---
title: "\"МУК 4.1.3323-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств метобромурона и 4-бромфенилмочевины в семенах подсолнечника, бобах сои и растительном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3323-15"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-3323-15"
---

## "МУК 4.1.3323-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств метобромурона и 4-бромфенилмочевины в семенах подсолнечника, бобах сои и растительном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3323-15. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств метобромурона и 4-бромфенилмочевины в семенах подсолнечника, бобах сои и растительном масле методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 28.12.2015)


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
28 декабря 2015 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕТОБРОМУРОНА**
**И 4-БРОМФЕНИЛМОЧЕВИНЫ В СЕМЕНАХ ПОДСОЛНЕЧНИКА, БОБАХ СОИ**
**И РАСТИТЕЛЬНОМ МАСЛЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3323-15**

1. <a id="p100005"></a>Разработаны сотрудниками ФГБНУ "Всероссийский НИИ защиты растений" (В.И. Долженко, А.С. Комарова, В.В. Человечкова) и ООО "Инновационный центр защиты растений" (И.А. Цибульская, Т.Д. Черменская).
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 17 декабря 2015 г. N 2).
3. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 28 декабря 2015 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Свидетельство о метрологической аттестации N 01.5.04.198/01.00043/2015.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения остаточных количеств метобромурона и 4-бромфенилмочевины в семенах подсолнечника, бобах сои и растительном масле в диапазоне концентраций 0,05 - 0,5 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Методические указания носят рекомендательный характер.
<a id="p100012"></a>Метобромурон
<a id="p100013"></a>3-(4-бромфенил)-1-метокси-1-метилмочевина (ИЮПАК)

<a id="p100014"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/JnopdhMR/img_0.png) 

<a id="p100015"></a>C<sub>9</sub>H<sub>11</sub>BrN<sub>2</sub>O<sub>2</sub>
<a id="p100016"></a>Молекулярная масса: 259,1.
<a id="p100017"></a>Химически чистое вещество представляет собой бесцветные кристаллы.
<a id="p100018"></a>Температура плавления: 95 - 96 °C.
<a id="p100019"></a>Давление пара при 25 °C: 0,4 МПа.
<a id="p100020"></a>Растворимость в воде: 330 мг/дм3 (при 20 °C).
<a id="p100021"></a>Растворимость в органических растворителях (г/дм3 при 20 °C): гептан < 10; дихлорметан, ацетон, метанол, этилацетат > 250.
<a id="p100022"></a>Стабильность к гидролизу: стабилен, при 20 °C: DT50 = 170 дней (pH 7).
<a id="p100023"></a>Период полураспада в почве: DT50 = 34 дня.
<a id="p100024"></a>Краткая токсикологическая характеристика. Острая пероральная токсичность LD50 для млекопитающих (для крыс) > 10 000 мг/кг. Оказывает раздражающее действие на кожу, слизистую глаз и дыхательные пути.
<a id="p100025"></a>Область применения препарата. Предвсходовый гербицид для борьбы с широколиственными сорняками и однолетними травами, адсорбируется корнями и листьями.
<a id="p100026"></a>Механизм действия. Ингибирование фотосинтеза.
<a id="p100027"></a>4-Бромфенилмочевина
<a id="p100028"></a>4-Бромфенилмочевина (ИЮПАК).
<a id="p100029"></a>Основной метаболит метобромурона в почве и растениях.

<a id="p100030"></a> ![рис. 2](https://i.bukva.ai/JnopdhMR/img_1.png) 

<a id="p100031"></a>C<sub>7</sub>H<sub>7</sub>BrN<sub>2</sub>O
<a id="p100032"></a>Молекулярная масса: 215,0.
<a id="p100033"></a>Химически чистое вещество представляет собой бесцветные кристаллы.
<a id="p100034"></a>Температура плавления: 225 - 227 °C.
<a id="p100035"></a>В России для метобромурона и 4-бромфенилмочевины гигиенические нормативы не установлены.


