Временное наставление по применению набора антигенов и сывороток для выявления специфических антител и антигенов вируса инфекционной бурсальной болезни в реакции диффузионной преципитации «Биотест-РДП»

Министерство сельского хозяйства Российской ФедерацииДействующий акт

Актуально на 09.11.2026.

Как цитировать: "Временное наставление по применению набора антигенов и сывороток для выявления специфических антител и антигенов вируса инфекционной бурсальной болезни в реакции диффузионной преципитации "Биотест-РДП". https://bukva.ai/docs/vremennoe-nastavlenie-po-primeneniyu-nabora

(утв. Минсельхозом России 01.01.2001)

Утверждено Минсельхозом России 1 января 2001 года

ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАБОРА АНТИГЕНОВ И СЫВОРОТОК ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ И АНТИГЕНОВ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ В РЕАКЦИИ ДИФФУЗИОННОЙ ПРЕЦИПИТАЦИИ «БИОТЕСТ-РДП»

1. Общие положения.

1.1. Диагностический набор «Биотест-РДП» предназначен для выявления антигена вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) в патологическом материале от больной и павшей птицы и антител к вирусу ИББ в сыворотках крови птиц в реакции диффузной преципитации (РДП).

1.2. Принцип метода РДП заключается в том, что антигены и антитела, диффундируя радиально из лунок в толще агара, встречаются и образуют преципитат, который с течением времени проявляется в виде резкой линии преципитации. Линии преципитации образуются именно в том месте, где антиген и антитело находятся в оптимальных соотношениях. При этом число линий преципитации соответствует числу пар антиген — антитело в исследуемой системе.

1.3 Набор включает в себя следующие компоненты:

рис. 1 положительный антиген вируса инфекционной бурсальной болезни в жидкой или лиофилизированной форме в объеме 1,0 см3 — 3 ампулы (флакона);

рис. 2 отрицательный антиген в жидкой или лиофилизированной форме в объеме 1,0 см3 — 1 ампула (флакон);

рис. 3 положительная сыворотка крови кур к вирусу инфекционной бурсальной болезни в лиофилизированной форме в объеме 1,0 см3 — 1 ампула;

рис. 4 отрицательная сыворотка крови кур к вирусу инфекционной бурсальной болезни в лиофилизированной форме в объеме 1,0 см3 — 1 ампула;

рис. 5 агаро-солевая смесь весом 9,0 г — 1 флакон.

1.4 Диагностические компоненты представляют собой:

рис. 6 положительный антиген — суспензию от светло-коричневого до темно-коричневого цвета в случае жидкой формы и пористую массу тех же цветов в случае лиофилизированной формы;

рис. 7 отрицательный антиген — суспензию от серо-белого до светло-коричневого цвета в случае жидкой формы и пористую массу тех же цветов в случае лиофилизированной формы;

рис. 8 положительная и отрицательная сыворотки — пористую массу бело-кремового и светло-розового цвета.

1.5. На ампулы (флаконы) наклеивают этикетки с указанием названия препарата, его объем в см3, титра (для положительного антигена), рабочего разведения (для положительной сыворотки), номера серии, номера контроля, даты изготовления.

На коробку с номером наклеивают этикетку, на которой указывают наименование и товарный знак предприятия, название компонентов, входящих в набор, количество ампул (флаконов) каждого компонента в коробке, объем препарата в одной ампуле (флаконе), номер серии, номер контроля, дату изготовления (месяц, год), срок годности, условия хранения, обозначение ТУ. В каждую коробку вкладывается наставление по применению набора.

1.6. Набор рассчитан на исследование не менее 360 проб сыворотки крови кур.

1.7. Срок годности набора — 24 мес со дня изготовления при условии хранения в сухом темном месте при температуре 4 ... 8 °C.

1.8. Браковка. Ампулы или флаконы без этикеток, с трещинами, с измененным цветом, консистенцией бракуют и обезвреживают кипячением в течение 30 мин.

2. Подготовка материала к исследованию.

