--- title: "\"Временные методические указания по лабораторной диагностике инфекционной анемии лошадей\"" issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/vremennye-metodicheskie-ukazaniya-po-minselhoz-sssr-ministerstvo-2" --- ## "Временные методические указания по лабораторной диагностике инфекционной анемии лошадей" # "Временные методические указания по лабораторной диагностике инфекционной анемии лошадей" (утв. Минсельхозом СССР 25.03.1983) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). Утверждены 25 марта 1983 года ## ВРЕМЕННЫЕ МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ ЛОШАДЕЙ 1. Общие положения. 1.1. Инфекционная анемия лошадей - вирусная болезнь однокопытных животных, характеризующаяся рецидивирующей лихорадкой, анемией, а также бессимптомным вирусоносительством. 1.2. Лабораторный диагноз на инфекционную анемию устанавливают на основании результатов серологических (РДП), гематологических и патоморфологических исследований. В сомнительных случаях для проверки особо ценных лошадей ставят биологическую пробу. При исследовании сывороток лошадей-продуцентов ставят групповую биопробу. 2. Взятие материала. 2.1. Для исследования в ветеринарную лабораторию доставляют: сыворотку крови лошадей (5 - 6 мл) для серологического исследования; кровь (10 - 12 мл), стабилизированную 20%-ным раствором лимоннокислого натрия, для гематологического исследования (кровь берут до поения и кормления животного); кусочки печени, селезенки, почек, сердца, легких и лимфатических узлов, взятых от павших или убитых с диагностической целью животных для гистологического исследования. 2.2. Сыворотку крови или дефибринированную кровь от подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей для постановки биологической пробы берут, как указано в [п. 6](#p100039). 3. Серологическое исследование. 3.1. Серологический метод диагностики инфекционной анемии основан на обнаружении антител к вирусу этой болезни в сыворотке крови подозрительных по заболеванию лошадей путем постановки реакции диффузионной преципитации (РДП). 3.2. Исследование проводят в соответствии с "Методикой постановки реакции диффузионной преципитации (РДП) для серологической диагностики инфекционной анемии лошадей", рекомендованной Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 мая 1977 г. 3.3. Следует иметь в виду, что при остром течении болезни и коротком инкубационном периоде даже при наличии клинических симптомов, характерных для инфекционной анемии, у исследуемого животного могут быть получены отрицательные результаты серологического исследования (антитела в диагностическом титре накапливаются через 2 - 6 нед после заражения). В связи с этим в таких случаях исследуют кровь повторно через 10 - 15 дн. Необходимо также учитывать, что в случаях длительных ремиссий у хронически больных лошадей или латентного течения болезни положительная РДП может быть и при отсутствии клинических признаков и гематологических показателей. 4. Гематологические исследования. 4.1. Гематологические исследования включают определение количества эритроцитов в 1 мм3 крови, количества гемоглобина и скорости оседания эритроцитов (СОЭ). 4.2. Количество эритроцитов подсчитывают в камере Горяева. В пробирку с 4 мл 3%-ного раствора хлористого натрия вносят 0,02 мл крови. Форменные элементы считают в 80 маленьких или 5 больших квадратах, полученный результат умножают на 10 000. Подсчет эритроцитов можно провести и в электронном счетчике. 4.3. Гемоглобин определяют по общепринятому методу гемометром Сали и полученный результат выражают в г%. 4.4. Для определения СОЭ в эритросидиометр до отметки "0" наливают стабилизированную кровь и каждые 15 мин учитывают в течение часа, а затем через 24 ч отмечают уровень оседания эритроцитов. Для больных лошадей характерна повышенная СОЭ, особенно в первые 15 мин (60 - 70 делений). СОЭ определяют при комнатной температуре. #### 4.5 Сравнительные показатели крови здоровых и больных лошадей следующие: | Вид исследований | Показатели крови здоровых лошадей при нормальной упитанности | Показатели крови лошадей, больных инфекционной анемией | | --- | --- | --- | | Эритроциты, млн/мм3 | От 5 до 9 | 4,5 и ниже | | Гемоглобин, г% | 7,6 | 5,0 и ниже | | СОЭ (делений за 1 ч) | 45 - 60 | 66 и более | 4.6. Следует иметь в виду, что в начале заболевания при первом подъеме температуры резкие отклонения от нормы количества эритроцитов и процента гемоглобина, как правило, отсутствуют. У хронически больных инфекционной анемией животных эти показатели восстанавливаются до нормы, а СОЭ остается повышенной. 4.7. У лошадей с повышенной температурой тела следует исключить наличие нутталий, пироплазм. 5. Методика гистологического исследования. 5.1. Для гистологического исследования готовят срезы и окрашивают их гематоксилин-эозином общепринятым методом. Срезы для исследования на гемосидерин окрашивают по Перлсу. Для этого срезы из чашки с дистиллированной водой переносят в смесь 2%-ного водного раствора желтой кровяной соли и 1%-ного водного раствора соляной кислоты (в пропорции на 2 капли первого раствора 1 мл второго). В этой смеси срезы выдерживают до появления синей окраски (15 - 20 мин), после чего промывают их в течение 10 мин дистиллированной водой, затем докрашивают 10 мин 1%-ным раствором квасцового кармина. Далее проводят через спирты, карбол-ксилол и заключают в бальзам. Зернышки гемосидерина окрашиваются в голубой или зеленоватый цвет. При окрашивании срезов следует пользоваться только дистиллированной водой и стеклянными иглами (исключают железосодержащие предметы). 