МУК 4.1.766-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Газохроматографический метод количественного определения ароматических аминосоединений (анилин, N-метиланилин, О-толуидин, N,N-диметиланилин, N-этиланилин, N,N-диэтиланилин) в биосредах (моча). Методические указания
Актуально на 08.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.766-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Газохроматографический метод количественного определения ароматических аминосоединений (анилин, N-метиланилин, О-толуидин, N,N-диметиланилин, N-этиланилин, N,N-диэтиланилин) в биосредах (моча). Методические указания". МУК 4.1.766-99. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-766-99
(утв. Минздравом России 06.07.1999)
Примечание
Документ введен в действие с 6 сентября 1999 года.
6 июля 1999 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АРОМАТИЧЕСКИХ АМИНОСОЕДИНЕНИЙ (АНИЛИН, N-МЕТИЛАНИЛИН, О-ТОЛУИДИН, N,N-ДИМЕТИЛАНИЛИН, N-ЭТИЛАНИЛИН, N,N-ДИЭТИЛАНИЛИН) В БИОСРЕДАХ (МОЧА)
МУК 4.1.766-99
Дата введения 6 сентября 1999 года
1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С., к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии).
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 «Методики выполнения измерений» и ГОСТа Р 1.5-92 «Общие требования к построению, изложению, оформлению и содержанию стандартов». Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение ароматических аминосоединений в моче в диапазоне концентраций:
анилин 0,045 - 2,0 мкг/куб. см; N-метиланилин 0,060 - 3,2 мкг/куб. см; о-толуидин 0,040 - 4,2 мкг/куб. см; N,N-диметиланилин 0,050 - 5,2 мкг/куб. см; N-этиланилин 0,045 - 3,0 мкг/куб. см; N,N-диэтиланилин 0,150 - 5,2 мкг/куб. см.
Особенностью токсического действия ароматических аминосоединений являются функциональные нарушения центральной нервной системы, печени. Ароматические аминосоединения вызывают дерматиты, экземы и развитие аллергии.
АНИЛИН Мол. масса — 93,12 C H NH
6 5 2 Анилин - маслянистая прозрачная светло-желтая жидкость со специфическим запахом. Т - 184,4 °С, Т - минус 5,89 °С. кип плавл Анилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в
воде. Анилин относится ко 2 классу опасности.
N-МЕТИЛАНИЛИН Мол. масса — 107,50 C H NHCH
6 5 3 N-метиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. Т - 195,7 °С, Т - минус 57,0 °С. кип плавл N-метиланилин растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-метиланилин относится к 3 классу
опасности.
О-ТОЛУИДИН Мол. масса — 107,15 C H NH CH
6 4 2 3 О-толуидин - маслообразная прозрачная жидкость от светло-желтого до красновато-коричневого цвета. Т - 199,7 °С,
кип
Т — минус 24,4 °С. О-толуидин растворим в органических плавл растворителях и труднорастворим в воде. О-толуидин относится ко 2 классу опасности.
N,N-ДИМЕТИЛАНИЛИН Мол. масса — 121,18 C H N(CH )
6 5 3 2 N,N-диметиланилин - маслянистая прозрачная жидкость желтого цвета со специфическим запахом. Т - 194,0 °С, Т - 2,45 °С. кип плавл N,N-диметиланилин растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. N,N-диметиланилин относится ко 2 классу
опасности.
N-ЭТИЛАНИЛИН Мол. масса — 121,1 C H NC H
6 5 2 5 N-этиланилин - маслянистая прозрачная жидкость с желтым оттенком со специфическим запахом. Т - 204,7 °С, N-этиланилин
кип
растворим в органических растворителях и труднорастворим в воде. N-этиланилин относится к 4 классу опасности.
N,N-ДИЭТИЛАНИЛИН Мол. масса — 149,23 C H N(C H ) 6 5 2 5 2
N,N-диэтиланилин — маслянистая прозрачная жидкость желтоватого
цвета со специфическим запахом. Т - 216,27 °С. Т - минус
кип плавл
38,8 °С. N,N-диэтиланилин растворим в органических растворителях
и малорастворим в воде. N,N-диэтиланилин относится к 4 классу
опасности.
