Методические указания по совместному определению прометрина, тербацила и трефлана в одной пробе почвы, эфирного масла и эфиромасличного сырья мяты перечной методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом СССР 30.03.1981 № 2363-81)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО СОВМЕСТНОМУ ОПРЕДЕЛЕНИЮ ПРОМЕТРИНА, ТЕРБАЦИЛА И ТРЕФЛАНА В ОДНОЙ ПРОБЕ ПОЧВЫ, ЭФИРНОГО МАСЛА И ЭФИРОМАСЛИЧНОГО СЫРЬЯ

---

<*> Разработаны Ю.С. Барановым, Л.А. Хилик, М.А. Клисенко (ВНИИЭМК).

Краткая характеристика препаратов. Прометрин — см. Методические указания.

    Тербацил  -  3-трет-бутил-6-метил-5-хлорурацил. Брутто-формула
C H  ClN O .    Молекулярная   масса   216,67.   Физико-химические
 9 13   2 2
свойства:  белый  кристаллический  порошок, без цвета и запаха, т.
пл.  184  °C,  растворимость  в  воде  7  мг/л  при  25 °C, хорошо
растворим    в    диметилсульфоксиде,    ацетонитриле,    ксилоле,
циклогексаноне,   хлороформе,   этилацетате.  Малолетуч:  давление

                                 -5

насыщенного пара при 29,5 °C 6,3 x 10 Па.

Трефлан — см. Методические указания.

Принцип метода. Метод основан на извлечении прометрина, тербацила и трефлана из почвы и зеленой массы растений мяты ацетоном с последующим перераспределением препаратов из ацетоноводной среды в н-гексан, выделении гербицидов из н-гексановых экстрактов растений и растворов мятного масла последовательной обработкой 0,1 н хлороводородной кислотой, 1-процентным едким натром и концентрированной серной кислотой. Индивидуальную очистку выделенных препаратов проводят методом колоночной хроматографии. Идентификацию и количественное определение микроколичеств трефлана, прометрина и тербацила проводят методом ГЖХ с ДПР и ТИД.

Метрологическая характеристика метода приведена в таблице 169.

Таблица 169

ПРИСУТСТВИИ В ПОЧВЕ, МЯТЕ И МЯТНОМ МАСЛЕ

Гербицид	Объект	Детектор	Предел определения, мг/кг	Среднее значение определений, %	Стандартное отклонение, %	Доверительный интервал, %
Прометрин	Мята Мятное масло Почва	ТИД -«- -»-	0,04 0,2 0,02	72,8 68,2 81,2	+/- 1,7 +/- 3,3 +/- 3,0	+/- 1,6 +/- 3,0 +/- 2,8
Трефлан	Мята Мятное масло Почва -«- Мята Мятное масло Мята»	ТИД -«- -»- ДПР -«- -»- ДПР	0,01 0,1 0,06 0,005 0,1 0,1 0,05	68,2 66,6 80,3 74,0 68,0 66,2 76,1	+/- 3,0 +/- 2,8 +/- 2,8 +/- 3,0 +/- 2,6 +/- 2,2 +/- 2,4	+/- 2,8 +/- 2,6 +/- 2,6 +/- 2,8 +/- 2,4 +/- 2,0 +/- 2,2
Тербацил	Почва Мятное масло	-«- -»-	0,025 0,1	80,4 74,5	+/- 2,8 +/- 2,4	+/- 2,6 +/- 2,2

Примечание. Число измерений n = 7, доверительная вероятность p = 0,95.

Избирательность метода. Пестициды, рекомендованные на мяте перечной, — хлорофос, тетрал, ДХМ, ТХА — определению не мешают.

Реактивы и растворы. Ацетон х.ч. н-Гексан х.ч. Серная кислота концентрированная ч.д.а. Безводный сульфат натрия х.ч. Этилацетат х.ч. Хлороформ х.ч. Гидроксид натрия. Хлороводородная кислота х.ч., 0,1 н раствор. Этанол-ректиф. Едкий натр х.ч., 1 н раствор. 5% силикона SE-30, нанесенного на хроматон N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм); 5% Stap на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм); 5% силикона XE-60 на хроматоне N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм).

