--- title: "\"МУК 4.2.1068-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1068-01" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1068-01" --- ## "МУК 4.2.1068-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны. Методические указания" # "МУК 4.2.1068-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны. Методические указания" (утв. Минздравом России 20.09.2001) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 20 сентября 2001 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
20 сентября 2001 года #### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ КЛЕТОК** **ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА ТИЛОЗИНА STREPTOMYCES FRADIAE БС-1** **В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.1068-01**
Дата введения:
с момента утверждения
1. Разработаны д.м.н. Ивановым Н.Г., к.б.н. Шенной Н.И. (Российский государственный медицинский университет). 2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г.
3. Введены впервые.
## 1. Общие положения и область применения Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма-продуцента тилозина Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м воздуха. Методические указания разработаны с целью обеспечения микробиологического контроля штамма Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе производственных помещений биотехнологических производств и оценки соответствия уровня его содержания гигиеническим нормативам на основе учета требований ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". Методические указания предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий биотехнологических предприятий, микробиологических лабораторий научно-исследовательских институтов, работающих в области промышленной гигиены. ## 2. Биологическая характеристика штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 и его гигиенический норматив Систематическое положение штамма-продуцента Порядок Actinomycetales Класс Actinomycetes Семейство Streptomycetaceae Род Streptomyces Вид fradiae Штамм БС-1 Культурально-морфологические особенности штамма Штамм Streptomyces fradiae БС-1 является облигатным аэробом, растет на различных питательных средах: СР-6, СР-15, Гаузе-1, Ваксмана путем инкубирования в термостате при температуре 28 °С. Продолжительность развития составляет 10 - 15 суток. Четкие культурально-морфологические свойства штамма проявляются на агаризованной среде СР-15 на 3 день развития. На этой среде штамм образует 6 морфологических типов колоний, из которых наиболее характерный тип составляет более 70%. Изучаемый штамм представлен округлыми колониями до 9 мм в диаметре (в зависимости от плотности посева). Белый воздушный мицелий образуется в центре колонии и по периферии в виде одной, реже двух концентрических окружностей, край колоний не опушен. Профиль изогнутый, поверхность шероховатая, неопушенные части колоний гладкие, блестящие, кремовые. Структура мелкозернистая, по краю неопушенной части однородная. Консистенция плотная, пигмент с обратной стороны колоний желтовато-коричневый. Предельно допустимая концентрация Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны - 2000 кл/куб. м, пометка А, 3 класс опасности. ## 3. Пределы измерений Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента тилозина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 50000 клеток в 1 куб. м при доверительной вероятности 0,95. ## 4. Метод измерений Метод измерения концентрации штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 основан на аспирации аппаратом Кротова микробных клеток (спор, обрывков мицелия) на поверхность плотной питательной среды СР-15 и подсчете выросших колоний, которые выявляются при задержке роста тест-культуры (Bacillus subtilis), происходящего вследствие диффузии в агар антибиотика, выделяемого штаммом-продуцентом Streptomyces fradiae БС-1. При данном методе на чашке Петри после забора пробы может быть учтено до 50 колоний, т.к. большее количество колоний на чашке могут образовывать сливающиеся зоны лизиса, что приводит к занижению результатов. ## 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. ### 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) ТУ 64-12791-77 Термостаты электрические суховоздушные или водяные Автоклав электрический ГОСТ 9586-75 Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200 Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211 Водяная баня или водяной термостат Газовая горелка или спиртовка лабораторная Чашки Петри Петли бактериологические Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1, 5 и 10 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Секундомер ГОСТ 9586-75 Барометр ГОСТ 24696-79 Марля медицинская ГОСТ 9412-77
Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81.
### 5.2. Реактивы, растворы Среда СР-15, агаризованная питательная среда для продуцента тилозина (состав в %: меласса - 0,5, крахмал - 0,5, соевая мука - 0,5, кукурузный экстракт - 0,5, (NH ) SO - 0,1, 4 2 4 NaCl - 0,1, MgSO х 7H O - 0,05, СаСО - 0,2, 4 2 3 агар - 1,5; рН среды до стерилизации 7,0 - 7,2; режим стерилизации 1,1 - 1,2 атм., 40 - 50 мин.) Агаризованная среда Хоттингера, рН 6,8 - 7,0 Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Хлороформ Тетрациклина гидрохлорид Амфотерицин В для внутривенного введения Тест-культура Вас. subtilis вариант Л - музейный 2 штамм, споры хранят в виде водной суспензии при
температуре 4 °С.
