомогенизируют 4 мин. при 5000 об./мин. или встряхивают на механическом встряхивателе в течение 2-х часов. Фильтруют экстракт под вакуумом, промывают остаток на фильтре 2 х 15 мл солянокислым этанолом и переносят в делительную воронку. Добавляют к экстракту 100 мл 1 н раствора соляной кислоты, 50 мл гексана и экстрагируют в течение 1 мин. Отделяют гексановый слой и повторяют экстракцию 3 х 20 мл гексана. Объединенные гексановые экстракты фильтруют через слой безводного сернокислого натрия в круглодонную колбу и упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе.
В хроматографическую колонку вносят 14 г активированного силикагеля в гексане, уплотняют сорбент, вносят слой безводного сернокислого натрия высотой 1 - 1,5 см и промывают колонку 30 мл гексана. Скорость прохождения растворителя через колонку устанавливают 2 капли в секунду. Сухой остаток в колбе растворяют в 10 мл смеси гексан - бензол и вносят в колонку. Колбу промывают 3 х 5 мл смеси гексан - бензол и каждый новый объем вносят в колонку после того, как мениск предыдущего достигнет поверхности силикагеля. Промывают колонку 50 мл гексана, установив скорость прохождения растворителя через колонку 3 - 4 капли в секунду, и собранный элюат отбрасывают. Стомп элюируют из колонки 130 мл смеси гексан - бензол. Первые 30 мл элюата отбрасывают, а последующие 100 мл собирают, упаривают досуха на ротационном вакуум-испарителе при температуре водяной бани 40 °С, растворяют осадок в 2 - 5 мл бензола и аликвоты, по 4 - 6 мкл вводят в хроматограф.
2.5.2 Условия хроматографирования
Газовый хроматограф "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации.
Колонка стеклянная 1000 х 3 мм.
Твердый носитель Газ-Хром 0 0,1 - 0,12 мм.
Температура детектора - 230 °С, колонки - 190 °С, испарителя - 250 °С. -12
Чувствительность электрометра 20 х 10 .
Скорость газа-носителя (азота) 32 мл/мин.; продувочного газа (азота) - 94 мл/мин.
Время удерживания стомпа при этих условиях 3,2 мин.
В испаритель вводят 4 мкл рабочего раствора в бензоле.
2.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят путем сравнения пиков стандартного и исследуемого растворов по высоте. Содержание остаточных количеств стомпа в анализируемой пробе вычисляют как среднее их трех параллельных определений.
Расчет производится по формуле:
а х Н х V х V х 100
х ст о
Н х V х G (100 - W)
ст х
где:
Х — количество пестицида в анализируемой пробе, мг/кг;
а — концентрация стандартного раствора пестицида, мг/мл;
Н — высота хроматографического пика исследуемого р-ра, мм; х
Н — высота хроматографического пика стандартного р-ра, мм; ст
V — объем пробы исследуемого раствора, введенный в хроматограф, мкл; х
V — объем пробы стандартного раствора, введенный в хроматограф, мкл; ст
о
W — влажность анализируемой пробы, %.
3. Требования безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.
4. Методические указания разработаны:
Пережогина Т.А., Всесоюзный научно-исследовательский институт табака и махорки им. А.И. Микояна (НПО «Табак»).