МУК 4.2.1071-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации препарата ЭМ-1 «Байкал» по одному из ведущих компонентов (Lactobacillus casei-21) в воздухе рабочей зоны. Методические указания

(утв. Минздравом России 20.09.2001)

4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРЕПАРАТА ЭМ-1 «БАЙКАЛ» ПО ОДНОМУ ИЗ ВЕДУЩИХ КОМПОНЕНТОВ (LACTOBACILLUS CASEI-21) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1. Разработаны к.м.н. Сергеюк Н.П. (Научно-исследовательский центр «Экос»).

2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации — Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.

1. Общие положения и область применения

Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентраций клеток штамма Lactobacillus casei-21, являющегося ведущим компонентом консорциума микроорганизмов (препарат ЭМ-1 «Байкал») в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентрации от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха.

Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля концентрации препарата «Байкал ЭМ-1» по одному из ведущих компонентов Lactobacillus casei-21 в воздухе рабочей зоны и производственных помещений и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 «ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования», ГОСТ Р 8.563-96 «ГСИ. Методики выполнения измерений».

Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий, научно-исследовательских институтов, работающих в области гигиены окружающей среды и аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований.

2. Характеристика штамма Lactobacillus casei-21

Семейство: Lactobacillaceae

Род: Lactobacillus

Штамм: 21.

На поверхности плотных питательных сред образует мелкие круглые колонии. Глубинные колонии — вогнутые, иногда с выростами. Форма клеток — палочки разной длины, образуют короткие и длинные цепочки, неподвижные, неспорообразующие, грамположительные. Отмечена также тенденция к образованию заметно искривленных (изогнутых) клеток.

3. Пределы измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток

от  100  до  50000  клеток  в  1  куб. м воздуха при доверительной
вероятности 0,95. ПДК     - 2000 кл./куб. м.

                 р.з.

4. Метод измерений

Метод основан на аспирации из воздуха клеток Lactobacillus casei-21 на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы.

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

Прибор для бактериологического анализа воздуха, ТУ 64-12791-77 модель 818 (щелевой прибор Кротова)

Термостаты электрические суховоздушные или водяные

Автоклав электрический ГОСТ 9586-75

Бокс, оборудованный бактерицидными лампами

Холодильник бытовой

Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200

Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа «Биолам» Л-211

Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83

Чашки Петри бактериологические плоскодонные диаметром 100 мм

Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл     ГОСТ 10515-75
Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл                     ГОСТ 10515-75
Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл         ГОСТ 1770-74
Секундомер                                         ГОСТ 9586-75
Барометр                                           ГОСТ 24696-79

Марля медицинская ГОСТ 9412-77

Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81.

5.2. Реактивы, растворы

Агар микробиологический ГОСТ 17206-96

Селективная среда для молочнокислых палочек Lactobacillus casei-21

Среда Рогозы (состав питательной среды %):

дрожжевой экстракт — 0,5;

триптический гидролизат казеина — 1,0;

твин-80 — 0,1;

глюкоза — 2,0;

натрий уксуснокислый — 2,5;

лимоннокислый аммоний — 0,2;

ледяная уксусная кислота — 0,132;

соль Б — (магний сернокислый — 11,5 г; марганец сернокислый — 2,86 г; железо сернокислое — 0,58 г; вода 100 мл) — 0,5;

калий фосфорнокислый однозамещенный — 0,6,

рН среды 0,6;

вода водопроводная — 100 мл;

агар-агар — 1,5.

Стерилизация при 3/4 атмосферы 20 мин. После остывания раствора добавляют 9 мл этилового спирта для подавления посторонней микрофлоры и разливают данный раствор асептично по 20 мл в чашки Петри.

6. Требования безопасности

При выполнении измерений концентрации клеток Lactobacillus casei-21 в воздушной среде соблюдают:

• правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88;
• правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора;
• требования, изложенные в руководстве «Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности» (1980);
• положения «Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности» (1977).

7. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований.

8. Условия измерений

Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 — 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%.

9. Проведение измерений

9.1. Условия отбора проб воздуха

Для определения микроорганизма воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха 20 мин. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы.

9.2. Выполнение анализа

Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 — 4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний.

Селективную среду тщательно перемешивают и разливают по 20 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха.

После отбора проб воздуха чашки Петри инкубируют в термостате при 36 °С, через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний. При необходимости культуру подвергают микрокопированию.

10. Вычисление результатов измерений

Расчет концентрации клеток в 1 куб. м воздуха производят по формуле:

                     N х 1000

X = --------, кл./куб. м, V

где:

Х — концентрация клеток в воздухе;

N — количество колоний, выросших на чашке;

1000 — коэффициент перерасчета на 1 куб. м воздуха;

V — объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации).

Препарат «Байкал ЭМ-1» представляет собой консорциум микроорганизмов, в котором Lactobacillus casei-21 составляют 30% от общего числа микроорганизмов, Streptococcus lactis — 30%, бактерии фотосинтеза Phodopseudomonas palistris — 30%, сахаромицеты — Saccaromyces cerevisial — 10%. Концентрацию препарата «Байкал ЭМ-1» рассчитывают исходя из процентного отношения микроорганизмов, входящих в его состав, по формуле:

А = 100 х N / d,

где:

А — концентрация консорциума (кл./куб. м);

N — концентрация контрольного микроорганизма (кл/куб. м);

Контрольным микроорганизмом для данной методики является Lactobacillus casei-21.

11. Оформление результатов измерений

Протокол N ____ количественного микробиологического анализа препарата ЭМ-1 «Байкал» в воздухе рабочей зоны

Дата проведения анализа ____________________________

Место отбора пробы _________________________________

Юридический адрес организации ______________________

Результаты микробиологического анализа

Шифр или № пробы	Определяемый микроорганизм	Концентрация, кл./куб. м

Ответственный исполнитель

---