МУК 4.1.764-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Газохроматографический метод количественного определения предельных (гексан, гептан) и ароматических (бензол, толуол, этилбензол, о-, м-, п-ксилол) углеводородов в биосредах (моча). Методические указания
Актуально на 08.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.764-99. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Газохроматографический метод количественного определения предельных (гексан, гептан) и ароматических (бензол, толуол, этилбензол, о-, м-, п-ксилол) углеводородов в биосредах (моча). Методические указания". МУК 4.1.764-99. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-764-99
(утв. Минздравом России 06.07.1999)
Примечание
Документ введен в действие с 6 сентября 1999 года.
6 июля 1999 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРЕДЕЛЬНЫХ (ГЕКСАН, ГЕПТАН) И АРОМАТИЧЕСКИХ (БЕНЗОЛ, ТОЛУОЛ, ЭТИЛБЕНЗОЛ, О-, М-, П-КСИЛОЛ) УГЛЕВОДОРОДОВ В БИОСРЕДАХ (МОЧА)
МУК 4.1.764-99
6 сентября 1999 года
1. Разработаны под редакцией академика РАЕН, д.м.н., проф. Зайцевой Н.В., к.б.н. Улановой Т.С, к.б.н. Нурисламовой Т.В., Карнажицкой Т.Д., Суетиной Г.Н., Поповой Н.В., Митрофановой В.М., Плаховой Л.В., Рудаковой Е.А. (ПНИКИ детской экопатологии).
2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 6 июля 1999 г.
Методические указания разработаны в соответствии с требованиями ГОСТа 8.563-96 «Методики выполнения измерений» и ГОСТа Р 1.5-92. Методика анализа метрологически аттестована и обеспечивает определение предельных и ароматических углеводородов в моче в диапазоне концентраций:
гексан — 0,030 — 1,0 мкг/куб. см;
гептан — 0,030 — 4,1 мкг/куб. см;
бензол — 0,005 — 0,5 мкг/куб. см;
толуол — 0,050 — 1,0 мкг/куб. см;
этилбензол — 0,005 — 0,1 мкг/куб. см;
п-, м-ксилол — 0,050 — 1,7 мкг/куб. см;
о-ксилол — 0,050 — 1,7 мкг/куб. см.
ГЕКСАН Мол. масса — 86,18 СН (СН ) СН
3 2 4 3 Гексан - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т -
кип
68,72 °С, Т — минус 95,34 °С. Гексан растворим в органических плавл растворителях и малорастворим в воде. Гексан — сильнейший наркотик, относится к 4 классу опасности.
ГЕПТАН Мол. масса — 100,20 СН (СН ) СН
3 2 5 3 Гептан - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т -
кип
98,42 °С, Т — минус 90,61 °С. Гептан растворим в плавл органических растворителях и малорастворим в воде. Гептан — сильнейший наркотик, относится к 4 классу опасности.
БЕНЗОЛ Мол. масса — 78,12 С Н 6 6
Бензол — бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т — кип 80,103 °С, Т — минус 5,533 °С. Бензол растворим в неполярных плавл органических растворителях и малорастворим в воде. Бензол в высоких концентрациях обладает выраженным наркотическим действием, относится ко 2 классу опасности.
ТОЛУОЛ Мол. масса — 92,14 С Н СН
6 5 3 Толуол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Толуол растворим в органических растворителях и малорастворим в воде. Толуол в высоких концентрациях обладает выраженным
наркотическим действием, относится к 4 классу опасности.
ЭТИЛБЕНЗОЛ Мол. масса — 106,17 С Н С Н 6 5 2 5
Этилбензол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т - 136,19 °С, Т - минус 94,98 °С. Этилбензол растворим кип плавл в органических растворителях и малорастворим в воде. Этилбензол в высоких концентрациях обладает ярко выраженным наркотическим
действием, относится к 3 классу опасности.
