Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней
Актуально на 11.11.2026.
Как цитировать: "Временные методические указания по лабораторной диагностике гемофилезной плевропневмонии свиней". https://bukva.ai/docs/vremennye-metodicheskie-ukazaniya-po-minselhoz-sssr-ministerstvo-5
(утв. Минсельхозом СССР 16.04.1981)
Примечание
Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 № 02-03-48/563).
Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 16 апреля 1981 года
ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ГЕМОФИЛЕЗНОЙ ПЛЕВРОПНЕВМОНИИ СВИНЕЙ
1.1. Гемофилезная плевропневмония — инфекционная, контагиозная болезнь свиней, характеризующаяся при остром течении геморрагическим воспалением легких и фибринозным плевритом, при хроническом — развитием очаговой гнойной некротизирующей пневмонии и фибринозным плевритом (см. приложение 1).
Возбудитель болезни — капсулообразующие, гемолитические штаммы Haemophilus pleuropneumoniae (H. parahaemolyticus). Это мелкая (0,3 — 0,4 x 0,4 — 0,5 мкм), грамотрицательная, неподвижная, не образующая спор коккобактерия, обладающая выраженным тропизмом к легочной ткани. Для роста на искусственных питательных средах нуждается в специфическом ростовом факторе — дифосфопиридиннуклеотиде (У-фактор), который содержится в крови, в тканях животных, дрожжевом экстракте и продуктах жизнедеятельности некоторых видов бактерий.
1.2. Диагноз на гемофилезную плевропневмонию ставят на основании анализа эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных с обязательным учетом результатов бактериологического исследования.
1.3. Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют кусочки пораженных легких, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы. Кусочки легких вырезают на границе пораженной и здоровой тканей.
Патологический материал помещают в стерильные банки и в термосе со льдом отправляют с нарочным в ветеринарную лабораторию.
2.1. Исследование патологического материала складывается из микроскопии мазков-отпечатков, выделения чистой культуры возбудителя и ее идентификации.
2.1.1. Микроскопическое исследование. Присланные кусочки легких и лимфоузлов смачивают спиртом, обжигают поверхность над пламенем горелки и разрезают стерильным скальпелем. Свежим срезом делают 2 — 3 отпечатка на предметном стекле; мазки-отпечатки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем, окрашивают по Граму и на капсулу по методу Гинса и микроскопируют.
В мазках-отпечатках возбудитель имеет вид мелких грамотрицательных коккобактерий и коротких палочек, окруженных капсулой.
2.2. Для выделения культуры возбудителя из легких и лимфатических узлов пастеровской пипеткой берут материал, наносят на предварительно подсушенный 5%-ный кровяной мясо-пептонный агар в чашках Петри и стерильным шпателем равномерно распределяют по всей поверхности среды. Чашки с посевами помещают на 30 — 40 мин в термостат при 37 — 38 °C крышкой вверх, после чего бактериологической петлей делают посев штрихом по диаметру чашки культуры негемолитического штамма кишечной палочки или белого стафилококка (бактерии-«кормилки»).
Чашки с посевами помещают в термостат крышкой вниз и инкубируют при 37 — 38 °C в течение 24 ч.
Культуры кишечной палочки или белого стафилококка, используемые в качестве бактерии-«кормилки», поддерживают путем пересевов на МПА или МПБ и хранят при 4 — 6 °C.
На кровяном МПА возбудитель плевропневмонии образует мелкие (диаметр 0,1 — 0,2 мм), гладкие, выпуклые, круглые, с ровными краями, слизистой консистенции колонии, окруженные прозрачной зоной гемолиза. Колонии, как правило, вырастают в зоне 2 — 3 см около штриха культуры бактерии-«кормилки», но при использовании свежеприготовленного кровяного агара или обильном засеве тканевого материала рост возбудителя может наблюдаться по всей поверхности питательной среды.
2.2.1. При обнаружении в посевах характерного для возбудителя роста из 2 — 3 колоний, окруженных зоной гемолиза, делают мазки, которые окрашивают по Граму и микроскопируют.
В мазках из культур H. pleuropneumoniae имеет вид мелких грамотрицательных коккобактерий, расположенных одиночно или парами, редко в виде коротких цепочек. При наличии в мазках бактерий с характерной морфологией из указанных колоний делают посевы на МПБ, МПА, шоколадный агар в пробирках и МПА в чашках Петри, с последующим засевом «баккормилки». Посевы инкубируют при 37 — 38 °C в течение 24 ч.
2.2.2. После 24 ч инкубирования изучают рост культур на питательных средах. Культуры H. pleuropneumoniae не растут на МПА и МПБ, дают интенсивный рост на шоколадном агаре, а на МПА с «баккормилкой» образуют колонии только около штриха бактерии-«кормилки» (сателлитный рост).
Суточную культуру, выросшую на шоколадном агаре, снимают бактериологической петлей и засевают на среду Заксе для определения уреазной активности. Посев инкубируют 30 — 40 мин при 37 — 38 °C. При окрашивании среды Заксе в малиновый цвет культуру признают уреазоположительной (приготовление среды Заксе см. приложение 2).
