---
title: "\"МУК 4.1.815-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций дибиомицина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.815-99"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-815-99"
---

## "МУК 4.1.815-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций дибиомицина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.815-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентраций дибиомицина в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом России 30.12.1999)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 30 декабря 1999 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
30 декабря 1999 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИЙ ДИБИОМИЦИНА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100005"></a>**МУК 4.1.815-99**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

<div align="center">

с момента утверждения

</div>


<a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены коллективом специалистов в рамках Проблемной Комиссии "Научные основы гигиены труда и профпатологии". Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в декабре 1999 г.
<a id="p100007"></a>Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны [(сборник 35)](https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-822-99) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.
<a id="p100008"></a>Методические указания разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования".
<a id="p100009"></a>Методики выполнены с использованием современных методов исследования, метрологически аттестованы и дают возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в [ГН 2.2.5.686-98](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-4) "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны" и [ГН 2.2.5.687-98](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-3) "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

<a id="p100010"></a>(Структурная формула не приводится)
<a id="p100011"></a>М. м. 1216,1
<a id="p100012"></a>Дибиомицин - {N,N'-дибензилэтилендиаминовая соль хлортетрациклина, или 7-хлор-4-(диметиламино)-1,4,4а,5,5а,6,11,12-октагидро-3,6,10,12,12а-пентагидрокси-6-метил-1,11-диоксо-2-нафтаненкарбоксамид, соединение с 1 N,N'-бис-(фенилметил)-1,2-этандиамином (2:1)} - кристаллическое вещество светло-коричневого цвета. Растворим в водных растворах минеральных кислот и фосфатных буферах с pH выше 7,2. Мало растворим в воде. pH насыщенного раствора 6,0 - 7,0. Не растворим в этиловом и метиловом спиртах. Ограниченно растворим в ацетонитриле. Не растворим в эфире и хлороформе. Разлагается при нагревании свыше 100 °С.
<a id="p100013"></a>В воздухе находится в виде аэрозоля.
<a id="p100014"></a>Обладает общетоксическим действием.
<a id="p100015"></a>ПДК в воздухе - 0,1 мг/куб м.


### <a id="p100016"></a>Характеристика метода


<a id="p100017"></a>Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.
<a id="p100018"></a>Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.
<a id="p100019"></a>Нижний предел измерения дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы - 0,225 мкг.
<a id="p100020"></a>Нижний предел измерения в воздухе дибиомицина - 0,05 мг/куб. м (при отборе 50 л воздуха).
<a id="p100021"></a>Диапазон измеряемых концентраций в воздухе дибиомицина от 0,05 до 1 мг/куб. м.
<a id="p100022"></a>Определению не мешает присутствие доксорубицина и рубомицина.
<a id="p100023"></a>Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.
<a id="p100024"></a>Время выполнения измерения, включая отбор пробы, около 30 минут.


### <a id="p100025"></a>Приборы, аппаратура, посуда


<a id="p100026"></a>Микроколоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором.
<a id="p100027"></a>Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром <...> мм, заполненная сорбентом "Силасорб CN" с размером зерен <...> мкм.
<a id="p100028"></a>Электроаспиратор ЭА-1, ОСТ 95.10052-84.
<a id="p100029"></a>Фильтродержатель, ТУ 95-7205-77.
<a id="p100030"></a>Микроскоп отсчетный типа МПБ-2, ТУ 3.3-824-79.
<a id="p100031"></a>Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа).
<a id="p100032"></a>Колбы мерные вместимостью 25, 100 мл и 1 л, ГОСТ 1770-74.
<a id="p100033"></a>Пипетки вместимостью 10 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74).
<a id="p100034"></a>Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 мл, ГОСТ 10515-75.