Стандартные растворы прометрина, тербацила и трефлана в ацетоне 10 — 100 мкг/мл. Стабильны при хранении 6 мес.

Приготовление оксида алюминия. Подготовка оксида алюминия при определении трефлана. Определить массу после прокаливания 100 г алюминия в термостате при 130 °C в течение 5 ч. Вычислить количество воды, которое нужно добавить, чтобы содержание влаги довести до 1,5%, и смочить этим количеством стенки колбы на 0,5 л с притертой пробкой. Добавить в колбу 100 г оксида алюминия и тщательно перемешать путем энергичного встряхивания колбы. Колбу держать герметически закрытой.

Подготовка оксида алюминия при определении тербацила. Прокалить оксид алюминия при 130 °C в термостате в течение 5 ч. Смочить 5 мл 0,1 н хлороводородной кислоты стенки колбы с притертой пробкой на 1000 мл. Добавить в колбу 100 г прокаленного алюминия и встряхивать в течение 30 — 40 мин. Колбу хранить герметически закрытой.

Приборы, аппаратура и посуда. Газовый хроматограф «Цвет-106» с ДПР и ТИД. Ротационный вакуумный испаритель. Гомогенизатор. Встряхиватель. Микрошприц на 10 мкл. Стандартная химическая посуда из стекла (колбы Бунзена и Эрленмейера, воронки Бюхнера, химические и делительные, пипетки и др.).

Подготовка к определению. Органические растворители перед началом работы необходимо очистить и перегнать; сульфат натрия прокалить при температуре 300 — 400 °C и употреблять нагретым до 45 °C (хранить при этой температуре в термостате). Хроматографическая колонка и детектор кондиционируются в режимных условиях в течение 1 — 2 ч. Стандартные растворы гербицидов могут храниться на холоде в темных склянках в течение 1 мес.

Стеклянную колонку размером 300 x 20 мм промывают последовательно содой, хромовой смесью, дистиллированной водой и высушивают. Нижний конец колонки закрывают тампоном из гигроскопической ваты, обезжиренной гексаном. Колонку заполняют приготовленным оксидом алюминия при непрерывном постукивании по стенке резиновой трубкой. Высота слоя оксида алюминия 50 мм (при определении трефлана — 100 мм). Над оксидом алюминия помещают слой безводного сульфата натрия — 20 мм.

Ход анализа. Экстракция и разделение пестицидов. Навеску почвы 100 г без предварительного высушивания заливают 150 мл ацетона и -1

гомогенизируют  30 мин. с частотой вращения 3000 мин.  . Гомогенат
фильтруют  под  вакуумом.  Стакан  гомогенизатора  промывают 80 мл
ацетона,  который  присоединяют  к  основному  фильтрату. Фильтрат
упаривают  на  ротационном испарителе при температуре водяной бани
не  выше  45  °C  до  10 мл. К остатку прибавляют 50 мл н-гексана,

смесь количественно переносят в делительную воронку.

Отделение тербацила. Бинарную смесь н-гексан — водный ацетон в делительной воронке обрабатывают 1-процентным едким натром (3 x 50 мл), отделяют щелочную фазу, подкисляют 1,5 — 2 мл концентрированной хлороводородной кислоты до pH 3 — 4, переносят в делительную воронку и трижды реэкстрагируют тербацил этилацетатом порциями по 30 мл. Органические экстракты объединяют, высушивают, пропуская через слой безводного сульфата натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не более 50 °C. Остаток в колбе смывают 1 мл этилацетата и 2 мкл раствора вводят в испаритель хроматографа.

Отделение прометрина. Исходный н-гексановый раствор после обработки 1-процентным едким натром трижды встряхивают с 0,1 н хлороводородной кислотой, порциями по 50 мл. Кислые экстракты отделяют, подщелачивают 5 мл 1 н едкого натра до щелочной реакции (pH 7 — 9) и переносят на делительную воронку, где реэкстрагируют прометрин хлороформом — 3 раза по 50 мл. Хлороформные экстракты объединяют, высушивают, пропуская через безводный сульфат натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C. Остаток в колбе смывают 1 мл смеси н-гексан — этанол (1:1) и 2 мкл раствора вводят в испаритель хроматографа.

