--- title: "\"МУК 4.2.1067-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны. Методические указания\"" number: "МУК 4.2.1067-01" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-2-1067-01" --- ## "МУК 4.2.1067-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны. Методические указания" # "МУК 4.2.1067-01. 4.2. Методы контроля. Микробиологические факторы. Метод микробиологического измерения концентрации клеток микроорганизма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны. Методические указания" (утв. Минздравом России 20.09.2001) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 20 сентября 2001 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
20 сентября 2001 года #### 4.2 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОД МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ** **КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМА STREPTOMYCES CINNAMONENSIS** **НИЦБ 109 - ПРОДУЦЕНТА МОНЕНЗИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.2.1067-01**
Дата введения:
с момента утверждения 1. Разработаны к.б.н. Бару Р.В., к.б.н. Лапчинской А.В. (Государственный научный центр по антибиотикам). 2. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации - Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации 20 сентября 2001 г. 3. Введены впервые. ## 1. Общие положения и область применения Настоящие методические указания устанавливают методику проведения микробиологического количественного анализа концентрации клеток штамма Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 3000 клеток в 1 куб. м воздуха. Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования" и [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "Методики выполнения измерений". Методические указания предназначены для применения в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, аккредитованных в установленном порядке на право проведения микробиологических исследований. 2. Характеристика штамма-продуцента монензина Микроорганизм Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 является продуцентом антибиотика монензина. Штамм растет на различных агаризованных и жидких средах. Культура образует цепочки спор, обычно прямые или слегка извилистые, с гладкой оболочкой. На твердой питательной среде ISP на 3 сутки роста при температуре 28 °С образует округлые радиально-складчатые морщинистые колонии с кремовым или сероватым налетом, фестончатым краем и выпуклым более темным центром диаметром 1 - 2 мм. На шестые сутки инкубации размеры колонии достигают 3 - 5 мм, конфигурация и складчатость колоний не изменяется, образуется воздушный мицелий со спорами бежевато-серого цвета, в среду выделяет коричневый пигмент. Штамм устойчив к следующим антибиотикам: левомицетину (30 мкг/мл), линкомицину (15 мкг/мл), полимиксину М (100 мкг/мл), эритромицину (мкг/мл), тетрациклину (30 мкг/мл) и олеандомицину (15 мкг/мл). ПДК - 3000 р.з. кл./куб. м. ## 3. Пределы измерений Методика обеспечивает выполнение измерений количества клеток продуцента монензина в воздухе рабочей зоны в диапазоне концентраций от 100 до 5000 клеток в 1 куб. м воздуха при доверительной вероятности 0,95. ## 4. Метод измерений Метод основан на аспирации из воздуха клеток продуцента монензина на поверхность плотной питательной среды и подсчете выросших колоний по типичным морфологическим признакам. ## 5. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства и материалы. ### 5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы Прибор для бактериологического анализа воздуха, модель 818 (щелевой прибор Кротова) ТУ 64-12791 77 Термостаты электрические суховоздушные или водяные Автоклав электрический ГОСТ 9586-75 Бокс, оборудованный бактерицидными лампами Холодильник бытовой Весы лабораторные аналитические типа ВЛА-200 Микроскоп биологический с иммерсионной системой типа "Биолам" Л-211 Лупа с увеличением х10 ГОСТ 25706-83 Чашки Петри бактериологические плоскодонные стеклянные диаметром 100 мм Пробирки биологические вместимостью 20 и 35 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1,5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Пипетки мерные на 1,5, и 10 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Колбы конические вместимостью 250 и 500 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/bez-nazvaniya-2920) Секундомер ГОСТ 9586-75 Барометр ГОСТ 24696-79 Марля медицинская ГОСТ 9412-77 Вата медицинская гигроскопическая ГОСТ 25556-81. ### 5.2. Реактивы, растворы Антибиотики: левомицетин, линкомицин, полимиксин М, эритромицин, тетрациклин, олеандомицин и нистатин Спирт этиловый ректификат [ГОСТ 5962-67](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) Селективная среда для штамма-продуцента Среда ISP: Мальт-экстракт (Difco) - 1,5%, дрожжевой экстракт (Difco) - 0,5%, крахмал растворимый - 0,5%, мел химический осажденный - 0,3%, Бакто-агар (Difco) - 2,0%, вода дистиллированная - 100 мл, рН 7,2 - 7,4. ## 6. Требования безопасности При выполнении измерений концентрации клеток продуцента монензина в воздухе рабочей зоны соблюдают: - правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005-88; - правила электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцию по эксплуатации прибора; - положения "Инструкций по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности" (1977). Все