## 1. <a id="p100036"></a>Погрешность измерений


<a id="p100037"></a>При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 1](#p100039) и [2](#p100070), для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100038"></a>Таблица 1

<a id="p100039"></a>Метрологические параметры для метобромурона


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="11%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="16%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100040"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100041"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100042"></a>Показатель точности <a href="#p100068">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , % (P = 0,95)</td><td><a id="p100043"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100044"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100045"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100046"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100047"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100048"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100049"></a>22</td><td><a id="p100050"></a>6</td><td><a id="p100051"></a>10</td><td><a id="p100052"></a>17</td><td><a id="p100053"></a>28</td></tr>
<tr><td><a id="p100054"></a>Бобы сои</td><td><a id="p100055"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100056"></a>22</td><td><a id="p100057"></a>6</td><td><a id="p100058"></a>10</td><td><a id="p100059"></a>17</td><td><a id="p100060"></a>28</td></tr>
<tr><td><a id="p100061"></a>Растительное масло</td><td><a id="p100062"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100063"></a>22</td><td><a id="p100064"></a>7</td><td><a id="p100065"></a>11</td><td><a id="p100066"></a>20</td><td><a id="p100067"></a>31</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100068"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2</td></tr>
</table>


<a id="p100069"></a>Таблица 2

<a id="p100070"></a>Метрологические параметры для 4-бромфенилмочевины


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="11%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="16%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100071"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100072"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100073"></a>Показатель точности <a href="#p100099">&lt;*&gt;</a> (границы относительной погрешности), $\pm \delta$ , % (P = 0,95)</td><td><a id="p100074"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , %</td><td><a id="p100075"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , %</td><td><a id="p100076"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), r, %</td><td><a id="p100077"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученных в разных лабораториях), R, % (P = 0,95)</td></tr>
<tr><td><a id="p100078"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100079"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100080"></a>23</td><td><a id="p100081"></a>8</td><td><a id="p100082"></a>12</td><td><a id="p100083"></a>22</td><td><a id="p100084"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100085"></a>Бобы сои</td><td><a id="p100086"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100087"></a>23</td><td><a id="p100088"></a>8</td><td><a id="p100089"></a>12</td><td><a id="p100090"></a>22</td><td><a id="p100091"></a>34</td></tr>
<tr><td><a id="p100092"></a>Растительное масло</td><td><a id="p100093"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100094"></a>24</td><td><a id="p100095"></a>9</td><td><a id="p100096"></a>12</td><td><a id="p100097"></a>25</td><td><a id="p100098"></a>34</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100099"></a>&lt;*&gt; Соответствует расширенной неопределенности Uотн. при коэффициенте охвата k = 2</td></tr>
</table>


<a id="p100100"></a>Таблица 3

<a id="p100101"></a>Полнота извлечения метобромурона, стандартное отклонение,
доверительный интервал среднего результата


<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="17%"><col width="16%"><col width="15%"><col width="16%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100102"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100103"></a>Метрологические параметры, P = 0,95; n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100104"></a>предел количественного определения, мг/кг</td><td><a id="p100105"></a>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100106"></a>полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100107"></a>стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100108"></a>доверительный интервал среднего результата, +/- %</td></tr>
<tr><td><a id="p100109"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100110"></a>0,05</td><td><a id="p100111"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100112"></a>88,5</td><td><a id="p100113"></a>3,39</td><td><a id="p100114"></a>4,76</td></tr>
<tr><td><a id="p100115"></a>Бобы сои</td><td><a id="p100116"></a>0,05</td><td><a id="p100117"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100118"></a>82,4</td><td><a id="p100119"></a>3,95</td><td><a id="p100120"></a>5,55</td></tr>
<tr><td><a id="p100121"></a>Растительное масло</td><td><a id="p100122"></a>0,05</td><td><a id="p100123"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100124"></a>85,4</td><td><a id="p100125"></a>4,02</td><td><a id="p100126"></a>5,63</td></tr>
</table>


