--- title: "\"МУК 4.2.1070-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1070-01" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1070-01" --- ## "МУК 4.2.1070-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны. Методические указания" # "МУК 4.2.1070-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны. Методические указания" (утв. Минздравом России 20.09.2001) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 20 сентября 2001 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
20 сентября 2001 года #### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК** **МИКРООРГАНИЗМА TRICHODERMA LONGIBRACHIATUM TW-1 - ПРОДУЦЕНТА** **БЕТА-ГЛЮКАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.1070-01**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны к.м.н. В.И. Бобровым (ВНЦ по безопасности биологически активных веществ). 2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г. 3. Введены впервые. ## 1. Общие положения и область применения Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма - Trichoderma longibrachiatum TW-1 - продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 куб. м воздуха. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений". Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований. ## 2. Характеристика штамма-продуцента бета-глюканазы Продуцент бета-глюканазы Trichoderma longibrachiatum TW-1 относится к классу несовершенных грибов. Рост характерных колоний определяется на 5 - 6 сутки. На агаризованной среде СМ микроорганизм образует характерные колонии до 15 мм в диаметре с гладкой подошвой, не врастающие в агар, с волнистым краем, пушистым воздушным мицелием, который покрыт спорами белого и желтого цвета. Гифы мицелия бесцветные, септированные, многократно ветвистые. Оптимальная температура роста 28 - 30 °С. Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 5000 кл./куб. м, 3 класс опасности, пометка А. ## 3. Пределы измерений Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 6000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95. ## 4. Метод измерений Метод измерения концентрации штамма-продуцента основан на аспирации из воздуха микробных клеток (спор, фрагментов мицелия) продуцента бета-глюканазы на поверхность плотной питательной среды СМ и подсчете выросших колоний по зонам просветления, образующихся вокруг каждой колонии штамма как результат продукции бета-глюканазы на среде с окрашенной целлюлозой. ## 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. ### 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) ТУ 64-12791 77 Термостаты электрические суховоздушные или водяные Автоклав электрический ГОСТ 9586-75 Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200 Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211 Лупа с увеличением х 10 ГОСТ 25706-83 Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные диаметром 100 мм Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 1770-74 Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл ГОСТ 1770-74 Секундомер ГОСТ 9586-75 Барометр ГОСТ 24696-79 Марля медицинская ГОСТ 9412-77 Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81. ### 5.2. Реактивы, растворы Бенгальский розовый Диметилсульфоксид Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Селективная среда для штамма-продуцента бета-глюканазы Состав среды: KH PO - 1 г; MgSO х 7Н О - 2 4 4 2 0,5 г; (NH ) SO - 5 г; целлюлоза порошковая в 4 2 4 пересчете на сухое вещество - 5 г; глюкоза - 5 г; дрожжевой экстракт - 0,5 г; агар - 20 г; вода дистиллированная - до 1000 мл. ## 6. Требования безопасности При выполнении измерений концентрации клеток продуцента бета-глюканазы в воздухе рабочей зоны соблюдают: - правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88; - правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора; - требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980); - положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977). Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами. ## 7. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований. ## 8. Условия измерений Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%. ## 9. Проведение измерений ### 9.1. Условия отбора проб воздуха Для определения продуцента бета-глюканазы воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента, а прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска, прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. ### 9.2. Выполнение анализа Метод предполагает учет количества колоний, выросших на 2 - 3 сутки после посева проб воздуха, по зонам просветления, которые являются результатом образования целлюлаз на срезах с окрашенной целлюлозой в присутствии повышенного количества глюкозы. Существенным признаком промышленных мутантов рода Trichoderma является пониженная катаболическая репрессия по сравнению с дикими мутантами Trichoderma. В то время как у диких штаммов глюкоза в концентрациях выше 0,02 г/л практически полностью подавляет образование целлюлаз в глубинной культуре, у промышленных мутантов подавление образования целлюлаз начинается при концентрациях глюкозы выше 1 г/л. Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют 50 мг/л бенгальского розового, растворенного в 1 мл диметил-сульфоксида, тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Бенгальский розовый предназначен для специфического окрашивания целлюлозы и для ограничения разрастания колоний на чашках. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при 28 - 30 °С на 2 дня и затем при температуре 44 °С на 18 ч для образования вокруг колоний зон просветления. Количественный учет микробных клеток штамма-продуцента бета-глюканазы проводится методом подсчета зон просветления, образующихся вокруг колоний микроорганизма как результат продукции глюканазы на среде СМ с окрашенной целлюлозой. ## 10. Вычисление результатов измерений Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле: N х 1000 Х = --------, кл./куб. м, V где: Х - концентрация клеток продуцента в воздухе; N - количество колоний продуцента, выросших на чашке;
1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха;
V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации). ## 11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по форме: Протокол N ___
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Trichoderma longibrachiatum TW-1 в воздухе рабочей зоны Дата проведения анализа ______________________________________ Место отбора пробы ___________________________________________
Название лаборатории _________________________________________
Юридический адрес организации ________________________________ Результаты микробиологического анализа | Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м | | --- | --- | --- |
Ответственный исполнитель
Научный руководитель ## Список литературы 1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования". 2. [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).
---