МУК 4.1.3869-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерения массовых концентраций фенола и его производных в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 09.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3869-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерения массовых концентраций фенола и его производных в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.3869-23. https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-3869-23
(утв. Роспотребнадзором РФ 23.06.2023)
Примечание
Документ введен в действие с 25.09.2023.
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 23 июня 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЯ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ФЕНОЛА И ЕГО ПРОИЗВОДНЫХ В КРОВИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3869-23
Дата введения 25 сентября 2023 года
1. Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки «Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Уланова Т.С., Зайцева Н.В., Карнажицкая Т.Д., Старчикова М.О.).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 23 июня 2023 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1 Настоящие методические указания (далее — МУК) устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для измерения массовых концентраций фенола и его производных (резорцина, пирокатехина) в крови в диапазоне от 0,005 мг/дм3 до 0,5 мг/дм3.
1.2 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1. Структурные формулы фенола, резорцина и пирокатехина представлены на рис. 1.
Рисунок 1. Структурные формулы фенола и его производных
2.1.1 Физико-химические свойства фенола (таблица 1).
Физико-химические свойства фенола
Фенол — бесцветные игольчатые кристаллы со специфическим резким запахом, хорошо растворим в полярных и неполярных растворителях. На воздухе фенол быстро окисляется и окрашивается в розовый цвет. Фенол используется в производстве бисфенола A, фенолформальдегидных смол, циклогексанола, антисептиков, пестицидов, антиоксидантов, косметических средств.
2.1.2 Физико-химические свойства резорцина (таблица 2).
Физико-химические свойства резорцина
Резорцин — двухатомный фенол, бесцветные кристаллы со специфическим запахом, обладает свойствами фенолов. Резорцин применяется в производстве красителей, полимеров, в медицине как обеззараживающее средство.
2.1.3. Физико-химические свойства пирокатехина (таблица 3).
Физико-химические свойства пирокатехина
Пирокатехин — белые или бесцветные кристаллы с фенольным запахом, хорошо растворим в диэтиловом эфире, ацетоне, этаноле, пиридине. Является сильным восстановителем, окисляется на воздухе и на свету. Применяют в фотографии как проявитель, в производстве красителей, лекарственных веществ, ванилина.
2.2 Токсикологические свойства фенола, резорцина, пирокатехина.
Фенол. Вдыхание паров и пыли фенола вызывает нарушение функций нервной системы. Пыль, пары и раствор фенола раздражают слизистые оболочки глаз, дыхательных путей, кожу, вызывая химические ожоги.
Резорцин. Вызывает раздражение органов дыхания, кожи.
Пирокатехин. Оказывает общетоксическое действие, вызывает раздражение кожи, повреждение глаз, проявляет мутагенные и канцерогенные свойства.
III. ПОКАЗАТЕЛИ ТОЧНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности результатов измерений и ее составляющих не превышают значений, приведенных в таблице 4.
Диапазоны измерений, значения показателей точности, правильности, повторяемости и внутрилабораторной прецизионности при доверительной вероятности 0,95
Границы относительной погрешности при доверительной вероятности P = 0,95 соответствуют относительной расширенной неопределенности измерений при коэффициенте охвата k = 2.
Значения показателя точности используют при:
- оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;
- оценке качества проведения измерений в лаборатории;
- оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.
IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ
4.1. Измерение массовых концентраций фенола, резорцина и пирокатехина в крови проводят методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с флуориметрическим детектированием в обращенно-фазовом режиме хроматографирования. Извлечение фенола, резорцина и пирокатехина из подкисленной крови проводят методом жидкостной экстракции смесью ацетонитрила и этилацетата в присутствии высаливателей с очисткой экстракта сорбентом. Степень экстракции фенола 89%, резорцина 87%, пирокатехина 52%. Количественное определение в экстракте проводят методом абсолютной градуировки.
Нижний предел измерения фенола в анализируемом объеме пробы (10 мкл) составляет 0,05 нг, резорцина 0,05 нг, пирокатехина 0,05 нг.