Выделение трефлана. Оставшийся после выделения тербацила и прометрина н-гексановый раствор высушивают, пропуская через безводный сульфат натрия, и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани 45 °C. Остаток в колбе смывают 1 мл н-гексана и 2 мкл раствора вводят в испаритель хроматографа. Хроматографируют трефлан с ТИД.

Навеску свежесобранной мяты перечной (50 г) заливают 150 мл ацетона. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному для почвы.

Отделение тербацила. Бинарную смесь н-гексан — водный ацетон на делительной воронке обрабатывают 1-процентным едким натром (3 x 50 мл), отделяют щелочную фазу, подкисляют 1,5 — 2 мл концентрированной хлороводородной кислоты до pH 3 — 4, переносят на делительную воронку и реэкстрагируют тербацил этилацетатом (3 x 30 мл). Органические экстракты объединяют, высушивают, пропуская через безводный сульфат натрия, и упаривают до 5 мл на ротационном испарителе при температуре бани 50 °C. Остаток переносят на предварительно приготовленную колонку с оксидом алюминия и промытую этилацетатом. После того как остаток полностью впитается в слой адсорбента, колбу снова смывают 5 мл этилацетата и переносят на колонку. Операцию повторяют 3 — 5 раз. Тербацил элюируют 60 мл этилацетата. Элюат упаривают на ротационном испарителе при температуре бани 55 °C досуха. Колбу смывают 1 мл этилацетата и 2 — 5 мкл вводят в испаритель хроматографа.

Отделение прометрина. Методика аналогична вышеприведенной для почвы.

Отделение трефлана. Оставшийся н-гексановый раствор высушивают, пропуская через безводный сульфат натрия, упаривают до 10 мл на ротационном испарителе при температуре бани 45 °C. Отгонную колбу охлаждают, добавляя 5 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и оставляют на 20 мин. В делительную воронку наливают 250 мл дистиллированной воды и 30 мл н-гексана. На воронку переносится содержимое колбы после выдержки. После охлаждения трефлан 5 раз экстрагируют н-гексаном из кислого раствора порциями по 30 мл. Экстракты объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре бани 45 °C. Остаток в колбе смывают 1 мл н-гексана и 2 — 5 мкл вводят в испаритель хроматографа. Хроматографируют с ТИД.

При хроматографировании с ДПР экстракты дополнительно очищают на колонке с оксидом алюминия. Для этого после сернокислотной обработки н-гексановый раствор сушат, пропуская через безводный сульфат натрия, и концентрируют до 5 мл на ротационном испарителе при температуре бани 45 °C. Остаток переносят на колонку с оксидом алюминия, промытую н-гексаном. После того как раствор полностью впитается в слой адсорбента, колбу промывают 5 мл н-гексана и переносят смыв на колонку.

Операцию проделывают 5 раз. Трефлан элюируют 100 мл н-гексана порциями по 10 мл. Первые 30 мл окрашенного в темный цвет элюата отбрасывают и, начиная с первой бесцветной капли, собирают остальные 70 мл. Элюат упаривают на ротационном испарителе до одной капли, остальное удаляют струей воздуха. Колбу смывают 1 мл н-гексана и 2 — 5 мкл вводят в хроматограф. Хроматографируют с ДПР.

Навеску эфирного масла мяты перечной (10 г) растворяют в 50 мл н-гексана, выдерживают 20 мин. и количественно переносят на делительную воронку.

Выделение тербацила. К н-гексановому раствору прибавляют 50 мл 1-процентного едкого натра и встряхивают 2 мин., отделяют нижний слой. Операцию повторяют еще 2 раза. Щелочные экстракты объединяют, подкисляют 1,5 — 2 мл концентрированной хлороводородной кислоты до pH 3 — 4, переносят в делительную воронку на 250 мл и трижды экстрагируют тербацил этилацетатом порциями по 30 мл. Экстракты объединяют, пропускают через безводный сульфат натрия и упаривают до 5 мл на ротационном испарителе при температуре бани не выше 50 °C. Остаток в колбе переносят на колонку с оксидом алюминия, промытую этилацетатом. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному выше для растений мяты.