ДИФЕНИЛ Мол. масса — 154,21 C H C H 6 5 6 5
Дифенил - бесцветные кристаллы. Т - 255,9 °С, Т - кип плавл 71,0 °С. Дифенил не растворим в воде, растворим в органических
растворителях.
ХЛОРОФОРМ Мол. масса — 119,38 CHCl 3
Хлороформ - бесцветная жидкость с характерным сладковатым запахом. Т - 61,15 °С, Т - минус 63,5 °С. Хлороформ кип плавл растворим в этаноле, эфире, бензоле, ацетоне и сероуглероде,
малорастворим в воде. Хлороформ относится ко 2 классу опасности.
Методика обеспечивает выполнение измерений с суммарной погрешностью результата измерений:
анилин 12,4%; N-метиланилин 11,8%; о-толуидин 15,0%; N,N-диметиланилин 10,0%;
N,N-диэтиланилин 15,4% при доверительной вероятности 0,95.
СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Методика основана на предварительном концентрировании анализируемых соединений из биологического материала экстракцией хлороформом и последующем газохроматографическом анализе хлороформенного экстракта.
Измерение концентрации ароматических аминосоединений выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
Нижний предел измерения в объеме пробы:
анилин 0,045 мкг; N-метиланилин 0,060 мкг; о-толуидин 0,040 мкг;
Определению не мешают ацетон, ароматические углеводороды и алифатические спирты. Длительность анализа, включая экстракцию пробы, — 40 мин.
СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ
При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
Хроматограф газовый с пламенно-ионизационным детектором
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-80Е
Секундомер "Агат" ГОСТ 5072-79Е Микрошприцы МШ-10 ТУ 5Е2.833.106 Посуда лабораторная стеклянная ГОСТ 1770-84 Колбы мерные вместимостью 100, 1000 куб. см ГОСТ 1770-74Е
Пипетки вместимостью 1, 5, 10 куб. см ГОСТ 20292-74
Воронка делительная ГОСТ 23932-79.
Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм
Редуктор кислородный ТУ 26-05-235 70
Ротационный испаритель типа ИР-1,
Центрифуга СМ-4, 3000 об./мин.
0,16 — 0,20 мм — неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
Анилин ч.д.а. ГОСТ 5810-78 N-метиланилин технический ТУ 6-02-571-81 N,N-диметиланилин ч.д.а. ГОСТ 5855-78 О-толуидин ч.д.а. ГОСТ 10205-73 N-этиланилин технический ТУ 6214-12-37-77 N,N-диэтиланилин ч.д.а. ГОСТ 10162-75
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72
Хлороформ фарм. ГОСТ 20015-88.
ТРЕБОВАНИЯ К БЕЗОПАСНОСТИ
Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям «Пожарных норм проектирования зданий и сооружений» (СНиП ПА-5-700) и «Санитарных норм проектирования промышленных предприятий» (СН 245-71) и СНиП-74.
При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях», утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981) и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА
К выполнению измерений допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы на газовом хроматографе.
УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
- температура воздуха (20 +/- 5) °С;
- атмосферное давление 630 — 800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха — не более 80% при температуре 25 °С.
Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую исследуемых компонентов, и готовят серию рабочих стандартных растворов.
Стандартные растворы аминосоединений и внутреннего стандарта готовят в мерных колбах вместимостью 100 куб. см с содержанием этих веществ 20, 30, 50, 60, 70 мг и дифенила с содержанием 100, 90, 70, 60, 50 мг в хлороформе.
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, гексаном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 55 куб. см/мин. при температуре 300 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
Градуировочную характеристику устанавливают методом внутреннего стандарта (в качестве внутреннего стандарта - дифенил). Она выражает зависимость калибровочных коэффициентов (K ) от отношения площадей пиков на хроматограмме (S / S ) и i/ст i ст строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Для этого в каждую колбу вместимостью 100 куб. см вносят небольшое количество хлороформа и взвешивают, затем прибавляют
аминосоединения и внутренний стандарт и взвешивают колбу повторно.
Объем доводят до метки хлороформом и по разности результатов первого и второго взвешиваний вычисляют массу аминосоединений и
внутреннего стандарта. Срок хранения — 3 ч.
СТАНДАРТНЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ
АМИНОСОЕДИНЕНИЙ (ФРАГМЕНТ ШКАЛЫ)
| Номер смеси для градуировки | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|---|
| Масса АНИЛИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса N-МЕТИЛАНИЛИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса О-ТОЛУИДИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса N,N-ДИМЕТИЛАНИЛИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса N-ЭТИЛАНИЛИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса N,N-ДИЭТИЛАНИЛИНА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 2,0 | 3,0 | 5,0 | 6,0 | 7,0 |
| Масса ДИФЕНИЛА в 10 куб. мм хлороформа, мкг | 10,0 | 9,0 | 7,0 | 6,0 | 5,0 |
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 10 куб. мм каждого стандартного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок 110 °С; температура испарителя 180 °С; температура детектора 120 °С, скорость программирования температуры 3 °С/мин.; расход газа-носителя (гелия) 55 куб. см/мин.; расход водорода 33 куб. см/мин.; расход воздуха 300 куб. см/мин.;
-12
шкала измерителя тока 10 х 10 А; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч; время удерживания: хлороформа 1 мин. 45 с; анилина 6 мин. 15 с; N-метиланилина 9 мин.; о-толуидина 9 мин. 15 с; N,N-диметиланилина 9 мин. 50 с; N-этиланилина 11 мин.; N,N-диэтиланилина 20 мин.; дифенила 37 мин.
На хроматограмме находят значения площадей пиков и внутреннего стандарта и вычисляют калибровочные коэффициенты на основании анализа бинарных смесей: анилин — дифенил, N-метиланилин — дифенил, о-толуидин — дифенил, N,N-диметиланилин — дифенил, N-этиланилин — дифенил и N,N-диэтиланилин — дифенил. Значение калибровочного коэффициента вычисляют по формуле:
S х Q
ст i
K = --------,
i/ст S х Q
i ст
где:
S , S - площади пиков исследуемого компонента и стандарта,
i ст
кв. мм;
Q , Q - количество исследуемого компонента и стандарта, мг.
i ст
По результатам 5 измерений определяется среднее значение
калибровочного коэффициента K и строится градуировочный график
i/ст
в координатах калибровочный коэффициент — отношение площадей пиков
S / S . i ст
Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.
Отбор проб мочи в объеме 100 куб. см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
Анализируемую пробу мочи в количестве 100 куб. см помещают в делительную воронку, добавляют 30 г (хлорид натрия) и 10 куб. см хлороформа. Содержимое воронки интенсивно встряхивают 15 мин., после отстаивания хлороформенный экстракт сливают в пробирку и центрифугируют для денатурации белка 20 мин. Полученный центрифугат упаривают на ротационном испарителе и проводят газохроматографический анализ.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
Расчет концентрации анилина, N-метиланилина, о-толуидина, N,N-диметиланилина, N-этиланилина, N,N-диэтиланилина (мкг/куб. см) в биопробе вычисляют по формуле:
S х m х K х 1000
i ст i/ст
С = -----------------------, S х V ст
где:
С - концентрация анализируемых соединений в биопробе,
мкг/куб. см;
S , S - площади пиков компонентов и стандарта, кв. мм;
i ст
K - калибровочный коэффициент;
i/ст
m - навеска стандарта, мг;
ст
V - объем пробы, куб. см.
ВНУТРЕННИЙ ОПЕРАТИВНЫЙ КОНТРОЛЬ
Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.
Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
S - S
max min
где:
S - площадь пика, кв. мм;
_
S - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе 3
параллельных проб градуировочного раствора.
Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 — 150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X'. Результаты анализа исходной рабочей пробы X и рабочей пробы с добавкой X' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
где:
С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией
мкг/куб. см; К — норматив оперативного контроля погрешности, мкг/куб. см. Д
При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают:
_________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , Д Х' Х 2 2 где ДЕЛЬТА и ДЕЛЬТА - характеристики погрешностей для Х' Х
Исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/куб. см.
ДЕЛЬТА = 0,165 х Х' и ДЕЛЬТА = 0,165 х Х. Х' Х
При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что:
При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.