Методические указания по определению гоала в почве, эфиромасличных растениях и эфирных маслах методом газожидкостной хроматографии
(утв. Минздравом СССР 08.06.1987 № 4325-87)
8 июня 1987 г. № 4325-87
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ГОАЛА В ПОЧВЕ, ЭФИРОМАСЛИЧНЫХ РАСТЕНИЯХ И ЭФИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ <*>
<*> Разработаны Ю.С. Барановым (ВНИИЭМК).
Краткая характеристика препарата приведена в Методических указаниях № 3063-84.
Принцип метода. Метод основан на извлечении гоала из почвы и растительных проб ацетоном с последующим перераспределением из водно-ацетоновой смеси в н-гексан, очистке гексановых экстрактов концентрированной серной кислотой и определении методом ГЖХ с ДПР.
Метрологическая характеристика метода. Минимально детектируемое количество гоала 0,1 нг. Остальные параметры приведены в таблице 59.
(n = 5, p = 0,95)
| Параметры | Анализируемый объект | ||
| почва | растения | эфирное масло | |
| Нижний предел определения, нг Среднее значение определения (при n = 15), % Стандартное отклонение, % Доверительный интервал среднего, % | 0,002 89,4 +/- 2,1 +/- 5,1 | 0,004 79,8 +/- 2,3 +/- 5,6 | 0,02 80,5 +/- 2,1 +/- 5,2 |
Избирательность метода. Метод селективен в присутствии ХОП и ФОП, определению не мешают фенилзамещенные мочевины, симм-триазины, амиды, трефлан, стомп, нитрохлор, префоран.
Реактивы и растворы. Ацетон ч. н-Гексан ч. Серная кислота ч. Бензол. Оксид алюминия для хроматографии ч., II степени активности по Брокману. Хроматон N-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% SE-30. Хроматон N-супер (0,16 — 0,20 мм) с 5% XE-60. Стандартные растворы гоала в гексане с содержанием 10; 1 и 0,1 мкг/мл. Растворы гоала стабильны при хранении в холодильнике в течение 6 мес.
Приборы и посуда. Хроматограф газовый с ДЭЗ «Цвет-106», «Цвет-164», «Газохром-1106» и др. Аппарат для встряхивания. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор. Весы технические и аналитические. Воронки делительные. Колбы: плоскодонные конические; грушевидные остродонные; круглодонные; мерные на 100 мл. Мензурки на 100 и 50 мл. Пипетки на 1 и 10 мл. Пробирки на 10 и 20 мл типа ПЧО. Микрошприцы на 10 мкл. Колонка для хроматографии длиной 100 мм с диаметром 15 мм.
Подготовка к определению. Органические растворители (ацетон, н-гексан, бензол) перед началом работы следует очистить по соответствующим методикам и перегнать, сульфат натрия прокалить при 300 — 400 °C. Хроматографическую колонку кондиционируют в режимных условиях в течение 2 ч.
Отбор проб. Для анализа отбирают среднюю пробу почвы массой 100 г, растений-эфироносов — 50 г, эфирного масла — 10 г. Пробы хранят в холодильнике при 5 °C не более суток.
Ход анализа. Экстракция. Пробу измельченной и просеянной через сито почвы (100 г) помещают в колбу на 250 мл, заливают 150 мл ацетона и экстрагируют 1 ч, используя механический встряхиватель; оставляют на ночь. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Остаток на фильтре дважды промывают ацетоном порциями по 30 мл. Фильтрат концентрируют до объема 10 мл на ротационном испарителе при температуре водяной бани 50 °C. Остаток с 30 мл н-гексана переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды, встряхивают и отделяют верхний слой, пропуская его через 100 г безводного сульфата натрия. Оставшийся водный раствор дважды экстрагируют н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенные гексановые экстракты пропускают через безводный сульфат натрия и концентрируют на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл бензола, закрывают колбу и вращают ее. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл раствора. Если экстракт окрашен, бензольный раствор переносят количественно (4 мл бензола) в пробирку с притертой пробкой, прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, энергично встряхивают и оставляют на 10 — 20 мин. После расслоения фаз в хроматограф вводят 2 мкл бензольного слоя.
