--- title: "\"Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней\"" issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/vremennye-metodicheskie-ukazaniya-po-minselhoz-sssr-ministerstvo-5" --- ## "Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней" # "Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней" (утв. Минсельхозом СССР 16.04.1981) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 16 апреля 1981 года ## ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ГЕМОФИЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ 1. Общие положения. 1.1. Гемофилезная плевропневмония - инфекционная, контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, при хроническом - развитием очаговой гнойной некротизирующей пневмонии и фибринозным плевритом (см. [приложение 1](#p100056)). Возбудитель болезни - капсулообразующие, гемолитические штаммы Haemophilus pleuropneumoniae (H. parahaemolyticus). Это мелкая (0,3 - 0,4 x 0,4 - 0,5 мкм), грамотрицательная, неподвижная, не образующая спор коккобактерия, обладающая выраженным тропизмом к легочной ткани. Для роста на искусственных питательных средах нуждается в специфическом ростовом факторе - дифосфопиридиннуклеотиде (У-фактор), который содержится в крови, в тканях животных, дрожжевом экстракте и продуктах жизнедеятельности некоторых видов бактерий. 1.2. Диагноз на гемофилезную плевропневмонию ставят на основании анализа эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным учетом результатов бактериологического исследования. 1.3. Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют кусочки пораженных легких, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы. Кусочки легких вырезают на границе пораженной и здоровой тканей. Патологический материал помещают в стерильные банки и в термосе со льдом отправляют с нарочным в ветеринарную лабораторию. 2. Лабораторное исследование. 2.1. Исследование патологического материала складывается из микроскопии мазков-отпечатков, выделения чистой культуры возбудителя и ее идентификации. 2.1.1. Микроскопическое исследование. Присланные кусочки легких и лимфоузлов смачивают спиртом, обжигают поверхность над пламенем горелки и разрезают стерильным скальпелем. Свежим срезом делают 2 - 3 отпечатка на предметном стекле; мазки-отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем, окрашивают по Граму и на капсулу по методу Гинса и микроскопируют. В мазках-отпечатках возбудитель имеет вид мелких грамотрицательных коккобактерий и коротких палочек, окруженных капсулой. 2.2. Для выделения культуры возбудителя из легких и лимфатических узлов пастеровской пипеткой берут материал, наносят на предварительно подсушенный 5%-ный кровяной мясо-пептонный агар в чашках Петри и стерильным шпателем равномерно распределяют по всей поверхности среды. Чашки с посевами помещают на 30 - 40 мин в термостат при 37 - 38 °C крышкой вверх, после чего бактериологической петлей делают посев штрихом по диаметру чашки культуры негемолитического штамма кишечной палочки или белого стафилококка (бактерии-"кормилки"). Чашки с посевами помещают в термостат крышкой вниз и инкубируют при 37 - 38 °C в течение 24 ч. Культуры кишечной палочки или белого стафилококка, используемые в качестве бактерии-"кормилки", поддерживают путем пересевов на МПА или МПБ и хранят при 4 - 6 °C. На кровяном МПА возбудитель плевропневмонии образует мелкие (диаметр 0,1 - 0,2 мм), гладкие, выпуклые, круглые, с ровными краями, слизистой консистенции колонии, окруженные прозрачной зоной гемолиза. Колонии, как правило, вырастают в зоне 2 - 3 см около штриха культуры бактерии-"кормилки", но при использовании свежеприготовленного кровяного агара или обильном засеве тканевого материала рост возбудителя может наблюдаться по всей поверхности питательной среды. 2.2.1. При обнаружении в посевах характерного для возбудителя роста из 2 - 3 колоний, окруженных зоной гемолиза, делают мазки, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. В мазках из культур H. pleuropneumoniae имеет вид мелких грамотрицательных коккобактерий, расположенных одиночно или парами, редко в виде коротких цепочек. При наличии в мазках бактерий с характерной морфологией из указанных колоний делают посевы на МПБ, МПА, шоколадный агар в пробирках и МПА в чашках Петри, с последующим засевом "баккормилки". Посевы инкубируют при 37 - 38 °C в течение 24 ч. 2.2.2. После 24 ч инкубирования изучают рост культур на питательных средах. Культуры H. pleuropneumoniae не растут на МПА и МПБ, дают интенсивный рост на шоколадном агаре, а на МПА с "баккормилкой" образуют колонии только около штриха бактерии-"кормилки" (сателлитный рост). Суточную культуру, выросшую на шоколадном агаре, снимают бактериологической петлей и засевают на среду Заксе для определения уреазной активности. Посев инкубируют 30 - 40 мин при 37 - 38 °C. При окрашивании среды Заксе в малиновый цвет культуру признают уреазоположительной (приготовление среды Заксе см. [приложение 2](#p100069)). 2.3. Возбудителя плевропневмонии дифференцируют от сходных с ним по морфологии и некоторым культуральным свойствам Haemophilus parasuis, Corynebacterium pyogenes по уреазной и гемолитической активности, пользуясь [таблицей](#p100022): на с. 242.
