Временные методические указания по определению лентаграна в продукции, почве и воде хроматографией в тонком слое
(утв. Минздравом СССР 12.04.1985 № 3253-85)
12 апреля 1985 г. № 3253-85
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ЛЕНТАГРАНА В ПРОДУКЦИИ, ПОЧВЕ И ВОДЕ ХРОМАТОГРАФИЕЙ В ТОНКОМ СЛОЕ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Агропрома СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками Госагропрома СССР.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
1. Краткая характеристика препаратов
1.1 Лентагран.
1.2 S-Октил-О-(6-хлоро-3-фенилпиридазинил-4)тиокарбонат.
1.3 Структурная формула:
N───N
// \\ C H -\ ___ /-Cl C H ClN O 6 5 ─── \ 19 23 2 2
OCOSC H
1.4 Пиридат, СЛ 11344.
1.5. Химически чистое соединение — белое кристаллическое вещество с температурой плавления 27 °С. Растворимость в воде 90 мг/л. Хорошо растворяется в большинстве органических растворителей.
Препарат малотоксичен для теплокровных животных. ЛД для крыс 2000 50 мг/кг.
Выпускается в форме смачивающихся порошков, содержащих различные количества действующего вещества.
2. Методика определения лентаграна
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на извлечении лентаграна из растительных проб, почвы и воды органическим растворителем (ацетон, н-гексан), очистке экстрактов путем перераспределения между двумя несмешивающимися жидкостями. Количественное определение проводят хроматографией в тонком слое.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
Минимально детектируемое количество 1 — 2 мкг
в растениях 70,0 - 90,0 в почве 80,0 - 95,0 в воде 81,0 - 100.
_
С — среднее значение определения, %:
в растениях 78,6 в почве 87,5 в воде 89,5.
в растениях +/- 9,0 в почве +/- 8,7 в воде +/- 7,9.
Доверительный интервал среднего при альфа = 0,95 и n = 5%:
для растений 78,6 +/- 9,0 для почвы 87,5 +/- 8,7 для воды 89,5 +/- 7,9.
2.1.3 Избирательность метода
Метод специфичен, другие соединения в данных условиях хроматографирования определению не мешают.
2.2. Реактивы и растворы
Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-74.
Висмут азотнокислый, ч.д.а., ГОСТ 4110-75.
Калий йодистый, х.ч., ГОСТ 4232-74.
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., ГОСТ 4166-76.
Натрий хлористый, ч.д.а., ГОСТ 4233-77.
Силикагель для хроматографирования ЛС 5/40 (ЧССР).
Кальций сернокислый, ч.д.а., ГОСТ 3210-77.
Серная кислота, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Стандартный раствор лентаграна в ацетоне с концентрацией 100 мкг/мл.
Серебро азотнокислое, ч., ГОСТ 1277-75.
1. Реактив Драгендорфа в модификации А.С. Тищенко. Растворяют 1,5 г нитрата висмута и 7,5 г йодида калия в 100 мл 2-процентной серной кислоты.
2. 0,5 г азотнокислого серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл аммиака и доводят до 100 мл ацетоном.
2.3. Приборы и посуда
Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ 64-1-1081-73.
Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.
Прибор для облучения УФ-светом с лампой ПРК-4, ТУ 16-535-280-74.
Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.
Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.
Хроматографическая камера, ГОСТ 10565-75.
Воронки химические, ГОСТ 8613-81.
Колбы конические со шлифом и пробками на 250 — 500 мл, ГОСТ 10394-72.
Колбы круглодонные со шлифом на 100 — 250 мл, ГОСТ 10394-72.
Делительные воронки на 250 — 500 мл, ГОСТ 8613-81.
Пипетки на 0,1 мл, ГОСТ 20292-74.
Цилиндры мерные на 50 — 100 мл, ГОСТ 1770-81.
2.4. Отбор проб
Отбор и хранение проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб», утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР, № 2051-79 от 21 августа 1979 года.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Приготовление пластинок
Стеклянные пластинки размером 9 х 12 см тщательно моют. 3,5 г силикагеля смешивают в ступке с 1,5 г сернокислого кальция, добавляют 30 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и равномерно наносят на 5 пластинок. Сушат их при комнатной температуре 17 — 18 часов, затем в сушильном шкафу 20 минут при температуре 170 — 180 °С и хранят в эксикаторе над слоем осушителя.
2.6. Проведение определения
Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку и добавляют 10 — 15 г хлористого натрия. Лентагран экстрагируют тремя порциями н-гексана по 50 мл каждый раз в течение 5 минут. Объединенный экстракт фильтруют над слоем безводного сернокислого натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе до 0,2 — 0,3 мл при температуре воды в бане около 50 °С. Остаток удаляют в токе воздуха.
Почва. 100 г измельченной почвы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают 200 мл водного ацетона (1:1) или 80 мл ацетона. Экстракцию пиридата проводят путем энергичного встряхивания в течение одного часа. Раствор фильтруют и переносят в делительную воронку, добавляют 200 мл дистиллированной воды (в случае экстракции водным ацетоном) и экстрагируют лентагран тремя порциями гексана по 50 мл. Растворитель объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием, концентрируют до 0,2 — 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха. Ацетоновый экстракт отгоняют на ротационном испарителе.
Зеленая масса кукурузы. 40 г измельченной зеленой массы кукурузы помещают в коническую колбу с притертой пробкой, заливают до покрытия поверхности н-гексаном или этилацетатом. Экстракцию проводят путем энергичного встряхивания в течение одного часа. Экстракт отфильтровывают через складчатый фильтр со слоем безводного сернокислого натрия. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе до объема 0,2 — 0,3 мл. Остаток удаляют в токе воздуха.
2.5.2 Очистка экстрактов
Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила, добавляют 100 мл воды и отфильтровывают через складчатый фильтр.
Лентагран экстрагируют 3 порциями н-гексана по 70 мл в течение 5 минут.
Экстракты объединяют, сушат над безводным сернокислым натрием и отгоняют на ротационном испарителе до 0,3 мл.
2.5.3 Идентификация и количественное определение лентаграна
Пробу, концентрированную до 0,3 мл, количественно переносят на пластину с сорбентом.
Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием 3, 5, 10 мкг действующего вещества лентаграна.
При необходимости используют двумерную хроматографию, используя в качестве первой подвижной фазы хлороформ. Затем пластину помещают в камеру с системой подвижных растворителей н-гексан — ацетон 4:1 по объему.
После обработки стеклянных пластинок реактивом Драгендорфа лентагран проявляется в виде красных пятен с величиной R = 0,65 +/- 0,05. Нижний
f
предел обнаружения — 2 мкг.
После обработки хроматограмм азотнокислым серебром их помещают под источник УФ-света до четкого появления пятен препарата.
Содержание лентаграна в исследуемой пробе вычисляют по формуле:
А
А — количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
Р — навеска или объем воды, г, мл;
3. Техника безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.
4. Методика разработана Красных А.А., Чебышевой В.М. (ВНИИ защиты растений).