---
title: "\"МУК 4.2.1767-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания\""
number: "МУК 4.2.1767-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1767-03"
---

## "МУК 4.2.1767-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания"

# "МУК 4.2.1767-03. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест. Методические указания"

(утв. Минздравом России 24.10.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 декабря 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
24 октября 2003 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК**
**ASPERGILLUS AWAMORI ВНИИГЕНЕТИКА 120/177 - ПРОДУЦЕНТА**
**ГЛЮКОАМИЛАЗЫ В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.2.1767-03**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 декабря 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Российским государственным медицинским университетом (к.б.н. Н.И. Шеиной).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 24 октября 2003 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены в действие с 1 декабря 2003 г.
4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Общие положения и область применения


<a id="p100011"></a>Настоящие Методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 - продуцента глюкоамилазы в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 куб. м воздуха.
<a id="p100012"></a>Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 17.2.4.02-81 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений".
<a id="p100013"></a>Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.
<a id="p100014"></a>Методические указания одобрены и рекомендованы секцией "Гигиенические аспекты биотехнологии и микробного загрязнения окружающей среды" Проблемной комиссии "Научные основы гигиены окружающей среды".


## 2. <a id="p100015"></a>Биологическая характеристика Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177 и его гигиенический норматив


<a id="p100016"></a>На 5 день развития на сусло-агаре штамм образует крупные ровные круглые колонии, средний диаметр которых составляет 0,5 - 1,0 см, а максимальный - 1,5 - 3,0 см. Край колоний ровный. Колонии гомогенные, гладкие, плоские.
<a id="p100017"></a>При температуре 38 - 42 °С штамм-продуцент появляется на сусло-агаре в виде маленьких белых колоний уже на 1 - 2 дни. На 3 день в среду выделяется оранжево-желтый пигмент, процесс спорообразования идет интенсивнее. Образование конидиеносцев с конидиями придает колониям глубокий интенсивно-серый цвет. Колонии становятся опушенными и приподнимаются над средой.

<a id="p100018"></a>Систематическое положение микроорганизма

<a id="p100019"></a>    Класс          Fungi imperfecti
<a id="p100020"></a>    Порядок        Hyphomycetales
<a id="p100021"></a>    Семейство      Mucedinaceae
<a id="p100022"></a>    Секция         Monoverticillata
<a id="p100023"></a>    Род            Aspergillus
<a id="p100024"></a>    Вид            awamori
<a id="p100025"></a>    Штамм          ВНИИгенетика 120/177

<a id="p100026"></a>Штамм Aspergillus awamori 120/177 получен во ВНИИгенетика как мутант из Asp. awamori С529Д 466 и депонирован в ЦМПМ института. Штамм является продуцентом глюкоамилазы.
<a id="p100027"></a>Штамм-продуцент растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 27 - 30 °С, рН среды - 5,0 - 6,0, культивирование 7 суток. Для размножения используется агаризованная среда Чапека, сусло-агар 5 - 6 °Б, картофельно-сахарозный агар.
<a id="p100028"></a>Предельно допустимая концентрация (ПДК) в атмосферном воздухе населенных мест - 200 кл./куб. м, пометка А.


## 3. <a id="p100029"></a>Пределы измерений


<a id="p100030"></a>Методика обеспечивает выполнения измерений количества клеток плесневого гриба в атмосферном воздухе населенных мест в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95.


## 4. <a id="p100031"></a>Метод измерений


<a id="p100032"></a>Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность среды сусло-агар и подсчета выросших колоний по типичным культурально-морфологическим признакам и яркому оранжево-желтому окрашиванию субстрата на 3 сутки.


## 5. <a id="p100033"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы


<a id="p100034"></a>При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.


#### <a id="p100035"></a>5.1 Средства измерений, вспомогательные устройства,

материалы

<a id="p100036"></a>Прибор для бактериологического анализа              ТУ 64-12791-77
воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова)
<a id="p100037"></a>Термостаты электрические суховоздушные
или водяные
<a id="p100038"></a>Автоклав электрический ГОСТ 9586-75
<a id="p100039"></a>Бокс, оборудованный бактерицидными лампами
<a id="p100040"></a>Холодильник бытовой
<a id="p100041"></a>Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200
<a id="p100042"></a>Микроскоп биологический с иммерсионной
системой типа "Биолам" Л-211
<a id="p100043"></a>Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83
<a id="p100044"></a>Чашки Петри бактериологические плоскодонные,
стеклянные, диаметром 100 мм
<a id="p100045"></a>Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл      ГОСТ 10515-75
<a id="p100046"></a>Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 10515-75
<a id="p100047"></a>Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                      ГОСТ 1770-74
<a id="p100048"></a>Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл          ГОСТ 1770-74
<a id="p100049"></a>Секундомер                                          ГОСТ 9586-75
<a id="p100050"></a>Барометр                                            ГОСТ 24696-79