### <a id="p100035"></a>Реактивы, растворы и материалы


<a id="p100036"></a>Дибиомицин фармакопейный, содержание основного вещества не менее 98%.
<a id="p100037"></a>Калий марганцовокислый (калий перманганат), ТУ 20490-75.
<a id="p100038"></a>Ацетонитрил очищенный. Ацетонитрил очищенный получают из ацетонитрила, ТУ 6-09-3534-82, ч., путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 81,6 °С (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °С.
<a id="p100039"></a>    Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный, Na НРО  x 12Н О
                                                     2   4      2
(динатрийфосфат), ТУ 4172-76.
<a id="p100040"></a>    Калий  фосфорнокислый  однозамещенный  KH PO   (калий фосфат),
                                             2  4
[ТУ 4198-75](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75).
<a id="p100041"></a>0,067 М раствор динатрийфосфата готовят растворением 23,986 г натрия фосфорнокислого двузамещенного 12-водного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.
<a id="p100042"></a>0,067 М раствор калийфосфата готовят растворением 9,078 г калия фосфорнокислого однозамещенного в воде в мерной колбе вместимостью 1 л.
<a id="p100043"></a>0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) готовят смешивая 720 мл 0,067 М раствора динатрийфосфата и 280 мл 0,067 М раствора калий фосфата.
<a id="p100044"></a>Фосфатный буфер устойчив при хранении в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100045"></a>Растворитель: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2).
<a id="p100046"></a>Элюент: 0,067 М фосфатный буфер (pH 7,2) - ацетонитрил (7:1).
<a id="p100047"></a>Стандартный раствор N 1 с концентрацией дибиомицина 500 мкг/мл готовят растворением 0,05 г дибиомицина в растворителе в мерной колбе вместимостью 100 мл.
<a id="p100048"></a>Стандартный раствор N 2 с концентрацией дибиомицина 10 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 растворителем. Растворы устойчивы в течение суток.
<a id="p100049"></a>Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 85-743-80.


### <a id="p100050"></a>Отбор пробы воздуха


<a id="p100051"></a>Воздух с объемным расходом 5 мл/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 0,5 ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха.
<a id="p100052"></a>Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.


### <a id="p100053"></a>Подготовка к измерению


<a id="p100054"></a>Хроматографическая колонка промышленного изготовления.
<a id="p100055"></a>Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с концентрацией от 0,0005 до 0,01 мкг/мкл путем соответствующего разбавления стандартного раствора N 2 растворителем.
<a id="p100056"></a>Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике в закрытых сосудах.
<a id="p100057"></a>Инжектируют в хроматограф от 0,225 до 4,5 мкг дибиамицина. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл градуировочного раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после чего наносят еще 150 мкл хроматографируемого раствора и включают подачу элюента.
<a id="p100058"></a>Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

<a id="p100059"></a>    Скорость подачи элюента (0,067 М фосфатный        200 мкл/мин.
<a id="p100060"></a>    буфер (pH 7,2) - ацетонитрил, 7:1)
<a id="p100061"></a>    Длина волны УФ-детектора                          300 нм
<a id="p100062"></a>    Скорость движения диаграммной ленты               1,5 мм/мин.
<a id="p100063"></a>    Диапазон чувствительности детектора               0,4
<a id="p100064"></a>    Диапазон измерения самопишущего потенциометра     50 мВ
<a id="p100065"></a>    Объем вводимой пробы                              450 мкл
<a id="p100066"></a>    Время удерживания дибиомицина                     4 мин.
<a id="p100067"></a>    Элюирующий объем                                  800 мкл
<a id="p100068"></a>    Эффективность колонки по дибиомицину              100 тт

<a id="p100069"></a>На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочный график, выражающий зависимость площади пиков (кв. мм) от содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы (мкл).
<a id="p100070"></a>Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.


### <a id="p100071"></a>Проведение измерения


<a id="p100072"></a>Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл растворителя и оставляют на 15 минут при комнатной температуре и периодическом помешивании. Степень десорбции с фильтра дибиомицина - не менее 96,5%.
<a id="p100073"></a>450 мкл анализируемого раствора инжектируют в колонку хроматографа. Для этого набирают в капилляр микродозатора 100 мкл растворителя, затем 150 мкл раствора и наносят набранные 250 мкл на колонку со скоростью 200 мкл/мин. Операцию повторяют 2 раза, после чего наносят еще 150 мкл раствора и включают подачу элюента.
<a id="p100074"></a>Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков.
<a id="p100075"></a>Количественное определение содержания дибиомицина в хроматографируемом объеме проводят по соответствующему предварительно построенному градуировочному графику.