Определению фенола, резорцина и пирокатехина не мешают о,м,п-крезолы, бензойная кислота, гидрохинон.
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, МАТЕРИАЛЫ, РЕАКТИВЫ
5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в таблице 5.
Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы
| Наименование средств измерений, стандартных образцов, вспомогательных устройств, материалов и реактивов | Обозначение и наименование документов, в соответствии с которыми выпускают средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы |
| Средства измерений | |
| Жидкостный хроматограф с флуориметрическим детектором, включающий дегазатор, насос для смешивания двух растворителей, автосамплер | - |
| Весы лабораторные электронные II класса точности | ГОСТ Р 53228 |
| Колбы мерные: 2-25-2 2-50-2 2-100-2 2-500-2 | ГОСТ 1770 |
| Пипетки градуированные 1-1-2-1 1-1-2-5 1-1-2-10 | ГОСТ 29227 |
| Дозаторы жидкости механические одноканальные переменного объема с одноразовыми наконечниками вместимостью: 20 — 200 мм3 100 — 1000 мм3 | ГОСТ 28311 |
| Цилиндр 1-100-2 | ГОСТ 1770 |
| Примечание: Допускается использование других средств измерений утвержденных типов, обеспечивающих измерения с установленной точностью. | |
| Реактивы | |
| ГСО 8714-2005 Фенол в этаноле с массовой концентрацией 1 мг/см3 | - |
| СОП 0301-03 Пирокатехин с массовой долей 99,9% | - |
| СОП 0302-03 Резорцин с массовой долей 99,9% | - |
| Ацетонитрил для жидкостной хроматографии сорт «0» | ТУ 6-09-14-2167-84 |
| Этилацетат для жидкостной хроматографии | - |
| Дистиллированная вода | ГОСТ 58144 |
| Вода для лабораторного анализа | ГОСТ Р 52501 |
| Кислота ортофосфорная, х.ч. | ГОСТ 6552 |
| Уксусная кислота ледяная, х.ч. | ГОСТ 61 |
| Экстракционный набор <1> для анализа наркотических и лекарственных веществ. Состав набора: смесь буферных солей для экстракции (сульфат магния, хлорид натрия) и смесь для очистки экстракта (магния сульфат, сорбент C18) | - |
| Примечание: Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, изготовленных по другой документации. | |
| Вспомогательные устройства и материалы | |
| Хроматографическая колонка металлическая с обращенно-фазным сорбентом C18, длина 150 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, зернение 5 мкм | - |
| Предколонка, заполненная обращенно-фазным сорбентом C18, длина 12,5 мм, внутренний диаметр 4,6 мм, зернение 5 мкм | - |
| Шкаф сушильный электрический, диапазон рабочих температур от 50 °C до 200 °C | ТУ 92-00243346-01 |
| Система очистки воды, позволяющая получать дистиллированную воду | - |
| Шприц медицинский одноразовый типа «Луер», вместимость 2 см3 ГОСТ ИСО 7886 | |
| Фильтры шприцевые мембранные гидрофильные из политетрафторэтилена (ПТФЭ), диаметр фильтра 15 мм, размер пор 0,2 мкм | - |
| Установка для фильтрации растворителей | - |
| Вакуумный насос для фильтрации растворителей. Максимальное давление 0,025 МПа (2,5 бар) | - |
| Хроматографические виалы с завинчивающимися крышками, вместимость 2 см3 | - |
| Центрифуга с программированием температуры и допустимой скоростью центрифугирования 5000 об/мин | - |
| Пробирки полипропиленовые конические градуированные с завинчивающимися крышками, вместимость 15 см3 | - |
| Пробирки вакуумные для забора крови с напылением гепарина | - |
| Примечание: Допускается использование других вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным. | |
| -------------------------------- | |
<1> Например, Экстракционный набор Vetex Q Tox.
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При выполнении измерений соблюдают меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, имеются средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009 и соблюдаются правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
6.2. При работе в лаборатории необходимо соблюдать правила техники безопасности <2>.