виды работ с реактивами проводят только в вытяжном шкафу при работающей вентиляции, работа с биологическим материалом осуществляется в боксе, оборудованном бактерицидными лампами. ## 7. Требования к квалификации операторов К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица с высшим или средним специальным образованием, прошедшие соответствующую подготовку и имеющие навыки работы в области микробиологических исследований. ## 8. Условия измерений Процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и влажности воздуха не более 80%. ## 9. Проведение измерений ### 9.1. Условия отбора проб воздуха Для определения продуцента монензина воздух аспирируют при помощи аппарата Кротова со скоростью 10 л/мин. на поверхность плотной питательной среды. Время аспирации воздуха (1 - 10 мин.) зависит от предполагаемой концентрации клеток продуцента. Аппарат Кротова перед каждым отбором пробы воздуха тщательно протирают спиртом. Особенно тщательно обрабатывают поверхность подвижного диска и внутреннюю стенку прибора, наружную и внутреннюю стенку крышки. На подвижный диск устанавливают подготовленную чашку Петри со средой, одновременно снимая с нее крышку. Прибор закрывают. Соприкосновение крышки прибора со средой недопустимо. После отбора пробы воздуха и остановки диска прибор открывают, быстро снимают чашку Петри и закрывают крышкой от данной чашки. На дне чашки Петри стеклографом отмечают точку контроля, время аспирации и дату отбора пробы. ### 9.2. Выполнение анализа Метод предполагает учет количества типичных по морфологическим признакам колоний, выросших на 3 - 6-е сутки после посева воздуха. Прямой метод позволяет учитывать на чашке до 200 колоний продуцента. Селективную среду расплавляют, остужают до 60 °С, добавляют свежеприготовленный в стерильной дистиллированной воде раствор одного из антибиотиков (левомицетин, линкомицин, цефалотин или другой, указанные в [разделе 2](#p100013)) для подавления посторонней бактериальной микрофлоры и нистатина (10 мкг/мл) для подавления грибковой флоры, тщательно перемешивают и разливают по 10 - 15 мл в стеклянные чашки Петри на горизонтальной поверхности. Чашки с застывшей средой помещают в термостат на сутки при температуре 37 °С, после чего проросшие чашки бракуют, стерильные чашки используют для контроля воздуха. После отбора проб воздуха чашки Петри помещают в термостат при 28 °С. Через 72 ч производят подсчет выросших типичных колоний продуцента. При необходимости культуру подвергают микроскопированию. ## 10. Вычисление результатов измерений Расчет концентрации клеток продуцента в пересчете на 1 куб. м воздуха производят по формуле: N х 1000 X = --------, кл./куб. м, V где: X - концентрация клеток продуцента в воздухе; N - количество колоний продуцента, выросших на чашке; 1000 - коэффициент пересчета на 1 куб. м воздуха; V - объем воздуха, л (произведение скорости на время аспирации). В случае невозможности использования аппарата Кротова рекомендуется применять метод седиментации клеток продуцента из воздуха непосредственно на чашки Петри с плотной питательной средой. Время отбора проб воздуха может составлять до 60 мин. При этом пользуются следующим расчетом концентрации клеток продуцента: эмпирически установлено, что за 5 мин. на площадь 100 кв. см оседает количество бактерий, содержащееся в 10 л воздуха, за 1 мин - 2 л воздуха. Площадь чашки Петри диаметром 100 мм равна 78,54 кв. см. Составляем пропорцию: на 100 кв. см за 1 мин. оседает 2 л воздуха на 78,54 кв. см - Х л. Х = 1,57 л/мин. Следовательно, на стеклянную чашку Петри за 1 мин оседает количество бактерий, содержащееся в 1,57 л воздуха. Надо определить количество клеток в 1 куб. м воздуха. На 1 чашку (диаметр 100 мм) за 1 мин. оседает количество микробов, содержащееся в 1,57 л воздуха, за Т мин. - 1,57 х Тл. В этом количестве содержится N колониеобразующих единиц (микробных клеток - спор, обрывков мицелия), а в 1 куб. м воздуха содержится: N х 1000 N х 636,9 -------- = ---------. 1,57 х T T Пример: за 30 мин. седиментации выросло 12 колоний микроорганизма. В 1 куб. м воздуха содержится: 12 х 636,9 ---------- = 253 клетки. 30 ## 11. Оформление результатов измерений Результаты измерений оформляют протоколом по форме.
Протокол N _____
количественного микробиологического анализа штамма
Streptomyces cinnamonensis НИЦБ 109 - продуцента монензина
в воздухе рабочей зоны Дата проведения анализа ________________________________ Место отбора пробы _____________________________________ Название лаборатории ___________________________________ Юридический адрес организации __________________________ Результаты микробиологического анализа | Шифр или N пробы | Определяемый микроорганизм | Концентрация, кл./куб. м | | --- | --- | --- | Ответственный исполнитель Научный руководитель ## Список литературы 1. ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования". 2. [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) "ГСИ. Методики выполнения измерений". 3. Положение об организации работы по технике безопасности в микробиологической промышленности (М., 1980, 27 с.). 4. Инструкции по устройству, требованиям безопасности и личной гигиены при работе в микробиологических лабораториях предприятий микробиологической промышленности (М., 1977, 7 с.). ---