Временные методические указания по определению остаточных количеств препарата 320-К в зерне и воде тонкослойной хроматографией
(утв. Минздравом СССР 22.05.1985 № 3890-85)
22 мая 1985 г. № 3890-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРЕПАРАТА 320-К В ЗЕРНЕ И ВОДЕ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИЕЙ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препарата
Препарат 320-К — новый отечественный гаметоцид для стерилизации пыльцы зерновых культур и подсолнечника. Действующее начало препарата — калиевая соль цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновой кислоты.
CH
│ 3
/ \ COOK C H O K.
/ \ / 8 11 2
| Мол. масса 178,264. |
|---|
\ /
\ /
В чистом виде соль 320-К - твердое вещество белого цвета, весьма гигроскопичное, хорошо растворимое в воде, практически нерастворимое в
органических растворителях.
ЛД для белых беспородных мышей — 1,417 г/кг, введение препарата в 50 желудок белых крыс на уровне 1000 мг/кг массы тела не вызывало гибели животных.
ПДК в зерне и воде еще не установлено.
2. Методика определения препарата 320-К в зерне и воде тонкослойной хроматографией
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на превращении соли 320-К в кислоту 320 (цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновую) и экстракции последней ацетоном, обработкой измельченного зерна смесью 0,1 н HCl и ацетона. После упаривания ацетона кислоту 320 извлекают из водного слоя бензолом. Конечное определение проводят хроматографией на пластинках Silufol UV 254.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Диапазон измеряемых концентраций
Предел обнаружения — 2 - 10 мкг в хроматографируемой пробе.
Предел обнаружения — 0,1 мг/кг в зерне и 0,002 мг/кг в воде. _
Среднее значение определения стандартных количеств препарата с при n = 15
Стандартное отклонение S при n = 15
Доверительный интервал среднего при р = 0,95 и n = 5
2.1.3 Избирательность метода
Метод селективен. Хлорорганические и фосфорорганические пестициды определению не мешают.
2.2. Реактивы и материалы
Бензол, ГОСТ 5955-75, осч
Хлороформ, ТУ 6-09-4263-76, хч
Спирт этиловый 96-процентный, ТУ 6-09-1710-77
Муравьиная кислота, ГОСТ 5848-73, хч
Уксусная кислота, ГОСТ 18290-72, хч
Натрий углекислый кислый, ГОСТ 4283-79, хч
Натрий фосфорнокислый двузамещенный, ГОСТ 11773-76, хч
Магний сернокислый, ГОСТ 4523-77, хч
Соляная кислота, ГОСТ 3118-77, хч
Цис-2-метил-3-циклогексенкарбоновая кислота (320)
Индикаторная универсальная бумага, ТУ 6-09-1181-71
Бромфеноловый синий индикатор, ТУ 6-09-1058-76, чда
Метиловый красный индикатор, ТУ 6-09-4070-75, чда
Стандартные растворы кислоты 320 в бензоле с содержанием 100 мкг (раствор А) и 10 мкг (раствор Б)
Спиртовой раствор бромфенолового синего и метилового красного (раствор В)
Водный 0,1 М раствор натрия фосфорнокисл. двузамещен. (раствор Г)
Пластинки Silufol UV 254 15 х 15 см
5-процентный раствор бикарбоната натрия
2.3. Приборы, аппаратура и посуда
Гомогенизатор тканей типа РТ-1
Магнитная мешалка типа ММ 2А (Чехословакия)
Ротационный вакуумный испаритель типа Unipan-350 (Польша)
Весы аналитические типа ВЛА-200М
Микрошприц на 10 мкл типа МШ-10, ТУ 2-833-106
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, емкостью 100 мл
Колбы плоскодонные с притертыми пробками, ГОСТ 10394-72, на 100 мл
Колбы круглодонные с притертыми пробками, ГОСТ 10394-72, емкостью 100 мл и 20 мл
Пипетки, ГОСТ 1770-74, на 1 мл и 10 мл
Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, на 100 мл, 50 мл и 10 мл
Камеры хроматографические, ГОСТ 10565-75
Воронки делительные, ГОСТ 10054-75, на 250 мл и 1500 мл
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74
Пробирки калиброванные, ГОСТ 10394-72, на 5 мл
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Приготовление стандартных растворов кислоты 320 в бензоле
Для приготовления стандартного раствора А в мерной колбе емкостью 100 мл взвешивают 100 мг кислоты 320 с точностью +/- 0,0002 г. Содержимое колбы растворяют в 30 мл бензола и затем доводят объем раствора до метки тем же растворителем. Для приготовления раствора Б из раствора А пипеткой отбирают 10 мл, переносят в мерную колбу емкостью 100 мл и добавлением бензола доводят объем раствора до метки.
Растворы А и Б при хранении при комнатной температуре стабильны в течение года.
2.4.2 Приготовление растворов для проявления хроматограмм
Для приготовления раствора В в мерной колбе на 100 мл взвешивают 20 мг бромфенолового синего и 60 мг метилового красного, растворяют красители в 50 мл спирта и прибавлением спирта доводят объем раствора до метки.
Раствор красителей при хранении в течение месяца в холодильнике стабилен.
Для приготовления раствора Г в мерной колбе на 100 мл растворяют: г Na HPO х 12 H O в 50 мл воды и доводят объем раствора до 100 мл. 2 4 2
Раствор Г стабилен при хранении при комнатной температуре в течение года.
