--- title: "\"МУК 4.2.1111-02. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1111-02" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1111-02" --- ## "МУК 4.2.1111-02. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды. Методические указания" # "МУК 4.2.1111-02. 4.2. Методы контроля. Биологические и микробиологические факторы. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды. Методические указания" (утв. Минздравом России 26.02.2002) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 мая 2002 года. > Взамен "Методических рекомендаций по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" N 01-19/82-23 от 22.05.96 и [раздела 6](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-590-96#p100386) МУК 4.2.590-96.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
26 февраля 2002 года
#### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ **И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ** **ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА** **ИЗМЕРЕНИЯ ЭЛЕКТРИЧЕСКОГО СОПРОТИВЛЕНИЯ (ИМПЕДАНСА)** **ДЛЯ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ** **ПИТЬЕВОЙ ВОДЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **МУК 4.2.1111-02**
Дата введения
1 мая 2002 года
1. Разработаны Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С.) при участии фирмы "SY-LAB", Австрия (М. Шинкингер, Соколов Д.М.). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. N 12 от 14 февраля 2002 г.). 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 26 февраля 2002 г., введены в действие с 1 мая 2002 г. 4. С момента ввода данных Методических указаний считаются утратившими силу "Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" N 01-19/82-23 от 22.05.96 и [раздел 6](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-590-96#p100386) "Исследование питьевой воды" Методических указаний МУК 4.2.590-96 "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". 5. Введены впервые. ## 1. Область применения 1.1. Настоящие Методические указания предназначены для центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора, осуществляющих контроль качества питьевой воды централизованных систем питьевого водоснабжения, а также для лабораторий организаций, предприятий и иных хозяйственных субъектов, обеспечивающих производственный контроль. 1.2. Методические указания устанавливают ускоренный метод качественного и количественного определения индикаторных микроорганизмов в питьевой воде в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". 1.3. Настоящие Методические указания разработаны для осуществления объективного, достоверного и быстрого санитарно-микробиологического анализа питьевой воды с целью контроля ее качества и для обеспечения безопасности и безвредности воды в централизованных системах питьевого водоснабжения. ## 2. Сущность метода Методические указания содержат описание санитарно-микробиологического исследования питьевой воды по показателям качества СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества" с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100" <*> производства австрийской фирмы "SY-LAB". --- <*> Далее - "Бак Трак". Предлагаемый анализатор является автоматизированной системой, созданной на основе импедансной технологии и предназначенной для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробного загрязнения исследуемой пробы. Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал. Импедансная технология в микробиологии является непрямым культуральным методом для определения микроорганизмов с использованием измерения электрического сопротивления. Изменения импеданса происходят в питательной среде по мере того, как ее химический состав преобразуется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов. Под действием микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду. В основном незаряженные или слабозаряженные субстраты превращаются в сильнозаряженные конечные продукты: белки утилизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот и т.д. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические процессы приводят к существенным изменениям импеданса. Когда количество 6 7 микроорганизмов достигает порога около 10 - 10 клеток/мл, наблюдаются экспоненциальные изменения импедансного сигнала. Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Значение IDT обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе. Селективные питательные среды, специально разработанные для измерения импеданса в системе "Бак Трак 4100", позволяют определять микробиологические показатели качества питьевой воды в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 и сокращают сроки получения результатов. ## 3. Нормативные ссылки 3.1. Федеральный закон "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения" от 30 марта 1999 г. N 52-ФЗ. 3.2. "Основы законодательства Российской Федерации об охране здоровья граждан" от 22.07.93 N 5487-1. 