<div align="center">

<a id="p100051"></a>Марля медицинская ГОСТ 9412-77

</div>

<a id="p100052"></a>Вата медицинская гигроскопическая                   ГОСТ 25556-81


#### <a id="p100053"></a>5.2 Реактивы, растворы


<a id="p100054"></a>Среда сусло-агар: солодовое сусло
(значение Баллинга от 5 до 6°) - 98%,
агар-агар - 2%, рН среды 5,0 - 6,0,
режим стерилизации: Р - 0,8 кгс/кв. см, 40 мин.
<a id="p100055"></a>Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67)
<a id="p100056"></a>Молочная кислота (синоним - альфа-оксипропионовая   ГОСТ 490-79
кислота, для подавления посторонней
бактериальной флоры)


## 6. <a id="p100057"></a>Требования безопасности


<a id="p100058"></a>При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в атмосферном воздухе соблюдают следующие требования:
<a id="p100059"></a>6.1. Правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100060"></a>6.2. Электробезопасность при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации прибора.
<a id="p100061"></a>6.3. "Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977).
<a id="p100062"></a>6.4. Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами.


## 7. <a id="p100063"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100064"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц с высшим или средним специальным образованием, прошедших соответствующую подготовку и имеющих навыки работы в области микробиологических исследований.


## 8. <a id="p100065"></a>Условия измерений


<a id="p100066"></a>Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5 °С), атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.


## 9. <a id="p100067"></a>Проведение измерения



#### <a id="p100068"></a>9.1 Условия отбора проб воздуха


<a id="p100069"></a>Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность среды сусло-агар. Время аспирации воздуха (5 - 20 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента.
<a id="p100070"></a>Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора; наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижной диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.


#### <a id="p100071"></a>9.2 Выполнение анализа


<a id="p100072"></a>Метод предполагает учет количества типичных колоний, выросших на 3 сутки после посева проб воздуха, по культурально-морфологическим признакам и яркой оранжево-желтой пигментации среды. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента.
<a id="p100073"></a>Агаризованную среду сусло-агар расплавляют, остужают до 50 - 60 °С, добавляют молочную кислоту из расчета 2 мл на 0,5 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности.
<a id="p100074"></a>Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.
<a id="p100075"></a>После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 38 - 42 °С (повышенная температура способствует более быстрому росту колоний и плодоношений рода Aspergillus). Через 2 - 3 суток производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию.


## 10. <a id="p100076"></a>Вычисление результатов измерения


<a id="p100077"></a>Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле:

                            N х 1000
<a id="p100078"></a>                        X = --------, кл./куб. м,
                               V

<a id="p100079"></a>X - концентрация клеток продуцента в воздухе;

<div align="center">

<a id="p100080"></a>N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;<br>
<a id="p100081"></a>1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;<br>
<a id="p100082"></a>V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

</div>



## 11. <a id="p100083"></a>Оформление результатов измерений


<div align="center">

<a id="p100084"></a>Результаты измерений оформляют протоколом по форме.

<a id="p100085"></a>Протокол N

</div>

количественного микробиологического анализа
штамма-продуцента Aspergillus awamori ВНИИгенетика 120/177
в атмосферном воздухе населенных мест

    1. <a id="p100086"></a>Дата проведения анализа _______________________________

<div align="center">

    2. <a id="p100087"></a>Место отбора пробы ____________________________________

</div>

    3. <a id="p100088"></a>Название лаборатории __________________________________
    4. <a id="p100089"></a>Юридический адрес лаборатории _________________________

<a id="p100090"></a>Результаты микробиологического анализа


| Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м |
| --- | --- | --- |


<div align="center">

<a id="p100092"></a>Ответственный исполнитель

</div>

<a id="p100093"></a>Научный руководитель


## <a id="p100094"></a>Список литературы


1. <a id="p100095"></a>Руководство по контролю загрязнения атмосферы: [РД 52.04.186-96](https://bukva.ai/docs/rukovodstvo-rd-52-04-186-89). М., 1991. 693 с.
2. <a id="p100096"></a>[ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329). ГСИ "Методики выполнения измерений".
3. <a id="p100097"></a>Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности. М., 1980. 27 с.
4. <a id="p100098"></a>Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности. М., 1977. 7 с.

<div align="center">

5. <a id="p100099"></a>ГОСТ 17.2.4.02-81 "Охрана природы. Атмосфера. Общие требования к методам определения загрязняющих веществ".<br>
6. <a id="p100100"></a>Влодавец В.В. К определению плесневых грибов рода Aspergillus в воздухе лечебных учреждений//Гиг. и сан., 1988. N 8. 93 - 95 с.<br>
7. <a id="p100101"></a>Бабьева И.П., Зенова Г.М. Биология почв. М.: МГУ. 122 с.

</div>




<a id="p100102"></a>

---