<a id="p100127"></a>Таблица 4

<a id="p100128"></a>Полнота извлечения 4-бромфенилмочевины, стандартное
отклонение, доверительный интервал среднего результата


<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="17%"><col width="16%"><col width="15%"><col width="16%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100129"></a>Анализируемый объект</td><td colspan="5"><a id="p100130"></a>Метрологические параметры, P = 0,95; n = 20</td></tr>
<tr><td><a id="p100131"></a>предел количественного определения, мг/кг</td><td><a id="p100132"></a>диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100133"></a>полнота извлечения вещества, %</td><td><a id="p100134"></a>стандартное отклонение, %</td><td><a id="p100135"></a>доверительный интервал среднего результата, +/- %</td></tr>
<tr><td><a id="p100136"></a>Семена подсолнечника</td><td><a id="p100137"></a>0,05</td><td><a id="p100138"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100139"></a>81,8</td><td><a id="p100140"></a>3,51</td><td><a id="p100141"></a>4,92</td></tr>
<tr><td><a id="p100142"></a>Бобы сои</td><td><a id="p100143"></a>0,05</td><td><a id="p100144"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100145"></a>82,7</td><td><a id="p100146"></a>2,84</td><td><a id="p100147"></a>3,99</td></tr>
<tr><td><a id="p100148"></a>Растительное масло</td><td><a id="p100149"></a>0,05</td><td><a id="p100150"></a>0,05 - 0,5</td><td><a id="p100151"></a>84,8</td><td><a id="p100152"></a>3,50</td><td><a id="p100153"></a>4,90</td></tr>
</table>



## 2. <a id="p100154"></a>Метод измерений


<a id="p100155"></a>Методика основана на определении метобромурона и 4-бромфенилмочевины методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием УФ-детектора после их извлечения из образцов ацетонитрилом и очистке на патроне для твердофазной экстракции.
<a id="p100156"></a>Идентификация проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.
<a id="p100157"></a>Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.


## 3. <a id="p100158"></a>Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы



#### <a id="p100159"></a>3.1 Средства измерений



<table>
<colgroup><col width="69%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100160"></a>Жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100161"></a><a id="p100162"></a>Весы аналитические<br>ГОСТ 53228-08</td></tr>
<tr><td><a id="p100163"></a>Весы технические</td><td><a id="p100164"></a>ГОСТ 53228-08</td></tr>
<tr><td><a id="p100165"></a>Колбы мерные на 10, 100, 1 000 см3</td><td><a id="p100166"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100167"></a>Микродозаторы одноканальные переменного объема 100 - 1 000 мм3 и 1 - 5 см3</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100168"></a>Цилиндры мерные на 50, 100, 500 см3</td><td><a id="p100169"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100170"></a>Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.</td></tr>
</table>



#### <a id="p100171"></a>3.2 Реактивы



| <a id="p100172"></a>Ацетонитрил, осч | <a id="p100173"></a>ТУ 2634-002-54260861-13 |
| --- | --- |
| <a id="p100174"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная, деионизованная) | <a id="p100175"></a>ГОСТ Р 52501-05 |
| <a id="p100176"></a>Гексан, хч | <a id="p100177"></a>ТУ 2631-001-54260861-13 |
| <a id="p100178"></a>Кислота ортофосфорная, хч | <a id="p100179"></a>ГОСТ 6552-80 |
| <a id="p100180"></a>Метанол, хч | <a id="p100181"></a>ГОСТ 6995-77 |
| <a id="p100182"></a>Метобромурон, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% |  |
| <a id="p100183"></a>4-Бромфенилмочевина, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,4% |  |
| <a id="p100184"></a>Этилацетат, хч | <a id="p100185"></a>[ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) |
| <a id="p100186"></a>Подвижная фаза N 1: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 45 : 55 |  |
| <a id="p100187"></a>Подвижная фаза N 2: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 20 : 80 |  |
| <a id="p100188"></a>Смесь N 1: смесь гексана и этилацетата в соотношении 5 : 1, по объему |  |
| <a id="p100189"></a>Смесь N 2: смесь гексана и этилацетата в соотношении 2 : 1, по объему |  |
| <a id="p100190"></a>Смесь N 3: смесь гексана и этилацетата в соотношении 1 : 1, по объему |  |


<a id="p100191"></a>*Примечание.* Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией, не требующих дополнительной очистки растворителей.