КСИЛОЛ (О-, М-, П-) Мол. масса — 106,17 С Н (СН )
6 4 3 2 О-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т - 144,41 °С, Т - минус 25,175 °С. О-ксилол растворим в кип плавл органических растворителях и не растворим в воде. О-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится
к 3 классу опасности.
М-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т - 139,1 °С, Т - минус 47,872 °С. М-ксилол растворим в кип плавл органических растворителях и не растворим в воде. М-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится
к 3 классу опасности.
П-ксилол - бесцветная жидкость со специфическим запахом. Т - 138,35 °С, Т - минус 13,26 °С. П-ксилол растворим в кип плавл органических растворителях и не растворим в воде. П-ксилол в высоких концентрациях обладает наркотическим действием, относится
к 3 классу опасности.
Общая погрешность метода определения:
СУЩНОСТЬ МЕТОДА
Методика основана на предварительном выделении предельных и ароматических углеводородов из биологического материала путем нагревания объекта и последующего газохроматографического анализа парогазовой фазы.
Измерение концентрации предельных и ароматических углеводородов выполняют методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием.
Определению не мешают ацетон, этанол и другие спирты.
Длительность анализа — 15 мин.
СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ
При выполнении применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы. Допускается применение других типов средств измерений, вспомогательного оборудования и химреактивов с аналогичными метрологическими характеристиками.
Хроматограф газовый с пламенно- ионизационным детектором
Весы лабораторные ВЛР-200 аналитические ГОСТ 24104-80Е
Секундомер "Агат" ГОСТ 5072-79Е Микрошприцы МШ-10 ТУ 5Е2.833.106 Шприцы медицинские стеклянные ТУ 64-1-378-83
вместимостью 5 куб. см
Колбы мерные вместимостью 100, 1000 куб. см ГОСТ 1770-74Е
Пипетки вместимостью 1, 5, 10 куб. см ГОСТ 20292-74.
Хроматографическая колонка стальная длиной 3 м и внутренним диаметром 3 мм
Редуктор кислородный ТУ 26-05-235-70.
Гелий в баллоне ТУ 51-940-80 Водород технический ГОСТ 3022-80 Воздух в баллоне ГОСТ 11882-73.
Apiezon L на хроматоне N-супер фракции 0,16 — 0,20 мм — неподвижная фаза для заполнения хроматографической колонки
Гептан ч. ГОСТ 25828-83
Бензол х.ч. ТУ 6-09-787-76 Толуол х.ч. ТУ 6-09-787-76 Этилбензол х.ч. ТУ 6-09-787-76 П-, м-ксилол х.ч. ТУ 6-09-915-76 О-ксилол ГСО 2913-84
Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72.
ТРЕБОВАНИЯ К БЕЗОПАСНОСТИ
Помещение для проведения измерений должно соответствовать требованиям «Пожарных норм проектирования зданий и сооружений» (СНиП ПА-5-700) и «Санитарных норм проектирования промышленных предприятий» (СН-245-71) и СНиП-74.
При выполнении работ должны быть соблюдены меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.004-85 и правила техники безопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.007-76.
При работе необходимо соблюдать «Правила по технике безопасности и производственной санитарии при работе в химических лабораториях», утверждены МЗ СССР 20.12.82 (М., 1981), и «Правила устройства и безопасной эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утверждены Госгортехнадзором СССР 27.11.87 (М.: Недра, 1989).
При работе с реактивом соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТу 12.1.005-88.
При выполнении измерений с использованием газового хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА
К выполнению измерений допускаются лица, прошедшие специализацию по работе на газовом хроматографе.
УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
При проведении процессов приготовления растворов и подготовки проб к анализу соблюдают следующие условия:
- температура воздуха (20 +/- 5) °С;
- атмосферное давление 630 — 800 мм рт. ст.;
- влажность воздуха — не более 80% при температуре 25 °С. Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией по прибору.
ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
Перед выполнением измерений проводят следующие работы: подготовка хроматографической колонки, приготовление стандартных смесей, установление градуировочной характеристики.