<2> ПНД Ф 12.13.1-03 «Методические рекомендации. Техника безопасности при работе в аналитических лабораториях (общие положения)».
6.3. При работе с химическими реактивами соблюдают требования безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.1.005. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
6.4. При работе с биологическими средами соблюдают санитарно-эпидемиологические правила <3>.
<3> СанПиН 3.3686-21 «Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021 № 62500).
6.5. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать гигиенические нормативы <4>.
<4> СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания», утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 № 62296).
6.6. При выполнении измерений на жидкостном хроматографе соблюдают меры безопасности, указанные в руководстве по правилам эксплуатации прибора.
6.7. Утилизацию растворов после выполнения измерений проводят в соответствии с инструкцией по обращению с химическими отходами, действующей на предприятии.
VII. КВАЛИФИКАЦИЯ ОПЕРАТОРОВ
7.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются лица, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика с опытом работы на жидкостном хроматографе, освоившие метод измерений и получившие удовлетворительные результаты оперативного контроля процедуры измерений.
VIII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
8.1 При выполнении приготовления растворов и подготовке проб в лаборатории соблюдают следующие условия:
- температура воздуха плюс (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление от 84,0 до 106,7 кПа (630 — 800 мм рт. ст.);
- влажность воздуха при плюс 25 °C от 30 до 80%.
8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендуемых технической документацией прибора.
IX. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
9.1 Подготовка посуды.
Используемую посуду вымыть моющим раствором, промыть проточной водопроводной водой, ополоснуть дистиллированной водой и высушить в сушильном шкафу при температуре плюс 105 °C.
9.2 Приготовление растворов.
9.2.1 Подвижная фаза для элюирования.
Состав подвижной фазы — смесь ацетонитрила и 0,1%-го водного раствора уксусной кислоты в соотношении 35:65 (объемные доли) задают на двух каналах насоса жидкостного хроматографа.
9.2.2. Исходный раствор пирокатехина с концентрацией 1 г/дм3 для градуировки.
Взвешивают (0,100 +/- 0,001) г пирокатехина, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Массовая концентрация пирокатехина в исходном растворе составляет 1 г/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.
9.2.3. Исходный раствор резорцина с концентрацией 1 г/дм3 для градуировки.
Взвешивают (0,100 +/- 0,001) г резорцина, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Массовая концентрация резорцина в исходном растворе составляет 1 г/дм3. Используют свежеприготовленный раствор.
9.2.4. Рабочий раствор фенола, резорцина и пирокатехина № 1 с концентрацией 2 мг/дм3 для градуировки.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят с помощью пипетки или дозатора 0,2 см3 стандартного образца фенола в этаноле массовой концентрацией 1 г/дм3, 0,2 см3 исходного раствора резорцина с концентрацией 1 г/дм3, 0,2 см3 исходного раствора пирокатехина с концентрацией 1 г/дм3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Используют свежеприготовленный раствор.
9.2.5. Рабочий раствор фенола, резорцина и пирокатехина № 2 с концентрацией 0,05 мг/дм3 для градуировки.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 переносят с помощью пипетки или дозатора 2,5 см3 рабочего раствора № 1 с концентрацией 2 мг/дм3, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают. Используют свежеприготовленный раствор.
9.2.6 Приготовление 0,1%-го водного раствора уксусной кислоты.
В мерную колбу вместимостью 500 см3 приливают 100 см3 дистиллированной воды и 0,5 см3 уксусной кислоты (плотность 1,05 г/см3), перемешивают, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Срок хранения раствора не более 3 дней при комнатной температуре.
9.2.7 Приготовление 0,37%-го водного раствора ортофосфорной кислоты.
В мерную колбу вместимостью 50 см3 приливают 10 см3 дистиллированной воды и 0,1 см3 ортофосфорной кислоты (плотность 1,87 г/см3), перемешивают, доводят дистиллированной водой до метки, закрывают пробкой и перемешивают. Срок хранения раствора не более 3 дней при комнатной температуре.
9.3 Подготовка хроматографической колонки.