Выделение прометрина. Ход анализа аналогичен описанному для почвы.

Выделение трефлана. Оставшийся н-гексановый раствор сушат, пропуская через безводный сульфат натрия, количественно переносят на делительную воронку, где трижды отмывают от эфирного масла 80-процентным этанолом порциями по 50 мл. Оставшийся гексановый слой сушат, пропуская через безводный сульфат натрия, упаривают досуха при температуре бани не выше 45 °C. Остаток смывают 1 мл н-гексана и 2 — 5 мкл раствора анализируют методом ГЖХ с ТИД. Для анализа с ДПР оставшийся после промывки 80-процентным этанолом гексановый раствор сушат и концентрируют до 60 мл на ротационном испарителе. Отгонную колбу охлаждают, добавляют 5 мл концентрированной серной кислоты, встряхивают и оставляют на 20 мин. В делительную воронку наливают 250 мл дистиллированной воды и 30 мл н-гексана и переносят содержимое колбы после выдержки. После охлаждения воронки трефлан реэкстрагируют н-гексаном (5 x 30 мл). Экстракты объединяют, высушивают, пропуская через сульфат натрия, и упаривают до 5 мл. Остаток переносят на колонку с оксидом алюминия, предварительно промытую н-гексаном. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному выше для растений мяты.

Условия хроматографического разделения. Хроматограф «Цвет-164» или аналогичный с ДПР, ТИД. Колонка стеклянная; спиральная. -12 Рабочая шкала электрометра: при работе с ТИД — 100 x 10 А; при -12

работе  с  ДПР - 20  x 10    А. Температура, °C: испарителя - 230;
колонки  -  190;  детектора - 220. Хроматографируемый объем 2 мкл.
Расход,  мл/мин.: газа-носителя на поддув ВК ДПР - 150; водорода -

18; воздуха — 400.

Остальные параметры хроматографирования, изменяющиеся в зависимости от препарата и типа детектора, представлены в таблице 170.

Таблица 170

УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ

Гербицид	Тип детектора	Размер колонки, мм	Расход газаносителя, мл/мин.	Минимально детектируемое количество, нг	Линейный динамический диапазон, нг	5% SE-30	5% XE-60	5% Stap
						время удерживания, мин.	время удерживания, мин.	время удерживания, мин.
Прометрин Тербацил Трефлан -«-»	ТИД ДПР ДПР ТИД	1000 x 3 1000 x 3 2000 x 3 1000 x 3	25 60 60 25	2,0 1,0 0,1 3,0	2 — 500 1 — 60 0,1 — 5 3 — 1000	3,9 4,1 6,1 1,0	5,5 7,7 7,7 2,2	3,8 12,5 — 2,2

Обработка результатов анализа. Количество препарата в анализируемой навеске (X, мг/кг) определяют по формуле:

                                HV
                                  1

X = ----, KAV 2

где:

H — высота пика препарата в анализируемой пробе, мм;

V — объем анализируемой пробы, мл; 1

V — объем инъектируемой пробы, мкл; 2

A — навеска, г;

K — калибровочный коэффициент, мм/нг.

Для расчета калибровочного коэффициента K, мм/нг, проводят хроматографирование ряда стандартных растворов и используют формулу:

                      H      H            H
                  1    1      2            n

K = — (---- + ---- + ... + ----),

                  n  C V    C V          C V
                      1 1    2 2          n n

где:

n — число введенных стандартных проб;

    H , H ...H  - высоты пиков стандартного раствора, мм;
     1   2    n
    C , C ...C  - концентрации стандартного раствора, мкг/мл;
     1   2    n
    V , V ...V  - объемы, вводимые в хроматограф, мкл.
     1   2    n

Содержание микроколичеств препарата в пробах вычисляют как среднее из трех параллельных определений.

---