### <a id="p100076"></a>Расчет концентрации


<a id="p100077"></a>Концентрацию дибиомицина "С" в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

                                а х в
<a id="p100078"></a>                            C = -----,
                                б х V

<a id="p100079"></a>где:
<a id="p100080"></a>а - содержание дибиомицина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;
<a id="p100081"></a>б - объем пробы, взятый для анализа, мл;
<a id="p100082"></a>в - общий объем анализируемого раствора, мл;
<a id="p100083"></a>V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. [Приложение 1](#p100084)).






## <a id="p100084"></a>Приложение 1


<a id="p100085"></a>Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:

                          V  (273 + 20) х Р
                           t
<a id="p100086"></a>                     V = ------------------,
                         (273 + t) х 101,33

    где:
    V  - объем воздуха, отобранный для анализа, л;
     t
    Р  - барометрическое давление, кПа
(101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
    t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
<a id="p100087"></a>    Для   удобства   расчета   V   следует  пользоваться  таблицей
                                20
коэффициентов [(Приложение 2)](#p100089). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V  на соответствующий коэффициент.
                        t





<a id="p100088"></a>Приложение 2

<div align="right">

<a id="p100089"></a>**КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА**

</div>

<div align="center">

**ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">°С</td><td colspan="10">Давление Р, кПа/мм рт. ст.</td></tr>
<tr><td>97,33/ 730</td><td>97,86/ 734</td><td>98,4/ 738</td><td>98,93/ 742</td><td>99,46/ 746</td><td>100/750</td><td>100,53/ 754</td><td>101,06/ 758</td><td>101,33/ 760</td><td>101,86/ 764</td></tr>
<tr><td>-30</td><td>1,1582</td><td>1,1646</td><td>1,1709</td><td>1,1772</td><td>1,1836</td><td>1,1899</td><td>1,1963</td><td>1,2026</td><td>1,2058</td><td>1,2122</td></tr>
<tr><td>-26</td><td>1,1393</td><td>1,1456</td><td>1,1519</td><td>1,1581</td><td>1,1644</td><td>1,1705</td><td>1,1768</td><td>1,1831</td><td>1,1862</td><td>1,1925</td></tr>
<tr><td>-22</td><td>1,1212</td><td>1,1274</td><td>1,1336</td><td>1,1396</td><td>1,1458</td><td>1,1519</td><td>1,1581</td><td>1,1643</td><td>1,1673</td><td>1,1735</td></tr>
<tr><td>-18</td><td>1,1036</td><td>1,1097</td><td>1,1158</td><td>1,1218</td><td>1,1278</td><td>1,1338</td><td>1,1399</td><td>1,1460</td><td>1,1490</td><td>1,1551</td></tr>
<tr><td>-14</td><td>1,0866</td><td>1,0926</td><td>1,0986</td><td>1,1045</td><td>1,1105</td><td>1,1164</td><td>1,1224</td><td>1,1284</td><td>1,1313</td><td>1,1373</td></tr>
<tr><td>-10</td><td>1,0701</td><td>1,0760</td><td>1,0819</td><td>1,0877</td><td>1,0986</td><td>1,0994</td><td>1,1053</td><td>1,1112</td><td>1,1141</td><td>1,1200</td></tr>