#### <a id="p100192"></a>3.3 Вспомогательные устройства и материалы



| <a id="p100193"></a>Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм |  |
| --- | --- |
| <a id="p100194"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 25 и 100 см3 | <a id="p100195"></a>[ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) |
| <a id="p100196"></a>Патроны для твердофазной экстракции, заполненные гидрофильным слабокислотным сорбентом на основе силикагеля по 0,4 г | <a id="p100197"></a>ТУ 4215-002-0545-931-94 |
| <a id="p100198"></a>Ротационный вакуумный испаритель с мембранным насосом, с пределом вакуума до 10 мбар |  |
| <a id="p100199"></a>Установка для твердофазной экстракции |  |
| <a id="p100200"></a>Пробирки полипропиленовые центрифужные с крышками объемом 50 см3 |  |
| <a id="p100201"></a>Устройство перемешивающее (50 - 200 колебаний в минуту) | <a id="p100202"></a>ТУ 4389-007-44330709-11 |
| <a id="p100203"></a>Центрифуга с максимальной рабочей частотой вращения 4 000 об./мин |  |


<a id="p100204"></a>*Примечание.* Допускается применение оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100205"></a>Требования безопасности


<a id="p100206"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007-76, требования по электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019-09, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100207"></a>4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-83. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
<a id="p100208"></a>Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004-90.


## 5. <a id="p100209"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100210"></a>Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по [п. 13](#p100296).


## 6. <a id="p100211"></a>Условия измерений


<a id="p100212"></a>При выполнении измерений выполняют следующие условия:
- <a id="p100213"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100214"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100215"></a>Подготовка к определению



#### <a id="p100216"></a>7.1 Кондиционирование колонки


<a id="p100217"></a>Перед началом анализа аналитическую колонку кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.


#### <a id="p100218"></a>7.2 Приготовление растворов


<a id="p100219"></a>7.2.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: (0,5 +/- 0,01) г 98%-й ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки. Раствор хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.


#### <a id="p100220"></a>7.3 Приготовление основных и градуировочных растворов



##### <a id="p100221"></a>7.3.1 Приготовление основного и градуировочных растворов

метобромурона

<a id="p100222"></a>7.3.1.1. Основной раствор метобромурона с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску метобромурона (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.
<a id="p100223"></a>Градуировочные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя в качестве растворителя подвижную фазу N 1.
<a id="p100224"></a>7.3.1.2. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,1 см3 основного раствора метобромурона и доводят до метки подвижной фазой N 1.
<a id="p100225"></a>7.3.1.3. Раствор N 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора метобромурона N 1 и доводят до метки подвижной фазой N 1.
<a id="p100226"></a>7.3.1.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,0 см3 раствора метобромурона N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой N 1.
<a id="p100227"></a>7.3.1.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1,0 см3 раствора метобромурона N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой N 1.
<a id="p100228"></a>7.3.1.6. Раствор N 5 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора метобромурона N 4 и доводят объем до метки подвижной фазой N 1.


