---
title: "\"МУК 4.2.1774-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания\""
number: "МУК 4.2.1774-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1774-03"
---

## "МУК 4.2.1774-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания"

# "МУК 4.2.1774-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания"

(утв. Минздравом России 24.10.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 декабря 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

24 октября 2003 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК**
**МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM CANESCENS F-832 ВКПМ - ПРОДУЦЕНТА**
**КСИЛАНАЗЫ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.2.1774-03**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

1 декабря 2003 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Разработаны Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И. Шеиной).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 24 октября 2003 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены в действие с 1 декабря 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Общие положения и область применения


<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха.
<a id="p100012"></a>Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ".
<a id="p100013"></a>Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.


## 2. <a id="p100014"></a>Характеристика штамма-продуцента ксиланазы


<a id="p100015"></a>Микроорганизм Penicillium canescens F-832 является продуцентом фермента ксиланазы. Культура образует цепочки спор, обычно прямые с гладкой оболочкой. Штамм растет на различных агаризованных и жидких средах. На сусло-агаре на 3 сутки роста при температуре 30 °С образует округлые радиально-складчатые морщинистые колонии с кремовым или сероватым налетом, диаметром 2 - 3 мм. На 4 - 5 сутки инкубации размеры колонии достигают 5 - 7 мм, конфигурация и складчатость колоний не изменяется, образуется воздушный мицелий со спорами бежевато-серого цвета, подошва колоний оранжево-коричневая.
<a id="p100016"></a>Штамм устойчив практически ко всем широко известным антибиотикам.
<a id="p100017"></a>ПДК штамма в атмосферном воздухе 200 кл./куб. м, пометка А.


## 3. <a id="p100018"></a>Пределы измерений


<a id="p100019"></a>Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 10 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95.


## 4. <a id="p100020"></a>Метод измерений


<a id="p100021"></a>Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента ксиланазы на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.
<a id="p100022"></a>Косвенный метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток на поверхность плотной питательной селективной среды и подсчете выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма, как результат продукции ксиланазы на среде с окрашенной целлюлозой.


## 5. <a id="p100023"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы


<a id="p100024"></a>При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.


#### <a id="p100025"></a>5.1 Средства измерений,

<div align="center">

вспомогательные устройства, материалы

</div>


<a id="p100026"></a>Прибор для бактериологического анализа воздуха,     ТУ 64-12791-77
модель 818 (щелевой прибор Кротова)
<a id="p100027"></a>Термостаты электрические суховоздушные
или водяные
<a id="p100028"></a>Автоклав электрический ГОСТ 9586-75
<a id="p100029"></a>Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
<a id="p100030"></a>Холодильник бытовой
<a id="p100031"></a>Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200
<a id="p100032"></a>Микроскоп биологический с иммерсионной
системой типа "Биолам" Л-211
<a id="p100033"></a>Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83
<a id="p100034"></a>Чашки Петри бактериологические плоскодонные
стеклянные диаметром 100 мм
<a id="p100035"></a>Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл      ГОСТ 10515-75
<a id="p100036"></a>Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75
<a id="p100037"></a>Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74
<a id="p100038"></a>Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74
<a id="p100039"></a>Секундомер                                          ГОСТ 9586-75
<a id="p100040"></a>Барометр                                            ГОСТ 24696-79
<a id="p100041"></a>Марля медицинская ГОСТ 9412-77
<a id="p100042"></a>Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81


#### <a id="p100043"></a>5.2 Реактивы, растворы


<a id="p100044"></a>Антибиотики: группы пенициллина,

<div align="center">

тетрациклина, цефалоспорина и др.,<br>
нистатин или амфотерицин.<br>
<a id="p100045"></a>Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67)

</div>

<a id="p100046"></a>Среда для штамма-продуцента:
агаризованное пивное сусло 5 - 6 °Б
для штамма-продуцента (агар - 1,8%,
рН 5,9 - 6,1, режим стерилизации
1,1 - 1,2 атм. в течение 30 мин.)
<a id="p100047"></a>Бенгальский розовый
<a id="p100048"></a>Диметилсульфоксид
<a id="p100049"></a>Селективная среда для штамма-продуцента,
состав среды: КН РО  - 1 г; МgSО  7Н О - 0,5 г;
                2  4            4   2
(NН ) SО  - 0,7 г; целлюлоза порошковая
   4 2  4
в пересчете на сухое вещество - 0,9 г;
лактоза - 0,3 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г;
агар - 18 г; вода дистиллированная - до 1000 мл
<a id="p100050"></a>Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67)


## 6. <a id="p100051"></a>Требования безопасности


<a id="p100052"></a>При выполнении измерений концентрации клеток продуцента ксиланазы в атмосферном воздухе населенных мест соблюдают следующие требования:
<a id="p100053"></a>6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100054"></a>6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
<a id="p100055"></a>6.3. "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).
<a id="p100056"></a>6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.


## 7. <a id="p100057"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100058"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.


## 8. <a id="p100059"></a>Условия измерений


<a id="p100060"></a>Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5 °С), атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.


## 9. <a id="p100061"></a>Проведение измерения



#### <a id="p100062"></a>9.1 Условия отбора проб воздуха


<a id="p100063"></a>Для определения продуцента ксиланазы воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (5 - 20 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента.
<a id="p100064"></a>Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.


#### <a id="p100065"></a>9.2 Выполнение анализа


<a id="p100066"></a>Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 5 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
<a id="p100067"></a>Сусло-агар расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор одного из антибиотиков из расчета 50 мкл на 1 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры) и нистатина (10 мкг/мл для подавления грибковой флоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 - 15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
<a id="p100068"></a>При выполнении анализа воздуха косвенным методом селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметилсульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках.
<a id="p100069"></a>После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 30 °С. Через 72 часа производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.


## 10. <a id="p100070"></a>Вычисление результатов измерения


<a id="p100071"></a>Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле:

                           N х 1000
<a id="p100072"></a>                       Х = --------, кл./куб. м,
                              V

<a id="p100073"></a>где:
<a id="p100074"></a>Х - концентрация клеток продуцента в воздухе;
<a id="p100075"></a>N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
<a id="p100076"></a>1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;

<div align="center">

<a id="p100077"></a>V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

</div>



## 11. <a id="p100078"></a>Оформление результатов измерений


<div align="center">

<a id="p100079"></a>Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

<a id="p100080"></a>Протокол N<br>
количественного микробиологического анализа штамма

</div>

Penicillium canescens F-832 ВКПМ - продуцента ксиланазы
в атмосферном воздухе населенных мест

<a id="p100081"></a>    Дата проведения анализа __________________________________
<a id="p100082"></a>    Место отбора пробы _______________________________________
<a id="p100083"></a>    Название лаборатории _____________________________________

<div align="center">

<a id="p100084"></a>    Юридический адрес организации ____________________________

</div>


<a id="p100085"></a>Результаты микробиологического анализа


| Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м |
| --- | --- | --- |


<a id="p100087"></a>Ответственный исполнитель

<div align="center">

<a id="p100088"></a>Научный руководитель

</div>



## <a id="p100089"></a>Список литературы


1. <a id="p100090"></a>Руководство по контролю загрязнения атмосферы: [РД 52.04.186-96](https://bukva.ai/docs/rukovodstvo-rd-52-04-186-89). М., 1991. 693 с.
2. <a id="p100091"></a>[ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329). ГСИ "Методики выполнения измерений".
3. <a id="p100092"></a>ГОСТ 17.2.4.02-81 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ". М.: Изд-во стандартов, 1981. 3 с.



<a id="p100093"></a>

---