2.3. Возбудителя плевропневмонии дифференцируют от сходных с ним по морфологии и некоторым культуральным свойствам Haemophilus parasuis, Corynebacterium pyogenes по уреазной и гемолитической активности, пользуясь таблицей: на с. 242.
Обозначения. (+) — признак положительный; (-) — признак отрицательный; (+/-) — признак варьирующий.
К возбудителю плевропневмонии H. pleuropneumoniae относят культуры грамотрицательных гемолитических коккобактерий, обладающих уреазной активностью, растущих на шоколадном агаре, образующих сателлитные колонии на МПА с баккормилкой, но не растущих на МПБ и МПА без бактерии-«кормилки».
2.4. Лабораторный диагноз на гемофилезную плевропневмонию считают установленным при выделении из патологического материала культуры со свойствами, характерными для H. pleuropneumoniae.
2.5 Срок лабораторного исследования — 4 сут.
ГЕМОФИЛЕЗНАЯ ПЛЕВРОПНЕВМОНИЯ СВИНЕЙ (СПРАВКА)
Источником инфекции являются больные свиньи, а также клинически здоровые животные — бактерионосители. Заражение происходит аэрогенным путем. Болезнь быстро распространяется в помещениях с высокой запыленностью воздуха, при скармливании животным сухих кормов мелкого помола. Распространение возбудителя возможно и механическим путем.
При первичном заносе возбудителя в стадо могут заболевать свиньи всех возрастных групп, но чаще животные 3 — 5-месячного возраста. В последующем заболевают преимущественно поросята-отъемыши, а также животные, поступившие из благополучных хозяйств.
Вспышки гемофилезной плевропневмонии наблюдаются в любое время года, по чаще зимой. На широту распространения, интенсивность энзоотии и тяжесть течения болезни существенно влияют микроклимат помещений, условия содержания и кормления животных. В зависимости от конкретных условий хозяйства и характера течения инфекции летальность колеблется от 9 до 100%.
Клинические и патологоанатомические данные
Болезнь протекает сверхостро, остро и хронически. При сверхостром течении у заболевших свиней температура тела повышается до 41,5 — 42 °C, появляются одышка, цианоз кожи пятачка и ушей, позднее — кожи нижней части тела. В агональной стадии отмечается истечение из носовых ходов кровянистой жидкости. Смерть наступает в течение 12 — 24 ч после появления первых признаков болезни.
При остром течении преобладают симптомы пневмонии с лихорадкой постоянного типа. У больных наблюдают одышку, кашель, истечения из носа. Тяжесть болезни у отдельных животных сильно варьирует. Летальный исход может наступить в течение 2 — 5 дн.
При хроническом течении периодически наблюдают лихорадку, кашель, животные отстают в росте и становятся анемичными.
На вскрытии трупов свиней, павших при сверхостром течении болезни, обнаруживают одно- или двустороннее геморрагическое воспаление легких с выраженным отеком интерстициальной соединительной ткани. Пораженные участки плотные, вишнево-красного цвета, выступают над поверхностью окружающей нормальной ткани, при надавливании с поверхности разреза стекает кровянистая жидкость. В грудной полости содержится до 50 — 200 мл кровянистого экссудата с нитями фибрина. Бронхиальные и средостенные лимфатические узлы увеличены, сочные, гиперемированы. В носовой полости, трахее пенистая кровянистая жидкость, которая вытекает из ноздрей трупа.
При остром течении выявляют лобулярную, реже лобарную геморрагическую пневмонию. Обнаруживают также диффузное или очаговое фибринозное воспаление легочной и костальной плевры с отложением фибрина желтоватого цвета на ее поверхности. При очаговом воспалении обычно поражается легочная плевра в зоне пневмонийных очагов. Регионарные лимфатические узлы увеличены, сочные, гиперемированы.
При хроническом течении в одном или обоих легких находят инкапсулированные очаги размером 1x2 — 3x4 см, содержащие желтоватую некротизированную ткань. Часто наблюдается организация некротических масс за счет разроста соединительной ткани. В зоне поверхностных пневмонийных очагов — фибринозный плеврит в стадии организации. Регионарные лимфатические узлы слегка увеличены.
Раствор А. Смешивают 2 мл 95°-ного этилового спирта и 4 мл дистиллированной воды, растворяют в этой жидкости 1,0 г мочевины. Раствор хранят без стерилизации.
Раствор Б. В 100 мл дистиллированной воды растворяют 0,1 г KH2PO4, 0,12 г K2HPO4 и 0,5 г NaCl, прибавляют 1 мл 2%-ного раствора фенолового красного. Стерилизуют при 120 °C в течение 30 мин.
Оба раствора пригодны для употребления в течение 1 года при хранении в темноте при 8 — 10 °C.
Перед использованием смешивают 1 часть раствора А с 19 частями раствора Б, разливают по 0,1 мл в маленькие пробирки и засевают культурой.