3.3. Санитарные правила и нормы "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". СанПиН 2.1.4.1074-01. #### 3.4 Методические указания "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". [МУК 4.2.1018-01.](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) 3.5. Методические указания "Бактериологические исследования с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". [МУК 4.2.590-96.](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-590-96) ## 4. Проведение анализа Исследование проводится по микробиологическим показателям качества питьевой воды, регламентированным СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". Определяемые показатели: 1. Общее число микроорганизмов в 1 мл. 2. Общие колиформные бактерии в 100 мл. 3. Термотолерантные колиформные бактерии в 100 мл. 4. Споры сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл. 5. Колифаги в 100 мл. Отбор, хранение и транспортирование проб для исследования, а также подготовка их к анализу и методика работы при использовании мембранных фильтров проводятся в соответствии с требованиями [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". ### 4.1. Определение общего числа микроорганизмов 1. Питательная среда: BiMedia 001A, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя. 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. 3. Установка пороговых значений (Thresholds): 3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды - WATER.COR). 3.2. При отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 001A производится определение общего количества бактерий классическим методом на чашках Петри в соответствии с требованиями [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". Наименования рекомендуемых для использования в данном случае питательных сред приведены в [разделе 6](#p100242) данных Методических указаний. Результаты, полученные при классическом методе исследования (KOE/CFU в 1 мл), вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в [разделе 5](#p100217) данных указаний. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 001A. 5. Внести 1 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 9 мл питательной среды. 6. Тщательно перемешать содержимое, вращая ячейку между ладонями (не переворачивать ячейку!). 7. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 001A (без инокулята). 8. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение. 9. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. При пересечении порогового значения происходит автоматический подсчет численности микроорганизмов в исследуемом образце воды. Результат определения KOE (CFU) выдается автоматически в виде количества микроорганизмов в 1 мл исследуемого образца воды. Учет результатов проводится по М-параметру. ### 4.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий Исследование может проводиться одним из трех методов: 1) мембранной фильтрации с последующим тестированием на микробиологическом экспресс-анализаторе "Бак Трак"; 2) титрационным с предварительным этапом накопления бактерий в жидкой питательной среде; 3) прямого измерения с использованием измерительных ячеек прибора "Бак Трак" объемом 100 мл. #### 4.2.1. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации (основной метод) Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из установленного объема анализируемой пробы воды и дальнейшем определении показателя на приборе "Бак Трак". Используется метод мембранных фильтров в соответствии с [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". 1. Среда BiMedia 160B <*>, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя. --- <*> Возможно использование питательной среды BiMedia 160C при необходимости определения индолообразования. 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. 3. Установка пороговых значений (Thresholds): 3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR). 3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение наличия колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с [МУК 4.2.1018-01.](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) Результаты, полученные при классическом методе исследования, вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTION/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в [разделе 5](#p100217) данных указаний. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл среды BiMedia 160B. 5. Поместить мембранный фильтр исследуемого образца воды в измерительную ячейку с 10 мл среды. 6. Для контроля среды используют измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 160B. 