Вид бактерийМорфология бактериальной клеткиРост на питательных средахГемолитические свойстваУреазная активность
МПАшоколадный МПАсателлитный рост на МПА с "баккормилкой"
H. pleuropneumoniaeГрамотрицательные коккобактерии и палочки-++++
H. parasuisГрамотрицательные зернистые палочки, нити-++--
C. pyogenesГрамположительные коккобактерии, но часто окрашиваются грамотрицательно-+/-+/-+-
Обозначения. (+) - признак положительный; (-) - признак отрицательный; (+/-) - признак варьирующий. К возбудителю плевропневмонии H. pleuropneumoniae относят культуры грамотрицательных гемолитических коккобактерий, обладающих уреазной активностью, растущих на шоколадном агаре, образующих сателлитные колонии на МПА с баккормилкой, но не растущих на МПБ и МПА без бактерии-"кормилки". 2.4. Лабораторный диагноз на гемофилезную плевропневмонию считают установленным при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для H. pleuropneumoniae. #### 2.5 Срок лабораторного исследования - 4 сут. Приложение 1 **ГЕМОФИЛЕЗНАЯ ПЛЕВРОПНЕВМОНИЯ СВИНЕЙ (СПРАВКА)** Эпизоотологические данные Источником инфекции являются больные свиньи, а также клинически здоровые животные - бактерионосители. Заражение происходит аэрогенным путем. Болезнь быстро распространяется в помещениях с высокой запыленностью воздуха, при скармливании животным сухих кормов мелкого помола. Распространение возбудителя возможно и механическим путем. При первичном заносе возбудителя в стадо могут заболевать свиньи всех возрастных групп, но чаще животные 3 - 5-месячного возраста. В последующем заболевают преимущественно поросята-отъемыши, а также животные, поступившие из благополучных хозяйств. Вспышки гемофилезной плевропневмонии наблюдаются в любое время года, по чаще зимой. На широту распространения, интенсивность энзоотии и тяжесть течения болезни существенно влияют микроклимат помещений, условия содержания и кормления животных. В зависимости от конкретных условий хозяйства и характера течения инфекции летальность колеблется от 9 до 100%. Клинические и патологоанатомические данные Болезнь протекает сверхостро, остро и хронически. При сверхостром течении у заболевших свиней температура тела повышается до 41,5 - 42 °C, появляются одышка, цианоз кожи пятачка и ушей, позднее - кожи нижней части тела. В агональной стадии отмечается истечение из носовых ходов кровянистой жидкости. Смерть наступает в течение 12 - 24 ч после появления первых признаков болезни. При остром течении преобладают симптомы пневмонии с лихорадкой постоянного типа. У больных наблюдают одышку, кашель, истечения из носа. Тяжесть болезни у отдельных животных сильно варьирует. Летальный исход может наступить в течение 2 - 5 дн. При хроническом течении периодически наблюдают лихорадку, кашель, животные отстают в росте и становятся анемичными. На вскрытии трупов свиней, павших при сверхостром течении болезни, обнаруживают одно- или двустороннее геморрагическое воспаление легких с выраженным отеком интерстициальной соединительной ткани. Пораженные участки плотные, вишнево-красного цвета, выступают над поверхностью окружающей нормальной ткани, при надавливании с поверхности разреза стекает кровянистая жидкость. В грудной полости содержится до 50 - 200 мл кровянистого экссудата с нитями фибрина. Бронхиальные и средостенные лимфатические узлы увеличены, сочные, гиперемированы. В носовой полости, трахее пенистая кровянистая жидкость, которая вытекает из ноздрей трупа. При остром течении выявляют лобулярную, реже лобарную геморрагическую пневмонию. Обнаруживают также диффузное или очаговое фибринозное воспаление легочной и костальной плевры с отложением фибрина желтоватого цвета на ее поверхности. При очаговом воспалении обычно поражается легочная плевра в зоне пневмонийных очагов. Регионарные лимфатические узлы увеличены, сочные, гиперемированы. При хроническом течении в одном или обоих легких находят инкапсулированные очаги размером 1x2 - 3x4 см, содержащие желтоватую некротизированную ткань. Часто наблюдается организация некротических масс за счет разроста соединительной ткани. В зоне поверхностных пневмонийных очагов - фибринозный плеврит в стадии организации. Регионарные лимфатические узлы слегка увеличены. Приложение 2 **ПРИГОТОВЛЕНИЕ СРЕДЫ ЗАКСЕ** Раствор А. Смешивают 2 мл 95°-ного этилового спирта и 4 мл дистиллированной воды, растворяют в этой жидкости 1,0 г мочевины. Раствор хранят без стерилизации. Раствор Б. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,1 г KH2PO4, 0,12 г K2HPO4 и 0,5 г NaCl, прибавляют 1 мл 2%-ного раствора фенолового красного. Стерилизуют при 120 °C в течение 30 мин. Оба раствора пригодны для употребления в течение 1 года при хранении в темноте при 8 - 10 °C. Перед использованием смешивают 1 часть [раствора А](#p100070) с 19 частями [раствора Б](#p100071), разливают по 0,1 мл в маленькие пробирки и засевают культурой. ---