Свежесрезанные эфиромасличные растения (50 г) гомогенизируют со 150 мл ацетона в течение 15 — 20 мин. со скоростью 8000 об./мин., встряхивают 30 — 40 мин. Экстракты фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 500 мл. Остаток на фильтре дважды промывают ацетоном порциями по 50 мл. Фильтрат концентрируют на ротационном испарителе до объема 10 мл при температуре водяной бани 50 °C. Остаток количественно с 30 мл н-гексана переносят в делительную воронку вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл дистиллированной воды, встряхивают и отделяют верхний слой, пропуская его через 100 г безводного сульфата натрия. Оставшийся водный раствор дважды экстрагируют н-гексаном порциями по 30 мл. Объединенные экстракты пропускают через безводный сульфат натрия и концентрируют на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 5 мл бензола и 1 мл концентрированной серной кислоты, энергично встряхивают и оставляют на 10 — 20 мин. После расслоения фаз в хроматограф вводят 2 мкл бензольного раствора.
Если проба окрашена, проводят дополнительную очистку на колонке с оксидом алюминия. Для этого отбрасывают на делительной воронке слой серной кислоты, а оставшийся бензольный раствор переносят на предварительно промытую бензолом хроматографическую колонку, заполненную смесью из 6 г оксида алюминия и 2 г безводного сульфата натрия. Элюируют гоал 60 мл бензола. Элюат концентрируют до 1 мл на ротационном испарителе и 2 мкл раствора вводят в испаритель хроматографа.
Навеску эфирного масла (10 г) растворяют в 50 мл н-гексана. В делительной воронке вместимостью 250 мл гексановый раствор трижды промывают концентрированной серной кислотой порциями по 30 мл. Верхний гексановый слой пропускают через безводный сульфат натрия. Серную кислоту собирают и через 1,5 — 2 ч снова отделяют гексановый слой, который присоединяют к основному раствору. Объединенный гексановый раствор упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C. К сухому остатку по стенкам колбы прибавляют 1 мл бензола, закрывают и вращают колбу. В испаритель хроматографа вводят 2 мкл раствора.
Если проба очищена недостаточно, проводят дополнительную очистку на колонке с оксидом алюминия.
Условия хроматографирования. Используют стеклянные спиральные колонки длиной 1 м с внутренним диаметром 3 мм. Расход газа-носителя 60 мл/мин.
Температура (°C): испарителя — 250, термостата детекторов — 250, термостата колонок — 190. Хроматографируемый объем 2 мкл. Линейный динамический -12 диапазон 0,1 — 10 нг. Рабочая шкала электрометра 20 x 10 А. Время удерживания гоала на SE-30 — 7 мин. 45 с, на XE-60 — 9 мин. 9 с.
Обработка результатов анализа. Содержание препарата в анализируемой пробе (X, мг/кг) рассчитывают по формуле:
HV
1
где:
H — высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;
V — объем анализируемой пробы, мл; 1
V — объем инъектируемой пробы, мкл; 2
K — калибровочный коэффициент, определяемый по формуле:
H H H
1 1 2 n
K = — (--- + --- + ... + ---),
n CV CV CV
1 2 n
где:
H , H , H - высоты пиков стандартных растворов гоала, мм; 1 2 n V , V , V - объемы стандартных растворов гоала, вводимых в 1 2 n
хроматограф, мкл;
C — концентрация стандартного раствора гоала (0,5 мкг/мл).
Содержание гоала в пробах почвы, растений и эфирного масла вычисляют как среднее из трех параллельных определений.
Требования безопасности. Следует руководствоваться правилами безопасности при работе с соединениями третьего класса токсичности и легколетучими растворителями.