--- title: "\"МУК 4.2.1069-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток плесневого гриба Penicillium funiculosum F-149 - продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1069-01" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1069-01" --- ## "МУК 4.2.1069-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток плесневого гриба Penicillium funiculosum F-149 - продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны. Методические указания" # "МУК 4.2.1069-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток плесневого гриба Penicillium funiculosum F-149 - продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны. Методические указания" (утв. Минздравом России 20.09.2001) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 20 сентября 2001 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
20 сентября 2001 года #### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ** **КЛЕТОК ПЛЕСНЕВОГО ГРИБА PENICILLIUM FUNICULOSUM** **F-149 - ПРОДУЦЕНТА ДЕКСТРАНАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.1069-01**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны д.м.н. Ивановым Н.Г., к.б.н. Шеиной Н.И. (Российский государственный медицинский университет). 2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г. 3. Введены впервые. ## 1. Общие положения и область применения Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Penicillium funiculosum F-149 - продуцента декстраназы в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 куб. м воздуха. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений". Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований. ## 2. Биологическая характеристика плесневого гриба Penicillium funiculosum F-149 и его гигиенический норматив Систематическое положение микроорганизма Класс Fungi imperfecti Порядок Hyphomycetales Семейство Mucedinaceae Род Penicillium Секция Biverticillata Вид funiculosum Штамм F-149 Округлые колонии имеют 4 - 5 мм в диаметре, в зависимости от плотности посева могут достигать 11 мм в диаметре. Поверхность колоний слабошероховатая, пушистая, консистенция мягкая. Воздушный мицелий имеет белоснежно-белую окраску. На 3 - 4 день развития желтовато-кремовый субстрат меняет свою окраску, становясь ярко-оранжевым. Продолжительность развития гриба составляет 26 - 30 дней. Репродуктивными органами гриба являются конидиеносцы с конидиями (споры), может также размножаться вегетативно (фрагментами мицелия). Штамм Penicillium funiculosum F-149 получен из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов ГНИИгенетики. Штамм является продуцентом декстраназы. Активность по методу Нельсона составляет 10 - 12 ед./мл культуральной жидкости. Изучаемый штамм выделен из почвы, аэроб, растет на жидких и агаризованных средах. Оптимальная температура роста 28 - 30 °С, оптимальный рН 6 - 8. Наиболее интенсивный рост наблюдается на агаризованном пивном сусле 7 °Б, для выращивания могут также использоваться картофельно-сахарозный агар, агаризованная среда Чапека, среда Чапека - Докса. Предельно допустимая концентрация (ПДК) в воздухе рабочей зоны - 2000 кл./куб. м, пометка А. ## 3. Пределы измерений Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток плесневого гриба в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95. ## 4. Метод измерений Метод основан на аспирации из воздуха клеток плесневого гриба на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам и ярко-оранжевому окрашиванию субстрата на 3 - 4 сутки. Вопрос о корреляции между пигментной и ферментативной активностью плесневого гриба требует дополнительных исследований. ## 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. ### 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) ТУ 64-12791-77 Термостаты электрические суховоздушные или водяные Автоклав электрический ГОСТ 9586-75 Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200 Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211 Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83 Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные диаметром 100 мм Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Секундомер ГОСТ 9586-75 Барометр ГОСТ 24696-79 Марля медицинская ГОСТ 9412-77 Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81. ### 5.2. Реактивы, растворы Антибиотики группы аминогликозидов: канамицин, неомицин и др. Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Агаризованное пивное сусло 7 °Б для штамма- продуцента (агар - 1,8%, рН 6,8, режим стерилизации 1,1 - 1,2 атм. в течение 30 мин.). ## 6. Требования безопасности При выполнении измерений концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны соблюдают: - правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88; - правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора; - требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980); - положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977). Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами. ## 7. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований. ## 8. Условия измерений Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%. ## 9. Проведение измерений ### 9.1. Условия отбора проб воздуха Для определения концентрации клеток плесневого гриба воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды - пивное агаризованное сусло 7 °Б. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. ### 9.2. Выполнение анализа Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 4 сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента. Агаризованное пивное сусло 7 °Б расплавляют, остужают до 50 - 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор антибиотика (канамицин, неомицин и др.) из расчета 20 - 30 мг на 1 л среды (для подавления посторонней бактериальной микрофлоры), тщательно перемешивают и разливают по 10 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при температуре 28 - 30 °С. Через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию. ## 10. Вычисление результатов измерений Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле: N х 1000 Х = --------, кл./куб. м, V где: Х - концентрация клеток продуцента в воздухе; N - количество колоний продуцента, выросших на чашке; 1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха; V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации). В случае невозможности использования аппарата Кротова рекомендуем применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 30 мин. При использовании этого метода пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента: эмпирически установлено, что за 5 мин. на площадь 100 кв. см оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, следовательно, за 1 мин. - количество бактерий из 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 кв. см. Составляя пропорцию, определяем, что за 1 мин. на стеклянную чашку Петри оседают клетки, содержащиеся в 1,57 л воздуха. Количество клеток в 1 куб. м воздуха определяем по вышеприведенной формуле, где V = 1,57 л/мин. х t (время аспирации, мин.). Предлагаемый метод является ориентировочным и может быть использован как вспомогательный метод. ## 11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по форме. Протокол N _____
количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Penicillium funiculosum F-149 в воздухе рабочей зоны Дата проведения анализа ______________________________ Место отбора пробы ___________________________________
Название лаборатории _________________________________
Юридический адрес организации ________________________ Результаты микробиологического анализа | Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м | | --- | --- | --- |
Ответственный исполнитель
Научный руководитель ## Список литературы 1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования". 2. [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).
---