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение. 8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру за период времени менее 16 часов. При положительном результате наблюдается также изменение цвета питательной среды: исходный пурпурный цвет среды меняется на желтый. При использовании калибровочного файла результат исследования выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом объеме воды. Для постановки оксидазного теста и определения ферментации лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе из ячеек с признаками роста колиформных бактерий делают высев петлей на чашки Петри со средой Эндо. Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часов. Постановка тестов проводится в соответствии с требованиями [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". #### 4.2.2. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий прямым методом с использованием измерительных ячеек объемом 100 мл 1. Концентрированная среда BiMedia 160B (5-кратной концентрации) <*>. --- <*> Для приготовления концентрированной среды навеска сухого препарата среды увеличивается в 5 раз, а объем дистиллированной воды остается прежним. 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. 3. Установка пороговых значений (Thresholds): 3.1. В случае использования калибровочного файла для исследования питьевой воды параметры пороговых значений вносятся автоматически (имеется коммерческий калибровочный файл для исследования питьевой воды на колиформные бактерии - COLI.COR). 3.2. В отсутствии калибровочного файла одновременно с посевом исследуемого образца воды на среду BiMedia 160B производится определение колиформных бактерий классическим методом мембранных фильтров в соответствии с [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". Результаты, полученные при классическом методе исследования, вносят в соответствующий файл (MAIN MENU/DATA FUNCTIONS/ENTER VALUES). Основные этапы создания калибровочного файла рассмотрены в [разделе 5](#p100217) данных указаний. 4. Поместить 100 мл исследуемого образца воды в измерительную ячейку прибора объемом 100 мл. 5. Добавить в каждую измерительную ячейку по 20 мл концентрированной среды BiMedia 160B. 6. Для контроля среды используют одну измерительную ячейку со 100 мл стерильной дистиллированной воды и 20 мл концентрированной среды BiMedia 160B. 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерения. 8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. При наличии в исследуемом образце воды единичных клеток колиформных бактерий изменение сигнала импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру менее чем за 16 часов. При положительном результате наблюдается также изменение цвета питательной среды с исходного пурпурного до желтого. При использовании калибровочного файла результат исследования выдается автоматически в виде количества колиформных бактерий в исследуемом объеме воды. Из ячеек с признаками роста колиформных бактерий делают высев петлей на чашки Петри со средой Эндо для постановки оксидазного теста и определения ферментации лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе. Посевы на среде Эндо инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 2) ч. Постановка тестов проводится в соответствии с [МУК 4.2.1018-01.](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) #### 4.2.3. Определение общих и термотолерантных колиформных бактерий титрационным методом Определение колиформных бактерий титрационным методом проводится в соответствии с МУК 4.2.1018-01 "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды" на приборе после этапа подращивания засеянных объемов пробы анализируемой воды в средах накопления. Сущность метода заключается в посеве определенных объемов анализируемой пробы воды в жидкую питательную среду для накопления бактерий с последующим высевом в измерительную ячейку прибора. 1. Среда BiMedia 160B, приготовленная в соответствии с требованиями инструкции изготовителя. 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. 3. Установка пороговых значений: Пороговые значения (Thresholds): - М-параметр 5%; - Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) - 3 ч. 4. Добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл среды BiMedia 160B. 5. Внести 1 мл из каждого объема с признаками роста в среде накопления в 9 мл среды BiMedia 160B. 6. Для контроля среды использовать одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 160B (без инокулята). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерения. 8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. При наличии в засеянных после накопления объемах колиформных бактерий сигнал импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру в течение 3 ч. При положительном результате наблюдается также изменение цвета питательной среды с исходного пурпурного на желтый. Для постановки оксидазного теста и определения ферментации лактозы при (44 +/- 0,5) °C с целью подтверждения наличия или отсутствия термотолерантных колиформных бактерий в исследуемой пробе из засеянных объемов с признаками роста в среде накопления делают высев петлей на среду Эндо. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (18 +/- 20) ч. Постановка тестов проводится в соответствии с [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". Для ускорения получения результатов на присутствие термотолерантных колиформных бактерий допустимо проводить высев 1 мл из объема среды накопления, где отмечено помутнение и газообразование, в измерительную ячейку "Бак Трак" с 9 мл среды BiMedia 160B и инкубировать при режиме (44 +/- 0,5) °C по вышеописанному протоколу измерения. Учет результатов титрационного метода ведется в соответствии с МУК 4.2.1018-01, [раздел 8.3.5](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01#p100257). ### 4.3. Определение спор сульфитредуцирующих клостридий Сущность метода заключается в концентрировании определенного объема исследуемого образца воды с использованием мембранных фильтров и последующем тестировании на приборе "Бак Трак". 1. Среда BiMedia 660A (готовится в соответствии с инструкцией фирмы-изготовителя). 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 43 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. Пороговые значения (Thresholds): - М-параметр 5%; - Е-параметр 10%. Проводить учет результатов по М-параметру. Пороговое значение по времени (Time limit) - 23 часа. Определение сульфитредуцирующих клостридий необходимо проводить, используя измерительные ячейки для анаэробов. 3. Добавить в каждую измерительную ячейку по 10 мл питательной среды BiMedia 660A. 4. Отфильтровать соответствующее количество исследуемого образца воды (20 мл), в котором не допускается наличия спор сульфитредуцирующих клостридий, и поместить фильтр в измерительную ячейку со средой. 5. Для контроля питательной среды используют одну измерительную ячейку с 10 мл среды BiMedia 660A. 6. Поместить измерительные ячейки с образцами исследуемых проб воды и контролем питательной среды в штатив и прогреть на водяной бане при температуре (75 +/- 5) °C в течение 15 мин. 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерения. 8. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 ч после загрузки ячеек в прибор. Рост микроорганизмов и время определения изменения импеданса (IDT) будут записаны автоматически. Учет результатов Образец загрязнен спорами сульфитредуцирующих бактерий, если изменение импеданса превышает 5%-ное пороговое значение по М-параметру и 10%-ное пороговое значение по Е-параметру в течение 23 часов. При положительном результате на стенках измерительной ячейки должен обнаруживаться выпавший осадок черного цвета. *Примечания.* Определение возможно проводить, используя обычные измерительные ячейки и парафиновое масло. Для этого необходимо добавить в каждую измерительную ячейку по 9 мл питательной среды BiMedia 660A и 1 мл парафинового масла (как покрывающий слой) и автоклавировать ячейки с внесенной в них питательной средой и парафиновым маслом (крышки должны быть приоткрыты!). ### 4.4. Прямой метод определения колифагов Определение колифагов в воде проводится в измерительных ячейках объемом 100 мл. 1. Среда BiMedia 001A десятикратной концентрации <*>. --- <*> Для приготовления концентрированной среды навеска сухого препарата среды увеличивается в 10 раз, а объем дистиллированной воды остается прежним. 2. Протокол измерения. #### 2.1 Установить температуру 37 °C на приборе "Бак Трак". #### 2.2 Установить в основном меню программы прибора параметры. Параметры для инкубаторного блока (Adjust parameters): Время исследования (Duration) - 24 ч. Масштаб измерений (Scale): - М-параметр 0 - 50%; - Е-параметр 0 - 50%. Время задержки (Delay) - 1 ч. Пороговые значения (Thresholds): - М-параметр 5%; - Е-параметр 10%. Учет результатов проводится по М-параметру. 3. Отфильтровать 100 мл исследуемой пробы воды через фильтр для микробиологических целей с диаметром пор не более 0,45 мкм. 4. Фильтрат поместить в измерительную ячейку с 10 мл концентрированной среды BiMedia 001A. 5. Внести 1 мл, 0,1 мл и 0,01 мл свежей ночной культуры чувствительного к фагу штамма Е.coli <*> в измерительные ячейки с отфильтрованными образцами воды. --- <*> Наименование тест-культуры и подготовка ее для использования в методике определения колифагов указаны в соответствующих разделах [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". 6. Для контроля использовать измерительные ячейки со 100 мл стерильной воды + 10 мл концентрированной среды BiMedia 001A + ночная культура чувствительного к фагу штамма Е.coli (1 мл, 0,1 мл, 0,01 мл). 7. Выбрать в основном меню программы ЗАПУСК ИЗМЕРЕНИЙ (START MEASUREMENT) и начать измерение. 