## 6. Требования безопасности При выполнении измерений концентрации клеток продуцента Биовита и хлортетрациклина в воздухе рабочей зоны соблюдают: - правила техники безопасности при работе с химическими реактивами в соответствии с ГОСТ 12.1.005-88; - правила электробезопасности при работе с электроустановками в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкции по эксплуатации приборов; - требования, изложенные в руководстве "Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности" (1980); - положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977). ## 7. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований. ## 8. Условия измерений Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях в соответствии с ГОСТ 15150-69 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%. ## 9. Проведение измерений ### 9.1. Условия отбора проб воздуха Для определения концентрации Streptomyces fradiae БС-1 воздух производственных помещений аспирируют со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды СР-15 в чашку Петри, помещенную в аппарат Кротова. Аппарат Кротова перед каждым отбором воздуха тщательно протирают спиртом. На подвижный диск устанавливают чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Крышку прибора закрывают. После отбора пробы воздуха и остановки диска открывают крышку прибора, снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. В период отбора проб воздуха крышку чашки Петри хранят в стерильном пакете из бумаги, полиэтилена или других стерильных емкостях. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток штамма-продуцента в воздухе рабочей зоны. Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием места, времени и условий отбора. ### 9.2. Выполнение анализа Агаризованную среду СР-15 расплавляют и остужают до 50 - 60 °С. Затем добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде амфотерицин для инъекций из расчета 20 мкг на 1 л среды для подавления посторонней воздушной грибковой флоры, тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри по 10 мл. Чашки с застывшей средой помещают в термостат при 37 °С на сутки, после чего проросшие чашки бракуют. После отбора проб воздуха на чашки Петри в аппарате Кротова их помещают в термостат при температуре 28 - 30 °С на 48 ч. После инкубации чашки помещают в вытяжной шкаф. На внутреннюю поверхность наливают 1,5 мл хлороформа, чашку с посевом вверх донышком вставляют в крышку так, чтобы выросшие колонии бактерий находились в парах хлороформа не менее 20 - 30 мин. Затем каждую чашку вынимают из крышки, выливают оставшийся хлороформ, снова закрывают крышками и переносят в бокс. Чашки оставляют в боксе на 2 ч при комнатной температуре для преддиффузии. Затем чашки Петри заливают 5 мл агаризованной среды Хоттингера 7 с тест-культурой Вас. subtilis вариант Л из расчета 3 х 10 2
споровых клеток на 1 мл среды ([Государственная фармакопея](https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo) СССР,
изд. XI, 1989, с. 206). Чашки Петри с застывшей средой Хоттингера донышком вверх помещают в термостат при 37 °С на сутки. По окончании инкубации, т.е. через 3 суток после отбора пробы воздуха производят подсчет зон задержки роста тест-культуры, которые соответствуют числу проросших клеток штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1. Учитывают зоны диаметром не менее 5 мм. ## 10. Вычисление результатов измерений Расчет концентрации микробных клеток Streptomyces fradiae БС-1 в 1 куб. м воздуха производят по формуле: П х 1000 Х = --------, Т х В где: Х - количество микробных клеток в воздухе (1 куб. м); П - число зон задержки роста тест-культуры, что соответствует числу колоний, выросших на чашке Петри;
Т - время забора пробы воздуха, мин.;
В - скорость подачи воздуха, л/мин.; 1000 - коэффициент перевода 1 л в 1 куб. м. ## 11. Оформление результатов измерений
Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол N ____ количественного микробиологического анализа штамма-продуцента Streptomyces fradiae БС-1 в воздухе рабочей зоны Дата проведения анализа ______________________________
Место отбора пробы ___________________________________
Название лаборатории _________________________________ Юридический адрес организации ________________________ Результаты микробиологического анализа | Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м | | --- | --- | --- | Ответственный исполнитель Научный руководитель ## Список литературы 1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования". 2. [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.).
4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.).
5. [Государственная фармакопея](https://bukva.ai/docs/gf-xi-minzdrav-sssr-ministerstvo) СССР, 1989, изд. XI, с. 206.
---