Для построения градуировочного графика собирают мочу, не содержащую определяемые компоненты, и готовят серию рабочих стандартных растворов.
Исходный стандартный раствор для градуировки: в колбу вместимостью 1000 куб. см с дистиллированной водой вводят микрошприцем 2 мкл бензола, по 10 куб. мм гексана, гептана, толуола и этилбензола, по 20 куб. мм п-, м-ксилола и о-ксилола. Весовое содержание компонентов в исходной стандартной смеси составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): гексан — 6,55 мкг/куб. см, гептан — 6,84 мкг/куб. см, бензол — 1,76 мкг/куб. см, толуол — 8,66 мкг/куб. см, этилбензол — 8,67 мкг/куб. см, п-, м-ксилол — 17,60 мкг/куб. см, о-ксилол — 17,60 мкг/куб. см. Срок хранения — 3 ч.
Хроматографическую колонку перед заполнением неподвижной фазой промывают дистиллированной водой, ацетоном, высушивают в токе инертного газа. Заполнение хроматографической колонки насадкой проводят под вакуумом. Концы колонки закрывают стекловатой и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (гелия) с расходом 30 куб. см/мин. при температуре 200 °С в течение 18 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору, записывают нулевую линию в рабочем режиме. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.
Градуировочную характеристику устанавливают методом абсолютной градуировки на градуировочных смесях предельных и ароматических углеводородов. Она выражает зависимость площади пика на хроматограмме (кв. мм) от массы компонента (мкг) и строится по 5 сериям стандартных растворов для градуировки. Каждую серию, состоящую из 5 стандартных растворов, готовят в мерных колбах объемом 100 куб. см. Для этого в каждую колбу вносят исходное вещество в соответствии с таблицей. Срок хранения — 3 ч.
СТАНДАРТНЫЕ СМЕСИ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ
ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ ПРЕДЕЛЬНЫХ
И АРОМАТИЧЕСКИХ УГЛЕВОДОРОДОВ (ФРАГМЕНТ ШКАЛЫ)
| Номер смеси для градуировки | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
|---|---|---|---|---|---|
| ГЕКСАН Объем исходной стандартной смеси (6,548 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание гексана, мкг/куб. см | 0,033 | 0,065 | 0,130 | 0,330 | 0,650 |
| ГЕПТАН Объем исходной стандартной смеси (6,84 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание гептана, мкг/куб. см | 0,034 | 0,068 | 0,140 | 0,340 | 0,680 |
| БЕНЗОЛ Объем исходной стандартной смеси (1,76 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание бензола, мкг/куб. см | 0,009 | 0,018 | 0,035 | 0,090 | 0,180 |
| ТОЛУОЛ Объем исходной стандартной смеси (8,66 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание толуола, мкг/куб. см | 0,04 | 0,09 | 0,17 | 0,43 | 0,87 |
| ЭТИЛБЕНЗОЛ Объем исходной стандартной смеси (8,67 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание этилбензола, мкг/куб. см | 0,04 | 0,09 | 0,17 | 0,43 | 0,87 |
| П-, М-КСИЛОЛ Объем исходной стандартной смеси (17,6 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание п-, м-ксилола, мкг/куб. см | 0,09 | 0,18 | 0,35 | 0,90 | 1,80 |
| О-КСИЛОЛ Объем исходной стандартной смеси (17,6 мкг/куб. см), куб. см | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 5,0 | 10,0 |
| Содержание о-ксилола, мкг/куб. см | 0,09 | 0,18 | 0,35 | 0,90 | 1,80 |
В хроматографическую колонку через испаритель вводят по 5 куб. см парогазовой пробы каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях:
температура термостата колонок 95 °С; температура испарителя 150 °С; температура детектора 100 °С; расход газа-носителя (гелия) 30 куб. см/мин.; расход водорода 30 куб. см/мин.; расход воздуха 300 куб. см/мин.;
-12
шкала измерителя тока 10 х 10 А; скорость диаграммной ленты 240 мм/ч; время удерживания: гексана 1 мин. 35 с; бензола 2 мин. 10 с; гептана 2 мин. 40 с; толуола 3 мин. 45 с; этилбензола 7 мин. 00 с; п-, м-ксилола 7 мин. 50 с; о-ксилола 8 мин. 30 с.