8. После того, как каждая позиция блока будет отмаркирована как свободная на экране монитора, поместить измерительные ячейки в прибор "Бак Трак". Измерение начнется автоматически через 1 час после загрузки ячеек в прибор. 9. Оценка результатов: - при отсутствии колифагов в воде время детекции импеданса (IDT) будет одинаковым как для исследуемого, так и для контрольного образца (при сравнении одинакового количества внесенной культуры Е.coli); - при наличии колифагов в воде время детекции импеданса (IDT) для исследуемых образцов будет больше по сравнению с контролем (при сравнении одинакового количества внесенной культуры Е.coli). Изменится также форма кривой импедансного сигнала. *Примечание.* Использование различных количеств тест-культуры Е.coli рекомендуется только для начального этапа отработки и нахождения оптимальной плотности культуры. В дальнейших исследованиях возможно использование лишь оптимального количества вносимой культуры. Рекомендуется не превышать показатель 100 - 1000 клеток Е.coli в измерительной ячейке. ## 5. Основные этапы создания калибровочного файла Для создания калибровочного файла необходимо исследовать не менее 50 проб воды централизованных систем питьевого водоснабжения параллельно двумя методами: классическим и с помощью прибора "Бак Трак". Для этого необходимо: 1. В основном меню программы "Бак Трак" MAIN MENU в разделе "Задание пороговых значений" (THRESHOLDS) не указывать пороговые значения (NONE). 2. Провести исследование проб воды с использованием прибора в соответствии с требованиями данных указаний и параллельные исследования этих же проб классическим методом по [МУК 4.2.1018-01](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1018-01) "Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды". 3. Результаты классического метода исследования занести в соответствующий файл данных программы "Бак Трак". Для этого: 3.1. В основном меню программы "Бак Трак" выбрать раздел "Работа с данными" (Data Functions). 3.2. В меню Data Functions выбрать соответствующие файлы исследования проб воды в разделе "Выбор файлов" (Select files). 3.3. Внести в меню "Data Functions" в разделе "Ввод численных значений" (Enter Values) результаты для соответствующих исследованных проб воды. 4. После того, как будет получено не менее 50 результатов исследования двумя параллельными методами - классическим и автоматическим с помощью прибора "Бак Трак" - можно приступать к созданию калибровочного файла. 5. Основные этапы создания калибровочного файла. 5.1. В основном меню программы "Бак Трак" выбрать раздел "Работа с данными" (Data functions). 5.2. В меню "Работа с данными" (Data functions) выбрать соответствующие файлы исследования (не менее 50 проб) питьевой воды в разделе "Выбор файлов" (Select files). 5.3. В меню "Работа с данными" (Data functions) выбрать раздел "Построение калибровочного файла" (Correlation). 5.4. Указать "Пороговое значение" (Thresholds) для М-параметра или Е-параметра, по которому будет проводиться построение калибровочной кривой. Как правило, для построения калибровочной кривой используется М-параметр, численное значение которого 5%. 5.5. После задания порогового значения М-параметра необходимо вычислить корреляцию (Calculate). 5.6. Если коэффициент корреляции r превышает значение (-0,85), то данная калибровочная кривая показывает высокую степень корреляции и отвечает требованиям (рис. 5.1, 5.2) <*>. --- <*> Здесь и далее рисунки не приводятся. 5.6.1. Указать "Пороговое значение по времени" (Time-Limits). Для этого в полученное уравнение регрессии (уравнение калибровочной кривой) необходимо подставить максимально допустимое значение определяемого показателя (ОМЧ, колииндекс и т.д.), регламентированное в данном случае СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". Далее следует вычислить логарифм определяемого показателя и определить из уравнения значение времени - (t). Это и есть величина "Порогового значения по времени" - Time Limits. 5.6.2. Теперь данная калибровочная кривая записывается на диск (Disk) в виде калибровочного файла (Filename). 5.6.3. При необходимости вносится дополнительный комментарий (Comment) для детального описания калибровочного файла. 