<tr><td>-6</td><td>1,0540</td><td>1,0599</td><td>1,0657</td><td>1,0714</td><td>1,0772</td><td>1,0829</td><td>1,0887</td><td>1,0945</td><td>1,0974</td><td>1,1032</td></tr>
<tr><td>-2</td><td>1,0385</td><td>1,0442</td><td>1,0499</td><td>1,0556</td><td>1,0613</td><td>1,0669</td><td>1,0726</td><td>1,0784</td><td>1,0812</td><td>1,0869</td></tr>
<tr><td>0</td><td>1,0309</td><td>1,0366</td><td>1,0423</td><td>1,0477</td><td>1,0535</td><td>1,0591</td><td>1,0648</td><td>1,0705</td><td>1,0733</td><td>1,0789</td></tr>
<tr><td>+2</td><td>1,0234</td><td>1,0291</td><td>1,0347</td><td>1,0402</td><td>1,0459</td><td>1,0514</td><td>1,0571</td><td>1,0627</td><td>1,0655</td><td>1,0712</td></tr>
<tr><td>+6</td><td>1,0087</td><td>1,0143</td><td>1,0198</td><td>1,0253</td><td>1,0309</td><td>1,0363</td><td>1,0419</td><td>1,0475</td><td>1,0502</td><td>1,0557</td></tr>
<tr><td>+10</td><td>0,9944</td><td>0,9999</td><td>1,0054</td><td>1,0108</td><td>1,0162</td><td>1,0216</td><td>1,0272</td><td>1,0326</td><td>1,0353</td><td>1,0407</td></tr>
<tr><td>+14</td><td>0,9806</td><td>0,9860</td><td>0,9914</td><td>0,9967</td><td>1,0027</td><td>1,0074</td><td>1,0128</td><td>1,0183</td><td>1,0209</td><td>1,0263</td></tr>
<tr><td>+18</td><td>0,9671</td><td>0,9725</td><td>0,9878</td><td>0,9880</td><td>0,9884</td><td>0,9936</td><td>0,9989</td><td>1,0043</td><td>1,0069</td><td>1,0122</td></tr>
<tr><td>+20</td><td>0,9605</td><td>0,9658</td><td>0,9711</td><td>0,9783</td><td>0,9816</td><td>0,9868</td><td>0,9921</td><td>0,9974</td><td>1,0000</td><td>1,0053</td></tr>
<tr><td>+22</td><td>0,9539</td><td>0,9592</td><td>0,9645</td><td>0,9696</td><td>0,9749</td><td>0,9800</td><td>0,9853</td><td>0,9906</td><td>0,9932</td><td>0,9985</td></tr>
<tr><td>+24</td><td>0,9475</td><td>0,9527</td><td>0,9579</td><td>0,9631</td><td>0,9683</td><td>0,9735</td><td>0,9787</td><td>0,9839</td><td>0,9865</td><td>0,9917</td></tr>
<tr><td>+26</td><td>0,9412</td><td>0,9464</td><td>0,9516</td><td>0,9566</td><td>0,9618</td><td>0,9669</td><td>0,9721</td><td>0,9773</td><td>0,9799</td><td>0,9851</td></tr>
<tr><td>+28</td><td>0,9349</td><td>0,9401</td><td>0,9453</td><td>0,9503</td><td>0,9555</td><td>0,9605</td><td>0,9657</td><td>0,9708</td><td>0,9734</td><td>0,9785</td></tr>
<tr><td>+30</td><td>0,9288</td><td>0,9339</td><td>0,9391</td><td>0,9440</td><td>0,9432</td><td>0,9542</td><td>0,9594</td><td>0,9645</td><td>0,9670</td><td>0,9723</td></tr>
<tr><td>+34</td><td>0,9167</td><td>0,9218</td><td>0,9268</td><td>0,9318</td><td>0,9368</td><td>0,9418</td><td>0,9468</td><td>0,9519</td><td>0,9544</td><td>0,9595</td></tr>
<tr><td>+38</td><td>0,9049</td><td>0,9099</td><td>0,9149</td><td>0,9199</td><td>0,9248</td><td>0,9297</td><td>0,9347</td><td>0,9397</td><td>0,9421</td><td>0,9471</td></tr>
</table>







## <a id="p100114"></a>Приложение 3


<div align="center">

<a id="p100115"></a>Не приводится

<a id="p100116"></a>Рис. 1. Схема соединения колонок

</div>




<a id="p100113"></a>

---