Раствор для проявления хроматограмм опрыскиванием готовят непосредственно перед употреблением смешиванием равных объемов растворов В и Г.
2.5. Отбор проб
Отбор проб для анализа проводят в соответствии с утвержденными Министерством здравоохранения СССР «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).
Из партии зерна, подлежащей анализу, отбирают 11 г (при необходимости зерно предварительно подсушивают), измельчают с помощью гомогенизатора тканей и отбирают навеску массой 10 г.
2.6. Проведение определения
Навеску измельченного зерна (10 г) помещают в коническую плоскодонную колбу емкостью 100 мл, добавляют 10 мл 0,1 н HCl и 20 мл ацетона. Кислоту 320 экстрагируют перемешиванием в течение часа на магнитной мешалке. Экстракт отделяют от зерна фильтрованием на воронке Бюхнера с бумажным
фильтром, собирая в круглодонную колбу емкостью 100 мл. Экстракцию ацетоном (порциями по 20 мл) повторяют еще два раза. Из объединенного экстракта с помощью ротационного вакуумного испарителя упаривают ацетон (на поверхности
водного остатка появляются жирные пятна). Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 250 мл, колбу дважды смывают подкисленной до
pH = 3 водой (порциями по 5 мл) и дважды бензолом (порциями по 5 мл). Сливы также переносят в делительную воронку. Далее водный слой отделяют и трижды экстрагируют бензолом (объем бензола каждый раз равен объему водного слоя).
Объединенный бензольный экстракт энергично перемешивают 10 минут на магнитной мешалке с 5-процентным раствором NaHCO , прибавляя последний в
3
количестве, необходимом для того, чтобы рН смеси был 9 - 10. После обработки водный слой отделяют на делительной воронке, а бензольный слой
промывают 3 раза водой (объем воды равен 1/4 объема бензольного слоя). Воду от промывки объединяют с водным слоем. Суммарный водный слой подкисляют 0,1
н HCl до рН 3 и трехкратно экстрагируют бензолом (объем бензола каждый раз равен объему водного слоя). Объединенный бензольный экстракт сушат над прокаленным MgSO , далее сушитель отфильтровывают, промывают сухим
4
бензолом, который после промывки объединяют с бензольным экстрактом. Полученный бензольный раствор упаривают сначала с помощью ротационного вакуумного испарителя, а затем струей воздуха до объема 0,5 мл и с помощью
капилляра количественно наносят на пластинку Silufol UV 254.
Для обнаружения препарата 320-К в воде пробу воды — 1 литр помещают в делительную воронку емкостью 1500 мл, воду подкисляют конц. HCl до рН 3 и экстрагируют кислоту 320 бензолом трижды порциями по 100 мл. Бензольный экстракт сушат над прокаленным сульфатом магния, фильтруют порциями через бумажный фильтр в круглодонную колбу емкостью 20 мл. Далее поступают, как описано выше для зерна.
Сконцентрированный до 0,2 — 0,5 мл экстракт с помощью стеклянного капилляра количественно с помощью бензола переносят на пластинку Silufol UV 254 размером 15 x 15 см. Справа и слева на пластинку наносят серию стандартных растворов кислоты 320 с содержанием последней 1, 2, 3, 4 и 5 мкг. Серию стандартных растворов кислоты 320 получают следующим образом: в градуированные пробирки на 5 мл пипеткой последовательно помещают 0,1, 0,2, 0,3, 0,4 и 0,5 мл стандартного раствора Б, что соответствует 1, 2, 3, 4 и 5 мкг кислоты 320. В последних трех пробирках концентрируют раствор до 0,2 — 0,3 мл струей воздуха. Затем из каждой пробирки капилляром количественно с помощью бензола переносят стандарты на хроматографическую пластинку.
Хроматограмму развивают в системе бензол:диоксан:хлороформ:муравьиная кислота (5:1:2:0,02) или в системе бензол:диоксан:хлороформ:уксусная
кислота (10:2:5:0,02). Хроматограмму сушат на воздухе, а затем обрабатывают опрыскиванием из пульверизатора проявителем, приготовленным непосредственно
перед обработкой смешением равных объемов растворов В и Г. Кислота 320 проявляется на хроматограмме в виде красного пятна на зеленом фоне, R в
f
первой системе — 0,39 +/- 0,1, а во второй — 0,64 +/- 0,4.
2.7. Обработка результатов анализа
Количественное определение препарата 320-К проводят методом соотношения со стандартами по площади и плотности пятна кислоты 320.
Содержание препарата 320-К в мг/кг или в мг/л вычисляют по формуле:
А х V х 178,264
Х = ----------------, Р х V х 140,184 а
где:
А — количество кислоты 320, найденное в пробе путем сравнения со стандартами, мкг;
Р — навеска зерна в г или объем анализируемой воды в мл;
178,264 — мол. вес препарата 320-К;
140,184 — мол. вес кислоты 320;
V — конечный объем раствора, мл;
а
3. Требования безопасности
Необходимо соблюдать правила безопасности, принятые для работы с легко воспламеняющимися жидкостями и концентрированными кислотами.
4. Настоящая Методика разработана сотрудниками Института биоорганической химии им. Шемякина АН СССР Егоровым И.В. и Граменицкой В.Н.
5. Методические указания апробированы во ВНИИХСЗР (Новикова К.Ф.) и в институте органической химии им. Зелинского (Громова Г.П.).