##### <a id="p100229"></a>7.3.2 Приготовление основного и градуировочных растворов

4-бромфенилмочевины

<a id="p100230"></a>7.3.2.1. Основной раствор 4-бромфенилмочевины с концентрацией 1,0 мг/см3: точную навеску 4-бромфенилмочевины (50 +/- 0,5) мг помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3, растворяют в метаноле и доводят объем до метки тем же растворителем.
<a id="p100231"></a>Градуировочные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя в качестве растворителя подвижную фазу N 2.
<a id="p100232"></a>7.3.2.2. Раствор N 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,1 см3 основного раствора 4-бромфенилмочевины и доводят до метки подвижной фазой N 2.
<a id="p100233"></a>7.3.2.3. Раствор N 2 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5,0 см3 раствора 4-бромфенилмочевины N 1 и доводят до метки подвижной фазой N 2.
<a id="p100234"></a>7.3.2.4. Раствор N 3 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,0 см3 раствора 4-бромфенилмочевины N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой N 2.
<a id="p100235"></a>7.3.2.5. Раствор N 4 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1,0 см3 раствора 4-бромфенилмочевины N 1 и доводят объем до метки подвижной фазой N 2.
<a id="p100236"></a>7.3.2.6. Раствор N 5 с концентрацией 0,05 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора 4-бромфенилмочевины N 4 и доводят объем до метки подвижной фазой N 2.
<a id="p100237"></a>Основные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в течение 3 месяцев, градуировочные растворы - в течение недели.
<a id="p100238"></a>При изучении полноты определения метобромурона и 4-бромфенилмочевины в матрицах используют растворы в ацетонитриле и метаноле соответственно.


#### <a id="p100239"></a>7.4 Построение градуировочного графика


<a id="p100240"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация метобромурона или 4-бромфенилмочевины в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации в градуировочном растворе.
<a id="p100241"></a>Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (K) в уравнении линейной регрессии для каждого из веществ:

<a id="p100242"></a>C = K S, где

<a id="p100243"></a>S - площадь пика градуировочного раствора.
<a id="p100244"></a>Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.
<a id="p100245"></a>Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.
<a id="p100246"></a>Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

<a id="p100247"></a> $\frac{|C - C_{K}|}{C} \cdot 100 \leq \lambda_{\text{контр}.}$ , где

<a id="p100248"></a>C - аттестованное значение массовой концентрации метобромурона или 4-бромфенилмочевины в градуировочном растворе,
<a id="p100249"></a>Cк - результат контрольного измерения массовой концентрации метобромурона или 4-бромфенилмочевины в градуировочном растворе,
<a id="p100250"></a> $\lambda_{\text{контр}.}$ - норматив контроля градуировочного коэффициента, % ( $\lambda_{\text{контр}.} = 10\%$ при P = 0,95).


#### <a id="p100251"></a>7.5 Подготовка патрона для твердофазной экстракции


<a id="p100252"></a>Патрон промывают последовательно 3 см3 этилацетата и 3 см3 гексана, после чего он готов к работе.


#### <a id="p100253"></a>7.6 Проверка хроматографического поведения метобромурона

и 4-бромфенилмочевины на патроне для твердофазной экстракции

<a id="p100254"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают по 1 см3 стандартных растворов метобромурона и 4-бромфенилмочевины в ацетонитриле с концентрацией 1 мкг/см3 и 0,1 г растительного масла (наличие масла необходимо, так как без него 4-бромфенилмочевина не растворится в гексане). Растворитель удаляют в вакууме. Остаток растворяют в 1 см3 гексана и переносят на подготовленный патрон [(п. 7.5)](#p100251). Колбу ополаскивают 1 см3 гексана и также наносят на патрон. Последовательно промывают патрон 10 см3 гексана и 3 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Метобромурон элюируют 6 см3 смеси N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы N 1 и анализируют по [п. 9.3](#p100267). Далее промывают патрон 5 см3 смеси N 3, элюат отбрасывают. 4-Бромфенилмочевину элюируют 8 см3 этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 2 см3, упаривают досуха, растворяют в 1 см3 подвижной фазы N 2 и анализируют по [п. 9.4](#p100269).
<a id="p100255"></a>Фракции, содержащие метобромурон, объединяют и вновь анализируют. Фракции, содержащие 4-бромфенилмочевину, тоже объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100256"></a>Устанавливают уровень веществ в элюате, определяют полноту смывания с патрона и необходимый для очистки объем элюата.
<a id="p100257"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения метобромурона и 4-бромфенилмочевины следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии патронов и растворителей.


