Временные методические указания по определению остаточных количеств арилона по бензолсульфонамиду в зернах хлопка, почве и воде тонкослойной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 21.11.1985 № 4037-85)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299).
21 ноября 1985 г. № 4037-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ АРИЛОНА ПО БЕНЗОЛСУЛЬФОНАМИДУ В ЗЕРНАХ ХЛОПКА, ПОЧВЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Арилон (хлорамин «Б») — кристаллогидрат натриевой соли бензолсульфонамида. Арилон показал хорошие результаты в качестве антисептика на хлопке.
Cl
/
/\\ SO N x 3H O C H O NClSNa / \\/ 2 \ 2 6 11 5
| Na Мол. масса 267,66. |
|---|
\ //
\//
Арилон хорошо растворим в воде и водных растворах щелочей. При нагревании выше 150 °С разлагается с выделением газообразных продуктов разложения (HCl, Cl). В водных и кислых растворах нестабилен, в течение нескольких минут разлагается до бензолсульфонамида.
МДУ арилона в хлопке еще не установлен.
2. Методика определения арилона в зернах хлопка, почве и воде тонкослойной хроматографией
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода.
Метод основан на извлечении арилона в виде бензолсульфонамида (БСА) из анализируемого объекта этилацетатом, перераспределении в солянокислый раствор, а затем, после подщелачивания, — в этилацетат и определении тонкослойной хроматографией.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода.
Диапазон измеряемых концентраций 0,1 — 0,5 мкг в хроматографируемой пробе по БСА.
Предел обнаружения арилон БСА в хлопке 0,35 мг/кг 0,2 мг/кг в почве 0,1 мг/кг 0,07 мг/кг в воде 0,003 мг/л 0,002 мг/л
Дальнейшая метрологическая характеристика метода представлена в таблице 1.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Объект | Среднее значение определения стан- _ дартных количеств С при n = 15, % | Стандартное отклонение при n = 15, S, % | Доверительный интервал среднего определения при р = 0,95, n = 5, % | Размах варьирования R, % |
|---|---|---|---|---|
| Хлопок Почва Вода | 85,7 92,7 86,7 | +/- 11,2 +/- 7,0 +/- 9,7 | 85,7 +/- 13,8 92,7 +/- 8,6 86,7 +/- 12,1 | 70 — 100 80 — 100 70 — 100 |
2.1.3 Избирательность метода.
Метод селективен. Другие пестициды, применяемые на хлопчатнике, в том числе хлорорганические и фосфорорганические, определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетон, осч, ГОСТ 2609-79, свежеперегнанный.
Этилацетат, хч, ГОСТ 22300-76, свежеперегнанный.
Этиловый спирт 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77.
Бензол, чда, ГОСТ 5955-75.
Na SO , хч, ГОСТ 4166-76, безводный. 2 4
о-Толидин, ч, ТУ 6-09-2992-73.
KI, йодистый кали, хч, ГОСТ 4232-74.
Соляная кислота, фиксанал, осч, ГОСТ 14261-77, 0,1 н, 10-процентный.
КОН, едкое кали, техн., ГОСТ 9285-78.
Уксусная кислота, осч, ГОСТ 18270-72, ледяная.
Проявляющий реагент 1. Растворяют 0,16 г о-толидина в 30 мл уксусной кислоты, доводят до 500 мл водой и прибавляют 1 г KI. Раствор хранить в темном месте.
Хлорирующая смесь. Смешивают равные объемы 1,5-процентного раствора KMnO и 10-процентного раствора HCl в чашечке Петри. Смесь в чашке Петри
4
помещают на дно хлорирующей камеры с притертой крышкой. Для этой цели обычно достаточно 10 — 12 мл хлорирующей смеси.
Проявляющий реагент 2. Смешивают 50 мл 1-процентного водного раствора KI с 50 мл 3-процентного водного свежеприготовленного, доведенного до кипения крахмала и 20 мл этилового спирта. При хранении на холоде раствор стабилен в течение нескольких дней.
Стандартные растворы бензолсульфонамида в ацетоне с содержанием 100 и 10 мкг/мл. Раствор 1 с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 10 мг бензолсульфонамида, помещенного в мерную колбу на 100 мл, в ацетоне. Для приготовления раствора 2 с содержанием 10 мкг/мл из раствора 1 пипеткой отбирают в мерную колбу на 100 мл 10 мл и доводят до метки ацетоном. Растворы 1 и 2 стабильны при хранении в холодильнике в течение одного месяца.
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Камера хроматографическая, ГОСТ 10565-75, или аналогичная.
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, с набором колб или аналогичный.
Делительные воронки, ГОСТ 8613-75, на 250 и 1500 мл.
Стеклянные пульверизаторы, ГОСТ 10391-74.
Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-77, на 10, 15 и 2 мл.
Пробирки с пробками на шлифах, ГОСТ 10515-75, на 10 мл.
Круглодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100 и 250 мл.
Плоскодонные колбы, ГОСТ 9737-70, на 100, 500 мл.
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл.
Камера хлорирующая с пришлифованной крышкой.
Пластинки силуфол, 150 х 150 см, производство ЧССР.