Хроматографическую колонку устанавливают в хроматограф и подают смесь ацетонитрила и 0,1%-го водного раствора уксусной кислоты в соотношении 35:65 (объемные доли) со скоростью 0,8 см3/мин до установления равновесия колонки, которое определяется по стабильности нулевой детектора. Проводят холостую разгонку в режиме хроматографа (п. 9.4.3).
9.4 Установление градуировочной характеристики.
9.4.1. Градуировочную характеристику для определения фенола, пирокатехина, резорцина в крови устанавливают по результатам измерений 3-х серий из 6 градуировочных растворов с различными массовыми концентрациями определяемых фенолов в каждой серии.
9.4.2. Градуировочные растворы готовят в мерных колбах вместимостью 25 см3. Для этого в каждую колбу вносят исходный раствор для градуировки в соответствии с таблицей 6, доводят дистиллированной водой до метки и перемешивают содержимое колбы. Используют свежеприготовленные градуировочные растворы. Аликвотную часть (10 мм3) анализируют на жидкостном хроматографе в рабочем режиме работы хроматографа (п. 9.4.3).
Приготовление градуировочных растворов
Градуировочный коэффициент рассчитывают по формуле:
K = \frac{\sum_{i = 1}^{n} C_{i}/S_{i}}{n} , (1)
где Ci — массовые концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в i-ом градуировочном растворе, мг/дм3;
Si — средние значения трех измерений площадей пиков фенола, пирокатехина и резорцина, полученных при анализе i-го градуировочного раствора, усл. ед.;
n — количество градуировочных смесей (n = 6).
Градуировку проводят при смене реактивов или разделительной колонки. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.
9.4.3 Режим работы хроматографа:
- колонка с обращенной фазой <5> C18, внутренний диаметр 4,6 мм, длина 150 мм, размер частиц 5 мкм;
- элюент: смесь ацетонитрила и 0,1% водного раствора уксусной кислоты в соотношении 35:65 (объемные доли);
<5> Например, колонка с обращенной фазой Eclipse XDB C18.
9.4.4 Контроль стабильности градуировочной характеристики.
Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал в анализируемой серии измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовые концентрации фенола, пирокатехина и резорцина соответствовали нижней и верхней границам и середине диапазона построения градуировочных характеристик. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:
где C — заданные массовые концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в градуировочном растворе, мг/дм3;
X — результат измерения массовых концентраций фенола, пирокатехина и резорцина в образце для градуировки, мг/дм3.
При невыполнении условия (2) эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности, строят новую градуировочную характеристику.
X. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ К АНАЛИЗУ, ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
10.1 Отбор проб.
Отбор проб крови в количестве 2 см3 производят из вены в вакуумные пробирки с внесенным антикоагулянтом (гепарин) или в химически чистые, обеззараженные полипропиленовые пробирки вместимостью 15 см3 с добавлением антикоагулянта (гепарин).
10.2 Подготовка проб.
В полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 помещают 1 см3 крови, вносят 50 мм3 0,37% раствора ортофосфорной кислоты, перемешивают, добавляют 0,5 см3 этилацетата, затем 0,5 см3 ацетонитрила, перемешивают 1 мин, добавляют 0,25 г смеси солей для экстракции, перемешивают 1 мин и центрифугируют 10 мин со скоростью 5000 об/мин при температуре плюс 20 °C. Отбирают верхний слой экстракта, к нему добавляют 0,1 г сорбента, перемешивают 1 мин и центрифугируют 10 мин в тех же условиях. Очищенный экстракт фильтруют через тефлоновый фильтр с размером пор 0,2 мкм.
10.3 Порядок выполнения измерений.
Для измерения массовых концентраций фенола, пирокатехина и резорцина в крови (мг/дм3) вводят в хроматограф 10 мм3 экстракта, полученного по п. 10.2. Анализируют две параллельные пробы в рабочем режиме хроматографа (п. 9.4.3).