На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий строят градуировочную характеристику. Градуировку проверяют 1 раз в неделю и при смене партии реактивов.
Отбор проб мочи в объеме 100 куб. см производится в тщательно вымытый стеклянный сосуд с притертой пробкой. Анализ мочи проводить сразу или хранить в холодильнике не более 12 ч после отбора пробы.
ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
Во флакон из-под пенициллина помещают 5 куб. см исследуемой биопробы. Флакон закрывают резиновой пробкой и ставят в металлический цилиндр с просверленными в стенках отверстиями и навинчивающейся крышкой. Цилиндр с флаконом погружают на 2/3 высоты в кипящую водяную баню (прилож. А — не приводится). По истечении 5 мин. отбирают шприцем из флакона 5 куб. см парогазовой фазы и вводят ее в колонку хроматографа. На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию предельных и ароматических углеводородов в биопробе.
ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
На хроматограмме рассчитывают площадь пика и по градуировочной характеристике определяют концентрацию гексана, гептана, бензола, толуола, этилбензола, п-, м-ксилола, о-ксилола в биопробе.
Результат измерения содержания компонента в биопробе определяется путем трехкратного замера с учетом среднего квадратичного отклонения.
Результат анализа представляют в виде:
Х +/- 0,165 х Х , ср ср где Х - среднее значение замеренных концентраций, мкг/куб.
ср
см.
ВНУТРЕННИЙ ОПЕРАТИВНЫЙ КОНТРОЛЬ
Внутренний оперативный контроль качества результатов контрольного химического анализа (сходимость, воспроизводимость, точность) осуществляют с целью получения оперативной информации о качестве анализов и принятия при необходимости оперативных мер по его повышению (МИ 2335-95).
Контролируемым параметром является относительный размах выходных сигналов хроматографа при вводах трех параллельных проб градуировочного раствора. Контроль осуществляется при проведении градуировки, при периодическом контроле градуировочных коэффициентов, а также при выполнении измерений.
Результат контроля признается положительным при выполнении условия:
S - S
max min
где:
S - площадь пика в кв. мм;
_
S - среднее арифметическое значение площади пиков при вводе
3 параллельных проб градуировочного раствора.
Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
Образцами для контроля являются представительные пробы биосред, к которым делаются добавки в виде раствора. Отбирают 2 пробы и к одной из них делают добавку в виде раствора таким образом, чтобы их содержание увеличилось по сравнению с исходным на 50 — 150%. Каждую пробу анализируют в точном соответствии с прописью методики и получают результат анализа исходной рабочей пробы Х и рабочей пробы с добавкой Х'. Результаты анализа исходной рабочей пробы Х и рабочей пробы с добавкой Х' получают не по возможности, а в одинаковых условиях, т.е. их получает один аналитик с использованием одного набора мерной посуды, одной партии реактивов и т.д.
Результаты контроля признаются удовлетворительными, если выполняется условие:
где:
С - добавка к пробе в виде раствора с концентрацией, мкг/куб.
см; К — норматив оперативного контроля погрешности, мкг/куб. см. Д
При внешнем контроле (Р = 0,95) принимают:
_________________
/ 2 2 К = \/ДЕЛЬТА + ДЕЛЬТА , Д Х' Х 2 2 где ДЕЛЬТА и ДЕЛЬТА - характеристики погрешностей для Х' Х
исходной пробы и пробы с добавкой, мкг/куб. см.
ДЕЛЬТА = 0,165 х Х' и ДЕЛЬТА = 0,165 х Х. Х' Х
При внутрилабораторном контроле (Р = 0,90) принимают, что:
При превышении оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и их устраняют.