5.7. Если коэффициент корреляции r не превышает (-0,85), то необходимо более детально проанализировать полученную зависимость. Как правило, прослеживается общая тенденция: большинство точек находится вблизи калибровочной кривой, и имеются лишь отдельные "точки-выбросы", которые расположены вдали от калибровочной кривой (рис. 5.3). В этом случае необходимо "точки-выбросы" исключить. Это приведет к существенному повышению коэффициента корреляции r. 6. После создания калибровочного файла необходимо выбрать данный файл при задании пороговых значений (Thresholds) в главном меню программы "Бак Трак" для автоматического подсчета величины определяемого показателя. ## 6. Питательные среды: назначение, приготовление, использование Питательные среды, используемые в импедансной микробиологии, специально разработаны фирмой SY-LAB (Австрия) <*> для системы "Бак Трак". Селективность фирменных питательных сред позволяет определять микробиологические показатели качества питьевой воды систем централизованного водоснабжения в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.4.1074-01 "Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества". --- <*> Питательные среды BiMedia 001A и BiMedia 160B выпускаются также отделением питательных сред Государственного научного центра прикладной микробиологии (Московская область, г. Оболенск). Эти среды обладают всеми свойствами, необходимыми для измерения импеданса: - ровная базовая линия с небольшим или нулевым дрейфом или шумом в присутствии инокулюма; - высокая начальная скорость изменения электрического сигнала, дающая резкий перегиб в точке определения; - большая величина тотальных электрических изменений. Для санитарно-микробиологического анализа питьевой воды используются следующие питательные среды: - BiMedia 001A - для определения общего числа микроорганизмов; - BiMedia 160B и 160C - для определения колиформных бактерий; - BiMedia 660A - для определения сульфитредуцирующих клостридий. ### 6.1. Приготовление сред 6.1.1. BiMedia 001A - для определения мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (общее число микроорганизмов) и BiMedia 160B - для определения колиформных бактерий (общих и термотолерантных): - растворить необходимое количество среды в дистиллированной воде (соотношение указано на упаковке); - разделить приготовленную среду на порции и автоклавировать при 1 атм. 15 мин.; - после стерилизации среда должна уравновеситься при комнатной температуре в течение 6 ч. *Примечание.* Приготовленная среда должна храниться при температуре 4 °C. Срок хранения - 3 недели. Изменение режима стерилизации (более продолжительное автоклавирование) снижает качество среды! ##### 6.1.2 Приготовление среды BiMedia 660A - для определения сульфитредуцирующих клостридий: - растворить все содержимое упаковки в дистиллированной воде (конечный объем - 1,2 или 5 л указан на этикетке); - проверить pH среды и, если необходимо, довести до 7,1 +/- 0,1; - разлить приготовленную среду на порции и стерилизовать при 1 атм. 15 мин.; - дать среде уравновеситься в течение 12 ч при комнатной температуре перед использованием; - внести по 9 мл среды в стерильные измерительные ячейки и поместить ячейки в штатив; - прогреть измерительные ячейки (с приоткрытыми крышками) при 95 - 100 °C на пару в течение 15 мин. (для удаления растворенного в среде кислорода); - дать среде остыть до 50 °C (или меньше), затем можно добавлять аддитив; - добавить во флакон с Аддитивом 660A 1,5 мл стерильной дистиллированной воды; - добавить по 30 мкл раствора аддитива в каждую измерительную ячейку с 9 мл среды. Для предотвращения образования воздушных пузырьков не погружайте наконечники пипетки в среду. *Примечание.* Аддитив необходимо добавлять только непосредственно перед использованием среды. Хранить аддитив при 4 °C. Растворы аддитивов следует хранить не более 2 недель. Приготовленная среда должна храниться при 4 °C не более 2 недель. Длительное прогревание и обработка при температуре выше рекомендуемой снижают качество среды! ## 7. Методика тестирования и обработки измерительных ячеек ### 7.1. Методика тестирования измерительных ячеек прибора "Бак Трак" Необходимо каждые несколько месяцев проводить тестирование используемых измерительных ячеек для контроля регистрируемых показателей - изменения проводимости среды (М-параметр) и изменения проводимости электродов (Е-параметр). Для этого необходимо: 1. В стерильные измерительные ячейки налить 10 мл или 100 мл стерильного физиологического раствора (в зависимости от объема ячеек). 2. Установить время исследования (Duration) - 24 ч. 3. Установить пороговое значение (Threshold) для М-параметра - 5%. 4. Установить значение Time limit - 23 ч. 5. Начать измерение (Start measurement). 6. После того, как каждая позиция в блоке будет отмаркирована как свободная (Empty), поместить в инкубаторный блок измерительные ячейки с физиологическим раствором. Учет результатов тестирования. Если за время тестирования измерительных ячеек значения М-параметра не превысили 5%, то ячейки пригодны для дальнейшей работы. Если за время тестирования в ячейках значение М-параметра превысило 5%, то цвет ячейки на экране монитора изменится на красный, что означает "проба загрязнена" (Contaminated). В этом случае необходимо повторно тестировать такую ячейку, предварительно поместив ее в любое другое место в инкубаторном блоке. При повторном получении аналогичных результатов (пересечение 5% значения М-параметра) необходимо заменить измерительные ячейки на новые. ### 7.2. Методика обработки измерительных ячеек прибора "Бак Трак" #### 7.2.1. Обработка измерительных ячеек 1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек и поместить измерительные ячейки в металлический штатив. Не автоклавировать плотно закрытые ячейки! 2. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20 - 30 мин. 3. При наличии патогенных микроорганизмов использовать режимную стерилизацию. 4. После автоклавирования дать ячейкам остыть до комнатной температуры. 5. Открыть измерительные ячейки и промыть их дистиллированной водой. 6. Если исследуемый продукт имел жирную консистенцию, то выдержать ячейки в растворе с мягким нейтральным моющим средством (например, хозяйственное мыло) в течение 30 мин. 7. При необходимости промыть измерительные ячейки мягким ершиком так, чтобы не повредить электроды. 8. Если на дне измерительной ячейки остался какой-либо осадок, то его необходимо удалить. 9. Тщательно промыть измерительные ячейки 3 раза водопроводной водой и 2 раза дистиллированной водой. 10. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке появилась вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и просушить их в разобранном виде в сушильном шкафу при 60 °C в течение 40 мин. 11. Собрать ячейки, верхнюю крышку плотно не закрывать! 12. Измерительные ячейки автоклавировать при 1 атм. в течение 15 мин. Теперь измерительные ячейки готовы к использованию. *Примечание.* Никогда не используйте моющие средства, содержащие хлор. Тщательно промывайте ячейки, поскольку образование пленок на поверхности электродов вызывает шумы при прохождении сигнала. #### 7.2.2. Стерилизация измерительных ячеек 1. Приоткрыть пластиковые крышки измерительных ячеек. 2. Поместить измерительные ячейки в металлический штатив. Не автоклавировать плотно закрытые ячейки! 3. Разместить штатив с измерительными ячейками в верхней части автоклава для предотвращения попадания воды в ячейки. 4. Стерилизовать измерительные ячейки при 1 атм. в течение 20 мин. Никогда не стерилизовать ячейки в сухожаровом шкафу! 5. Достать измерительные ячейки из автоклава, как только это станет возможным (~ 70 - 85 °C). Высушить ячейки при комнатной температуре. 6. Если между уплотнительными кольцами в донной крышке появилась вода, то необходимо разобрать измерительные ячейки и высушить их в разобранном виде в сушильном шкафу при 60 °C в течение 40 мин. 7. Убедитесь, что ячейки полностью высохли. При необходимости просушите измерительные ячейки еще раз. Теперь измерительные ячейки готовы к использованию. *Примечание.* Возможна стерилизация измерительных ячеек с внесенной в них питательной средой. ## Библиографические данные 1. Водный кодекс Российской Федерации от 16.11.95. 2. Руководство по контролю качества питьевой воды. Женева: ВОЗ, 1994. Т. 1. 3. Временные методические рекомендации по использованию питательных сред, предназначенных для микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". М., 1995. 4. Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора "Бак Трак 4100". М., 1996. 5. Подунова Л.Г., Кривопалова Н.С., Сорокина Р.С. и др. Экспресс-метод бактериологического контроля за качеством питьевой воды // Стендовый доклад II Международного конгресса "Вода: Экология и технология" ЭКВАТЭК-96. М., 1996. 6. Определитель бактерий Берджи / Под редакцией Дж. Хоулта, Н. Крига, П. Снита, Дж. Стейли и С. Уилльямса. М.: "Мир", 1997. Т. 1. 7. Атанов А.Н., Белова М.А., Гумен С.Г. Применение системы "Бак Трак 4100" // Водоснабжение и санитарная техника. 1998, N 10. С. 25 - 27. 8. Недачин А.Е., Артемова Т.З., Талаева Ю.Г., Рахманин Ю.А. и др. // Тезисы докладов IV Международного конгресса "Вода: Экология и технология" ЭКВАТЭК-2000. М., 2000. С. 760 - 761. 9. Пивоваров Ю.П., Королик В.В. Санитарно-значимые микроорганизмы (таксономическая характеристика и дифференциация). М., 2000. 10. Noble P.A., Ashton Е., Davidson С.A., Albritton W.L. Heterotrophic plate counts of surface water samples by using impedance methods. Applied and Environmental Microbiology 57 (11), 1991. С. 3287 - 3291. 11. Futschik K. Bac Trac 4100 Impedance-splitting method // Technical University of Vienna, Institute of Electrotechnical Principles and Theory, 1992. Р. 1 - 8. 12. Denner E.В.М. The Bac Trac 4100, a New Impedance Measuring System for the Rapid Detection of Microorganisms // BACTRAC Seminar. Moscow, October, 1995. Р. 1 - 31. 13. Colquhoun K.O., Timms S., Fricker C.R. Detection of Escherichia coli in potable water using direct impedance technology // Journal of Applied Bacteriology, 1995, 79. Р. 635 - 639. 14. Futschik K., Pfutzner H., Nussbaaum C. Selective detection of microorganisms by use of electrode impedance // IX International conference on electrical bio-impedance. September 26 - 30, 1995. Heidelberg, Germany. Р. 79 - 82. ---