Временные методические указания по хроматографическому измерению концентрации раундапа в воздухе рабочей зоны
(утв. Минздравом СССР 24.08.1983 № 2854-83)
24 августа 1983 г. № 2854-83
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОМУ ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ РАУНДАПА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
Настоящие Методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава СССР, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхоза СССР и лабораторий других министерств и ведомств, занимающихся анализом остаточных количеств пестицидов и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.
Срок действия временных методических указаний устанавливается до утверждения гигиенических регламентов.
Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных группой экспертов при Госкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками при МСХ.
Методические указания согласованы и одобрены отделом перспективного планирования санэпидслужбы ИМПиТМ им. Марциновского Е.И. и Лабораторным советом при Главном санитарно-эпидемиологическом управлении Минздрава СССР.
O
| HN CH | C OH | |
| 2 | ||
CH
│ 2
O=P─OH
Раундап (синоним — глифосат, действующее начало — N-фосфонометилглицин) — белое кристаллическое вещество. Т. разложения 230 °С. Растворимость в воде при 25 °С — 1%. Плохо растворим в органических растворителях. Практически не летуч. При применении может находиться в воздухе в виде аэрозоля.
I. Характеристика метода
1. Определение основано на хроматографировании раундапа в тонком слое ионообменной смолы пластинок «Фиксион 50 х 8» с последующим обнаружением зоны локализации препарата с помощью раствора нингидрина.
2. Отбор проб проводится с концентрированием (фильтр АФА-ХА-20).
3. Предел измерения в анализируемом объеме пробы — 1 мкг.
4. Предел измерения в воздухе — 0,5 мг/куб. м (при отборе 2 л воздуха).
5. Диапазон измеряемых концентраций — 0,5 — 15 мг/куб. м.
6. Определению раундапа мешают соединения, содержащие в своем составе первичные и вторичные аминогруппы, дающие цветную реакцию с нингидрином.
7. Граница суммарной погрешности измерения +/- 12%.
8. Ориентировочно безопасный уровень воздействия раундапа — 1,0 мг/куб. м.
II. Реактивы, растворы, материалы
Натрий тетраборнокислый, чда, ГОСТ 4199-76, 0,05 М водный раствор (pH 9,18).
Нингидрин, чда, ТУ 6-09-2737-73.
Кадмий уксуснокислый, чда, ГОСТ 5824-71.
Уксусная кислота (ледяная), хч, ГОСТ 61-75.
Этиловый спирт, 96%, ТУ 6-09-1710-77.
Медь азотнокислая (II), хч, ТУ 6-09-3757-74.
Азотная кислота, хч, ГОСТ 4461-77.
Ионообменная смола КУ-2-8, ГОСТ 20298-74.
Соляная кислота, хч, ГОСТ 3118-77, 25-процентный водный раствор.
Пластинки хроматографические «Фиксион 50 х 8» (ВНР).
Ионообменная хроматографическая колонка с КУ-2-8, катионит КУ-2-8 с размером зерен 0,4 - 1,5 мм, помещают в химический стакан емкостью 250 мл, заливают бидистиллированной водой и оставляют на 24 часа для набухания. Воду затем сливают, а катионит заливают 25-процентной соляной кислотой и встряхивают на встряхивателе в течение 1 часа, затем промывают трижды бидистиллированной водой и осторожно переносят вместе с водой в хроматографическую колонку (высота столбика смолы 16 - 17 см). Сверху катионит уплотняют тампоном из стекловаты. Через колонку пропускают 50 мл 25-процентной соляной кислоты при скорости элюации 3 - 4 мл/мин. и промывают бидистиллированной водой до pH 7. Переведенный таким образом в
Н -форму катионит готов для проведения хроматографических разделений.
Для регенерации катионита после хроматографического разделения колонку заливают 10-процентным водным раствором едкого натра, оставляя его в контакте с катионитом в течение 30 - 40 минут. После этого раствор из колонки удаляют, а к катиониту прибавляют свежую порцию раствора щелочи. Такую обработку катионита проводят 2 - 3 раза. Затем катионит промывают
+
бидистиллированной водой и переводят в Н -форму, как описано выше.
Подвижная фаза: 0,05 М раствор натрия тетраборнокислого в бидистиллированной воде.
Проявляющий реактив № 1: 1-процентный раствор нингидрина в ацетоне. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив № 2: 1 г кадмия уксуснокислого в смеси 50 мл ледяной уксусной кислоты и 100 мл воды. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив 1а: 0,2-процентный раствор нингидрина в этаноле и 3 мл ледяной уксусной кислоты. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Проявляющий реактив 2а: 1 мл насыщенного водного раствора меди азотнокислой с 0,2 мл 10-процентной азотной кислоты доводят до 100 мл этиловым спиртом. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
Стандартный раствор раундапа в дистиллированной воде концентрации 1000 мкг/мл. Готовят из хч препарата. Стабилен в течение 1 месяца при хранении в холодильнике.
III. Приборы и посуда
Денситометр БИАН-170, модель 714.