2.1. В качестве патологического материала для обнаружения в нем вирусного антигена используют фабрициевы сумки (5 ... 10 проб) от больных цыплят 25 ... 50-суточного возраста (с интервалом в 3 ... 4 дня) или от павших цыплят с патологическими признаками заболевания ИББ. Материал транспортируют в термосе со льдом.

2.2. Отобранный патологический материал тщательно растирают в ступке с кварцевым песком или в гомогенизаторе и готовят гомогенат в соотношении 1:1 на стерильном физиологическом растворе (pH 7,2 ... 7,4) с антибиотиками. После трехкратного замораживания и оттаивания гомогенат центрифугируют при 3000 ... 5000 оборотов в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают и используют для исследования в РДП.

2.3. С целью выявления специфических антител к вирусу ИББ для исследования в РДП используют сыворотку крови птиц в возрасте от 30 сут и старше, а также в возрасте 1 ... 10 сут для определения наличия материнских антител.

3. Порядок применения набора.

3.1. Перед употреблением содержимое каждой ампулы с лиофилизированными препаратами растворяют в 1,0 см3 дистиллированной воды. Положительную сыворотку разводят согласно рабочему разведению, указанному на этикетке.

Антигены (положительный и отрицательный) в жидкой форме (при наличии их в наборе) не нуждаются в предварительной подготовке к работе и готовы к использованию непосредственно после вскрытия ампул (флаконов).

Диагностические препараты, приведенные в рабочее состояние, хранят в стерильных пробирках или флаконах под резиновыми пробками при температуре 2 ... 4 °C не более 30 сут.

3.2. Для приготовления агарового геля в колбу из термостойкого стекла наливают 100 см3 дистиллированной воды и переносят туда содержимое флакона с агаро-солевой смесью. Колбу выдерживают на кипящей водяной бане до полного расплавления и просветления агара и разливают в стерильные чашки Петри по 15 ... 20 см3 агара. После застывания агара в нем вырезают лунки с помощью металлического пробойника (штампа). Агаровые пробки удаляют иглой, пинцетом или канюлей, соединенной с вакуумной установкой.

3.3. Для исследования патматериала в центральную лунку вносят положительную сыворотку в рабочем разведении, в две периферические, диаметрально противоположные лунки — полученную по п. 2.2 надосадочную жидкость в объеме 0,05 см3.

Для каждой пробы антигена используют отдельную пастеровскую пипетку или новый наконечник автоматической пипетки.

3.3.1. С целью выявления антител в сыворотке в центральную лунку вносят специфический антиген, а в периферические — контрольные и исследуемые сыворотки в объеме 0,05 см3. Каждую сыворотку берут отдельной пастеровской пипеткой или новым наконечником автоматической пипетки.

3.4. После заполнения лунок чашки Петри помещают во влажную камеру и термостатируют при температуре (37,0 +/- 0,5) °C.

3.4.1. Учет результатов РДП проводят через 24 и 48 ч после постановки реакции. Чашки просматривают на темном фоне в направленном луче света.

Реакцию учитывают только при наличии линий преципитации между сывороткой и антигеном в контроле.

За положительный результат при выявлении антигена принимают образование 1 ... 2 линий преципитации между лунками с исследуемым материалом и специфической сывороткой, а при выявлении антител — наличие линий преципитации между лунками с исследуемой сывороткой и положительным антигеном.

При оценке напряженности поствакцинального иммунитета птицу считают иммунной к вирусу ИББ при наличии 50 и более процентов положительных проб сывороток.

4. Порядок предъявления рекламаций.

4.1. При выявлении неактивности компонентов набора применение его прекращают и, в соответствии с указанием Главного управления ветеринарии № 22-77/28 от 8 мая 1992 г. «О порядке предъявления рекламаций на ветеринарные препараты отечественного производства и закупаемые по импорту», сообщают на предприятие-изготовитель и во Всероссийский государственный научно-исследовательский институт контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов (ВГНКИ, 123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, 5). Одновременно в адрес изготовителя направляют невскрытый набор этой серии.

Временное наставление разработано сотрудниками ООО «Кронвет».