--- title: "\"МУК 4.2.1072-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1072-01" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1072-01" --- ## "МУК 4.2.1072-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны. Методические указания" # "МУК 4.2.1072-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны. Методические указания" (утв. Минздравом России 20.09.2001) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 20 сентября 2001 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
20 сентября 2001 года #### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК** **МИКРООРГАНИЗМА PENICILLIUM VERMICULATUM PK-1 - ПРОДУЦЕНТ** **ВЕРМИКУЛЕНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.1072-01**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны к.б.н. Бару Р.В., к.б.н. Лапчинской А.В. (Государственный научный центр по антибиотикам). 2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.
3. Введены впервые.
## 1. Общие положения и область применения Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцент Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений". Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований. ## 2. Характеристика штамма-продуцента Вермикулена Микроорганизм Penicillium vermiculatum PK-1 является продуцентом Вермикулена. Биологический препарат Вермикулен представляет собой живую культуру (споры и мицелиальная масса микроорганизма Penicillium vermiculatum PK-1). Penicillium vermiculatum PK-1 - аэроб, растет на жидких и агаризованных средах, оптимальная температура роста 25 - 30 °С, оптимальная рН от 5 до 8. Наиболее интенсивный рост гриба отмечается на картофельно-сахарозном агаре и агаризованной среде Чапека. На среде Чапека - Докса при культивировании при температуре 25 °С на 2 - 3 сутки образуются небольшие (2 - 5 мм в диаметре) округлые бархатистые колонии желто-бежеватого цвета, с обратной стороной от светло до темно-оливкового. Репродуктивными органами микроорганизма являются споры (конидии и обрывки мицелия).
ПДК - 5000 кл./куб. м.
р.з. ## 3. Пределы измерений Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 30000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95. ## 4. Метод измерений Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента Вермикулена на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам. ## 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. ### 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Прибор для бактериологического анализа воздуха, ТУ 64-12791-77 модель 818 (щелевой прибор Кротова) Термостаты электрические суховоздушные или водяные Автоклав электрический ГОСТ 9586-75 Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой Весы лабораторные аналитические типа **ВЛА-200** Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211 Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83 Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные диаметром 100 мм Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Секундомер ГОСТ 9586-75 Барометр ГОСТ 24696-79 Марля медицинская ГОСТ 9412-77 Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81. ### 5.2. Реактивы, растворы Антибиотики группы аминогликозидов (канамицин, неомицин и др.) Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Селективная среда Чапека - Докса для штамма - продуцента: NaNО - 3,0 г; MgSО К НРО - 1,0 г; 3 4 2 4 KCL - 0,5 г; MgSО х 7Н О - 0,5 г; FeSО х 7Н О - 4 2 4 2 0,01 г; сахароза - 30 г; агар - 20 г; вода дистиллированная - до 1000 мл; рН - 6,0; стерилизация при 121 °С 30 мин. ## 6. Требования безопасности При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны соблюдают: - правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88; - правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора; - требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980); - положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977). Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами. ## 7. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований. ## 8. Условия измерений Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%. ## 9. Проведение измерения ### 9.1. Условия отбора проб воздуха Для определения продуцента Вермикулена воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. ### 9.2. Выполнение анализа Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 2 - 3 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента. Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотика (канамицин, неомицин) из расчета 25 - 50 мкг на 1 мл среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 - 15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат на 25 °С. Через 48 - 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию. ## 10. Вычисление результатов измерения Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле: N х 1000 X = --------, кл./куб. м, V где: X - концентрация клеток продуцента в воздухе; N - количество колоний продуцента, выросших на чашке; 1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха; V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации). В случае невозможности использования аппарата Кротова, рекомендуется применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 60 мин. (при определении концентрации микроорганизма в атмосферном воздухе). При использовании этого метода пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента: эмпирически установлено, что за 5 мин. на площадь 100 куб. см оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, за 1 мин. - в 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 куб. см. Составляем пропорцию: на 100 куб. см за 1 мин. оседает 2 л воздуха на 78,54 куб. см - Х л Х = 1,57 л/мин. Следовательно, на стеклянную чашку Петри за 1 мин. оседает 1,57 л воздуха. Надо определить количество клеток в 1 куб. м воздуха. На 1 чашку (диаметр 100 мм) за 1 мин. оседает количество микробов, содержащихся в 1,57 л воздуха, за Т мин. - 1,57 х Т л. В этом количестве содержится N колониеобразующих единиц (микробных клеток - спор, обрывков мицелия), а в 1 куб. м воздуха содержится: N х 1000 N х 636,9 -------- = ---------. 1,57 х Т Т Пример: за 30 мин. седиментации выросло 12 колоний микроорганизма. В 1 куб. м воздуха содержится: 12 х 636,9
---------- = 253 клетки.
30 ## 11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по форме. Протокол N ___
количественного микробиологического анализа штамма Penicillium vermiculatum PK-1 - продуцента Вермикулена в воздухе рабочей зоны Дата проведения анализа _________________________________ Место отбора пробы ______________________________________
Название лаборатории ____________________________________
Юридический адрес организации ___________________________ Результаты микробиологического анализа | Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м | | --- | --- | --- |
Ответственный исполнитель
Научный руководитель ## Список литературы 1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования". 2. [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).
---