Аспирационное устройство, ТУ 64-1-862-77.
Колбы мерные, ГОСТ 1770-74, на 100, 1000 мл.
Колбы конические, ГОСТ 10394-72, на 50 мл.
Колбы круглодонные, ГОСТ 10394-72, на 250 мл.
Стаканы химические, ГОСТ 10394-72, на 100, 250 мл.
Пипетки, ГОСТ 20292-74, на 0,1, 1, 2, 5 с делениями.
Баня водяная, ТУ 46-22-608-75.
Ротационный испаритель, ТУ 25-11-917-76, тип ИР-1М.
Камера для хроматографирования, ГОСТ 1065-75.
Ванна термостатируемая для хроматографической камеры.
Пульверизаторы стеклянные, ГОСТ 19391-74.
Хроматографическая колонка (внутренний диаметр 1,5 см, высота 30 см).
Встряхиватель, ТУ 64-1-1081-73, тип АВУ-1.
IV. Условия отбора проб воздуха
Воздух со скоростью 2 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ХА-20. Для определения 1/2 ОБУВ раундапа достаточно отобрать 2 л.
V. Условия анализа
Фильтры переносят в коническую колбу на 50 мл и экстрагируют трижды по 10 мл бидистиллированной воды. Экстрагируют глифосат при периодическом встряхивании в течение 10 — 15 минут. Объединенные экстракты вводят в хроматографическую колонку непосредственно на поверхность катионита. Открывают кран колонки и собирают элюат в химический стакан на 100 мл. После того как экстракт войдет в слой смолы, промывают колонку еще 50 мл бидистиллированной воды и собирают в тот же стакан. Переносят содержимое стакана в круглодонную колбу на 250 мл, ополаскивают стакан еще 10 — 15 мл бидистиллированной воды и переносят в ту же колбу. Подсоединяют колбу к прибору для отгонки растворителя под вакуумом и, нагревая на водяной бане не выше 40 °С, отгоняют воду, при этом температуру бани медленно поднимают до 40 °С. Сухой остаток растворяют в минимальном количестве бидистиллированной воды и количественно наносят микрошприцом или пипеткой, последней предпочтительнее, на пластинку «Фиксион 50 х 8» на 2 см от нижнего края пластинки, не повреждая слоя смолы, и пятном не более 0,5 см в диаметре, подсушивая рассеянной струей воздуха. Пластинку помещают в хроматографическую камеру с 1 см слоем 0,05 М раствора натрия тетраборнокислого в бидистиллированной воде. Хроматографическую камеру предварительно помещают в термостатируемую водяную ванну (50 °С). Термостатирование осуществляют на все время развития хроматограммы восходящим способом. Хроматографическую камеру в ванну устанавливают под небольшим наклоном, чтобы конденсирующиеся на крышке камеры водяные капли стекали с нее по стенке камеры, не попадая на хроматографическую пластинку. Для этого достаточно подложить под одну из сторон камеры стеклянный валик диам. 1 см.
После окончания хроматографирования (около 90 минут) пластинку высушивают на воздухе и обрабатывают проявляющими растворами. Проявление проводят двумя возможными вариантами: 1) обрабатывают пластинку смесью проявляющих растворов 1 и 2 (5:1 по объему), высушивают на воздухе, а затем в сушильном шкафу 5 мин. при температуре 110 °С; 2) обрабатывают пластинку проявляющим реактивом 1а, высушивают на воздухе и в сушильном шкафу 5 мин. при температуре 110 °С, а затем обрабатывают проявляющим реактивом 2а.
Расход всех реактивов для обработки хроматограмм должен быть минимальным, а струя растворов - рассеянной. Раундап проявляется в виде розовато-красных пятен на светло-желтом фоне пластинки (R - 0,82).
f
Содержание вещества в пробе находят по калибровочному графику, отражающему зависимость площади пятна от концентрации раундапа в пробе [S кв. мм = f(с)]. Для построения калибровочного графика поступают следующим образом. На ряд пластинок наносят стандартные растворы раундапа с содержанием 1; 2; 5; 10; 20; 30 мкг вещества. Развивают и обрабатывают хроматограммы, как описано выше. Затем в отраженном свете при помощи денситометра БИАН-170 снимают денситограмму площади пятен и строят график зависимости площади пятен от концентрации раундапа. Линейная зависимость функции S кв. мм = f(с) сохраняется в пределах 1 — 30 мкг.
Определяя денситометрически площадь исследуемого пятна, по графику находят содержание раундапа в пробе.
Концентрацию раундапа в воздухе (Х) в мг/куб. м рассчитывают по формуле:
G
где:
G — количество раундапа, найденное в пробе, мкг;
V — объем пробы воздуха, отобранного для анализа и приведенного к 20 стандартным условиям, л.
VI. Требования безопасности
Соблюдать правила предосторожности при работе с ядовитыми, взрыво- и легковоспламеняющимися веществами.
VII. Разработчики
Армянский филиал ВНИИГИНТОКСа, г. Ереван.