10.4. Идентификацию фенола, пирокатехина и резорцина на хроматограмме проводят путем сравнения времен удерживания хроматографических пиков, полученных при анализе пробы и рабочего раствора с концентрацией 0,05 мг/дм3 для идентификации, приготовленного в соответствии с п. 9.2.5.
XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
11.1 Массовые концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в крови рассчитывают по формуле:
C = \frac{(\overline{a}) \cdot K \cdot K_{\text{Э}} \cdot V_{1}}{V} , (3)
где C — массовая концентрация определяемого соединения в крови, мг/дм3;
\overline{a} — среднее значение двух параллельных измерений площади хроматографического пика определяемого соединения в экстракте, усл. ед.;
K — градуировочный коэффициент для определения массовой концентрации определяемого соединения в экстракте;
KЭ — коэффициент, учитывающий степень экстракции определяемого соединения, рассчитанный по формуле:
k = \frac{\text{А}}{\text{Б}} ,
где А — 100% степень экстракции;
Б — рекомендуемая степень экстракции для определяемого соединения (п. 4), которая устанавливается в результате расчета отношения между хроматографическими пиками, полученными при измерении площади (высоты) пика для аттестованного значения образца до и после экстракции, проводимой в соответствии с п. 10.1 - 10.2;
V1 — объем экстракта, см3 (V = 0,75 см3);
V — объем крови, взятой на анализ, см3 (V = 1 см3).
11.2. За результат измерения \overline{\text{С}} принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений C1, C2, для которых выполняется условие:
|\text{С}_{1} - \text{С}_{2}| \leq 0,01 \cdot r \cdot \frac{\text{С}_{1} + \text{С}_{2}}{2} , (4)
где r — предел повторяемости (относительное значение), %.
Значения предела повторяемости приведены в таблице 4.
При невыполнении условия (4) получают дополнительно еще два результата параллельных определений.
Диапазон измерений массовых концентраций фенола, резорцина и пирокатехина в крови, значения пределов повторяемости, воспроизводимости при доверительной вероятности P = 0,95
Если максимальное абсолютное расхождение между наибольшим и наименьшим результатами измерений не превышает критического диапазона, относительное значение которого приведено в таблице 4 для P = 0,95 и n = 4:
|C_{max} - C_{min}| \leq 0,01 \cdot CR_{0,95} \cdot \frac{C_{1} + C_{2} + C_{3} + C_{4}}{4} , (5)
то в этом случае все четыре результата признают приемлемыми и за окончательный результат принимают среднее арифметическое четырех измерений, полученных в условиях повторяемости.
При невыполнении условия (5) в качестве окончательного результата измерений принимают медиану четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению условий (4) и (5).
XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
12.1 Результат измерений представляют в виде:
(\overline{C} \pm \Delta),\text{мг}/\text{дм}^{3}, либо (\overline{C} \pm U),\text{мг}/\text{дм}^{3},
где \overline{C} — результат измерений массовых концентраций фенола, пирокатехина и резорцина в крови, мг/дм3;
\Delta — характеристика погрешности, мг/дм3, при P = 0,95, рассчитанная по формуле:
\Delta = \frac{\delta \cdot C}{100} , (6)
где \delta — относительное значение характеристики погрешности, %.
Значение \delta приведено в таблице 1.
Uр — расширенная неопределенность при k = 2, мг/дм3, вычисляемая по формуле:
U_{\text{р}} = \frac{U_{(\text{отн})\text{р}} \cdot \overline{\text{С}}}{100} , (7)
где U(отн)р — расширенная неопределенность (в относительных единицах) при k = 2 (таблица 1), %.
Допустимо результат измерений в документах, выдаваемых лабораторией, при условии: \Delta_{\text{л}}<\Delta или Uл < Uр представлять в виде:
(\overline{C} \pm \Delta_{\text{л}}),\text{мг}/\text{дм}^{3}, при P = 0,95 либо (\overline{C} \pm U_{\text{л}}),\text{мг}/\text{дм}^{3}, P = 0,95, (8)
где \pm \Delta_{\text{л}} — значение характеристики погрешности результатов измерений, установленное при внедрении методики в лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений, мг/дм3;
+/- Uл — значение расширенной неопределенности при k = 2, установленное при внедрении методики в лаборатории, мг/дм3.