6. Постановка биологической пробы. 6.1. Для биологической пробы отбирают двух жеребят в возрасте 6 - 12 мес (допускается использование более взрослых животных) из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням. Перед постановкой биопробы жеребят подвергают четырехкратным клинико-гематологическим и серологическим исследованиям с интервалом в 7 дн. 6.2. Для заражения жеребят берут стерильно от наиболее подозрительных по заболеванию инфекционной анемией лошадей кровь в количестве по 300 - 500 мл от каждой, лучше во время подъема температуры. 6.3. Жеребят заражают сывороткой крови или плазмой. При необходимости их фильтруют через фильтр Зейтца, затем фильтрат проверяют на стерильность и безвредность путем высева на питательные среды (МПБ, МПА, МППБ) и инъекции трем белым мышам подкожно в дозе 1 мл. Если через 3 дня рост микрофлоры на питательных средах отсутствует и белые мыши остаются живыми, сыворотку крови вводят двум жеребятам подкожно или внутривенно в дозе 100 - 200 мл каждому. Дефибринированную кровь вводят только подкожно в той же дозе. 6.4. Групповую биопробу проводят путем заражения двух жеребят смесью сыворотки (плазмы) крови 10 - 15 лошадей-продуцентов. Смесь вводят подкожно в количестве 100 - 200 мл каждому жеребенку. 6.5. Наблюдения за зараженными животными ведут в течение 90 дн., при этом каждые 10 - 15 дн. проводят гематологические и серологические исследования. 6.6. Биологическую пробу считают положительной при наличии у зараженных жеребят характерных клинических симптомов заболевания - рецидивирующей лихорадки, слабости, бледности или желтушности слизистых оболочек, исхудания и при получении положительных результатов серологических, гематологических исследований. 6.7. Жеребят, давших сомнительные результаты клинико-гематологических и серологических исследований, подвергают убою и исследуют патологоанатомически и гистологически. При положительном результате обнаруживают следующие патологоанатомические изменения: серозно-геморрагическую инфильтрацию подкожной и межмышечной клетчатки, гиперемию и отек лимфоузлов, зернистую или жировую дистрофию скелетной мускулатуры, миокарда, почек, множественные кровоизлияния на слизистых, серозных оболочках и под капсулой органов. Селезенка сильно увеличена вследствие кровенаполнения пульпы. Печень застойно гиперемирована, увеличена, с выраженной дольчатостью на разрезе, паренхима имеет мускатный рисунок. Гистологические изменения соответствуют описанным в [приложении](#p100055). 6.8. Биопробу считают отрицательной при отсутствии у подопытных жеребят симптомов болезни и получении отрицательных результатов серологических и гематологических исследований. 7. Сроки исследований: серологического - 7 дн., гематологического - 2, гистологического - 14, биологического - 90 дн. Приложение **ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ ИНФЕКЦИОННОЙ АНЕМИИ** Характер и степень патогистологических изменений зависит от стадии болезни, количества рецидивов, ремиссий и их продолжительности. При острой форме болезни обнаруживают: в печени - пролифераты эндотелия синусов и купферовских клеток со скоплением в синусах крупных гистиоцитов, содержащих гемосидерин, гистиоцитарно-лимфоидные пролифераты в междольковой соединительной ткани. Печеночные клетки в состоянии жировой или зернистой дистрофии; в селезенке - пульпа инфарцирована эритроцитами и обеднена лимфоцитами, количество гемосидерина резко снижено или, наоборот, кровенаполнение слабое, а фолликулы гиперплазированы, количество гемосидерина в норме или несколько повышено; в почках и сердце - гиперемия, кровоизлияния, серозный отек интерстиция, слабые пролифераты гистиоцитарных и лимфоидных клеток, жировая или зернистая дистрофия, иногда небольшие отложения гемосидерина в эндотелиальных клетках и гистиоцитах; лимфатические узлы гиперемированы, с кровоизлияниями; в легких - кровоизлияния под плевру. Хроническая форма болезни характеризуется следующими изменениями: в печени - диффузные пролифераты лимфоидных клеток и в меньшей степени мелких гистиоцитов, содержащих гемосидерин. У животных, павших в период тяжелого обострения, в печени находят скопления крупных гистиоцитов, нагруженных гемосидерином; в селезенке - диффузная гиперплазия и резкое уменьшение количества гемосидерина или его полное исчезновение. Кроме того, у лошадей, павших во время приступа, в селезенке отмечают повышенное кровенаполнение синусов и очаговое инфарцирование пульпы эритроцитами; в почках - продуктивный гломерулонефрит, сосудистые клубочки увеличены и обогащены ядрами. Между канальцами и вокруг сосудов - скопления лимфоидных клеток. У животных, павших во время тяжелого лихорадочного приступа, в полости капсулы сосудистых клубочков находят серозный, а иногда серозно-геморрагический экссудат, гемосидерин находят в клубочках и гистиоцитах; в сердце - очаговый или диффузный интерстициальный миокардит с преимущественным поражением предсердий (особенно левого); в лимфатических узлах - лимфоцитоз и незначительное отложение гемосидерина; в легких - пролифераты лимфоидных клеток, а также гистиоцитов, нагруженных гемосидерином. В поздних стадиях болезни в почках отмечают цирроз и склероз сосудистых клубочков. В сердце - миофиброз и склероз миокарда и эндокарда. В период ремиссий изменения претерпевают обратное развитие или могут отсутствовать, за исключением стойких необратимых процессов: лимфоцитоз паренхимы селезенки, хронический гломерулонефрит, склерозы эндо- и миокарда. ---