2.4. Подготовка к определению
Хроматографические камеры за один час до начала хроматографирования заполняют смесью подвижных растворителей гексан:этилацетат (1:1) или бензол:ацетон (7:3). Объем подвижного растворителя в камере должен по высоте находиться не выше чем 0,7 — 1 см от уровня дна камеры.
2.5. Отбор проб
Отбор проб проводят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 г., № 2051-79.
2.6. Подготовка проб к анализу
Зерна хлопка измельчают на кофейной мельнице до консистенции муки грубого помола. Для определения берут 3 — 5 проб массой по 10 г. Почву просеивают, отбирают средние пробы массой по 15 г. Перед анализом почву увлажняют 2 мл воды.
2.7. Проведение определения
Хлопок, почва. Навеску анализируемого образца помещают в плоскодонную колбу на 500 мл, заливают 75 мл перегнанного этилацетата и экстрагируют БСА на механическом встряхивателе в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу на 250 мл. Экстракцию повторяют еще два раза, используя каждый раз по 50 мл этилацетата. Объединенный этилацетатный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 2 мл, а почвенный экстракт досуха. К остатку в колбе приливают 15 мл 0,1 н HCl в экстракт из хлопка и 30 мл 0,1 н HCl — в почвенный экстракт. Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку на 250 мл. Стенки колбы тщательно обмывают 0,1 н HCl порциями по 15 и 30 мл. Полученные растворы также фильтруют в делительную воронку. В результате жир из хлопкового экстракта остается на бумажном фильтре. Если делительная воронка все-таки испачкалась жиром, солянокислотный экстракт переносят в другую воронку, при этом жир остается на стенках первой колонки. Далее к экстракту добавляют 1,25 мл 4 н КОН до pH = 10. БСА извлекают экстракцией этилацетатом, порциями по 30 мл три раза. Экстракт сушат над безводным сульфатом натрия (15 — 20 г), фильтруют и концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха.
К сухому остатку от хлопка пипеткой приливают 1 мл этилацетата, а к почвенному экстракту — 0,5 мл ацетона. Колбу закрывают пробкой и тщательно обмывают стенки колбы растворителем. Для хроматографирования отбирают аликвоты в 100 мкл.
Вода. К 1 л воды, помещенной в делительную воронку емкостью 1,5 л, приливают 1 мл 4 н КОН и экстрагируют БСА этилацетатом, насыщенным водой, порциями по 150 мл и два раза по 100 мл. Этилацетатный экстракт концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя досуха. Остаток с помощью 0,1 н HCl (30 мл х 3) переносят в делительную воронку на 500 мл, в воронку добавляют 1,25 мл 4 н КОН и трижды экстрагируют БСА этилацетатом порциями по 30 мл. Этилацетатный экстракт сушат над безводным сульфатом натрия, а затем порциями концентрируют с помощью ротационного вакуумного испарителя до объема около 2 мл. Последнюю порцию концентрируют досуха. К сухому остатку пипеткой приливают 1 мл ацетона, колбу закрывают пробкой на шлифе и ее стенки тщательно обмывают растворителем. Для ТСХ отбирают аликвоту в 100 мкл.
На пластинку наносят микрошприцем 100 мкл полученного раствора. Справа и слева от рабочей пробы на пластинку микрошприцем наносят серию стандартных растворов 2 в количестве 10, 20, 30... 50 мкл, что соответствует 0,1; 0,2; 0,3;... 0,5 мкг БСА. Хроматограмму развивают в смеси этилацетата с гексаном (1:1) или бензола с ацетоном (7:3). После развития хроматограммы пластинку во влажном состоянии помещают в камеру с хлорирующей смесью на 2 - 3 мин., затем пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу и дают возможность избытку хлора испариться, после чего обрабатывают пластинку из пульверизатора о-толидиновым реагентом. Бензолсульфонамид проявляется на пластинках в виде сиреневых пятен на белом фоне с R = 45 +/- 0,03 в первой системе подвижных
f
растворителей и с R = 0,50 +/- 0,03 — во второй. Линейный диапазон f определения 0,1 — 0,5 мкг БСА. Пятна стабильны в течение длительного
времени.
Хроматограмму можно проявлять также проявляющим реагентом 2. В этом случае БСА проявляется на пластинках в виде голубых пятен на белом фоне с нижним пределом определения 0,1 — 0,2 мкг.
2.8. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.
Содержание арилона в анализируемой пробе X в мг/кг вычисляют по формуле:
С х V х К
где:
С — количество бензолсульфонамида, найденное на пластинке методом соотношения со стандартом, мкг;
V — объем аликвоты, взятой для хроматографирования, мл; а
К — коэффициент пересчета БСА на арилон, равен 1,71.
3. Требования безопасности
Соблюдать требования безопасности, принятые для работы с легковоспламеняющимися жидкостями, кислотами и щелочами.
4. Разработчики
Методические указания разработаны во ВНИИ химических средств защиты растений с опытным заводом, г. Москва, Л.И. Лещинской, К.Ф. Новиковой.
5. Апробаторы
1. НПО «Эфирмасло», Ю.С. Баранов.