12.2. Численное значение C оканчивается цифрой того же разряда, что и значение погрешности (неопределенности) \Delta .
XIII. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
13.1. Контроль точности результатов измерений организуют и проводят путем проведения проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости, внутрилабораторной (промежуточной) прецизионности, оперативного контроля процедуры измерений, контроля стабильности градуировочной характеристики (п. 9.4.5) и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6.
13.2. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности.
Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности, являются образцы крови с внесенными в них добавками растворов фенола, резорцина и пирокатехина, подготовленных в соответствии с п. 9.2.4 - 9.2.5.
Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях внутрилабораторной прецизионности (в пределах одной лаборатории, разными операторами, в разное время), проводят по результатам измерений массовых концентраций фенола, пирокатехина и резорцина в крови с одинаковым содержанием соединений. Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:
\frac{|\text{С}_{1} - \text{С}_{2}|}{(\text{С}_{1} + \text{С}_{2})/2} \cdot 100\% \leq R_{\text{л}}, (9)
где C1 и C2 - результаты измерений массовых концентраций фенола, пирокатехина и резорцина в крови, полученные в условиях воспроизводимости, мг/дм3;
Rл — предел внутрилабораторной прецизионности (относительное значение), %. Значения предела внутрилабораторной прецизионности приведены в таблице 4.
Если условие (9) не выполняется, процедуру повторяют. При повторном превышении предела внутрилабораторной прецизионности выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.3. Алгоритм оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок.
Образцами для контроля процедуры измерений являются образцы крови с внесенными в них добавками аттестованного раствора фенола, пирокатехина и резорцина, приготовленного в соответствии с п. 9.4.2.
Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:
\text{К}_{\text{к}} = |\overline{C}' - \overline{C} - C_{\text{д}}|, (10)
где \overline{C}' — результат измерений массовой концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в пробе с известной добавкой — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4), мг/дм3;
\overline{C} — результат измерений массовой концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в исходной пробе — среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет условию (4), мг/дм3;
Cд — величина введенной добавки, мг/дм3.
Норматив контроля К рассчитывают по формуле:
\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{С }'}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{С}}^{2}} , (11)
где \Delta_{\text{л},\text{С }'} , \Delta_{\text{л},\text{С}} — значения характеристики погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации фенола, пирокатехина и резорцина в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, мг/дм3.
Примечание. Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражений:
\Delta_{\text{л},\text{С }'} = 0,84 \cdot 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{\text{С}}', (12)
\Delta_{\text{л},\text{С}} = 0,84 \cdot 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{\text{С}}, (13)
с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.
Процедуру измерений признают удовлетворительной при выполнении условия:
При невыполнении условия (15) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении условия (15) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
13.4. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания».
3. ГОСТ 12.1.004 «ССБТ. Пожарная безопасность. Общие требования».
4. ГОСТ 12.1.005 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
5. ГОСТ 12.1.007 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
6. ГОСТ 12.4.009 «ССБТ. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание».
7. ГОСТ 12.1.019 «ССБТ. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты».
8. ГОСТ 61 «Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия».
9. ГОСТ 1770 «Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия».
10. ГОСТ 6552 «Реактивы. Кислота ортофосфорная. Технические условия».
11. ГОСТ 28311 «Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний».
12. ГОСТ 29227 «Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования».
13. ГОСТ 58144 «Вода дистиллированная. Технические условия».
14. ГОСТ Р 52501 «Вода для лабораторного анализа. Технические условия».
15. ГОСТ Р 53228 «Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания».
16. ГОСТ Р ИСО 5725-6 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике».
17. ГОСТ Р ИСО 7886-1 «Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования».
18. ТУ 6-09-14-2167 «Ацетонитрил. Технические условия».
19. ТУ 92-00243346-01 «Шкаф сушильный ШС-80».