## 8. <a id="p100258"></a>Отбор проб и хранение


<a id="p100259"></a>Отбор проб семян подсолнечника и бобов сои производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79), а также в соответствии с ГОСТ 10852-86 "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб". Пробы семян подсолнечника и бобов сои хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °C в герметично закрытой стеклянной таре в течение 6 месяцев.
<a id="p100260"></a>Для исследовательских целей допускается получение масла в день анализа в лаборатории из проб измельченных семян или бобов с помощью лабораторного пресса.


## 9. <a id="p100261"></a>Проведение определения



#### <a id="p100262"></a>9.1 Определение метобромурона и 4-бромфенилмочевины

в семенах подсолнечника, бобах сои и растительном масле

<a id="p100263"></a>Пробу измельченных семян подсолнечника, бобов сои или растительного масла (10 г) помещают в полипропиленовую центрифужную пробирку объемом 50 см3, добавляют 30 см3 ацетонитрила, помещают в перемешивающее устройство на 10 мин, затем центрифугируют в течение 10 мин при скорости 4 000 об./мин. Ацетонитрильный экстракт декантируют, в пробирку добавляют 20 см3 ацетонитрила и экстракцию повторяют. От объединенных органических экстрактов отбирают аликвоту, соответствующую 1 г пробы, переносят в круглодонную колбу вместимостью 25 см3 и упаривают растворитель на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток подвергают очистке по [п. 9.2](#p100264).


#### <a id="p100264"></a>9.2 Очистка на патроне для твердофазной экстракции


<a id="p100265"></a>Сухой остаток, полученный в [п. 9.1](#p100262), растворяют в 1 см3 гексана и количественно переносят на подготовленный патрон [(п. 7.5)](#p100251). Колбу ополаскивают 1 см3 гексана и также наносят на патрон. Патрон последовательно промывают 10 см3 гексана и 3 см3 смеси N 1, элюат отбрасывают. Метобромурон элюируют 5 см3 смеси N 2. Элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы N 1 и анализируют по [п. 9.3](#p100267).
<a id="p100266"></a>Далее патрон промывают 5 см3 смеси N 3, элюат отбрасывают. 4-Бромфенилмочевину элюируют 5 см3 этилацетата. Элюат собирают в круглодонную колбу емкостью 25 см3 и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы N 2 и анализируют по [п. 9.4](#p100269).


#### <a id="p100267"></a>9.3 Условия хроматографирования метобромурона


<a id="p100268"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза N 1: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 45 : 55, по объему. Скорость потока элюента - 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора - 245 нм. Объем вводимой пробы - 10 мм3. Время удерживания метобромурона - (4,1 +/- 0,1) мин.


#### <a id="p100269"></a>9.4 Условия хроматографирования 4-бромфенилмочевины


<a id="p100270"></a>Ультраэффективный жидкостный хроматограф с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка, заполненная сорбентом с привитой фазой, включающей гидрофильную карбаматную группу в цепи C18 (100 x 2,1) мм, 1,7 мкм. Температура колонки (30 +/- 1) °C. Подвижная фаза N 2: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 20 : 80, по объему. Скорость потока элюента - 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора - 245 нм. Объем вводимой пробы - 10 мм3. Время удерживания 4-бромфенилмочевины - (9,4 +/- 0,1) мин.


## 10. <a id="p100271"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100272"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание метобромурона или 4-бромфенилмочевины в пробе (Xi, мг/кг) вычисляют по формуле:

<a id="p100273"></a> $X_{i} = \frac{S_{xi} \cdot K_{i} \cdot V}{P}$ , где

<a id="p100274"></a>Sxi - площадь пика аналита на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);
<a id="p100275"></a>Ki - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;
<a id="p100276"></a>V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;
<a id="p100277"></a>P - навеска анализируемого образца, г (аликвота, равная 1 г).
<a id="p100278"></a>Поскольку содержание метаболита не нормируется, общее содержание действующего вещества в сумме с метаболитом - в эквиваленте действующего вещества с учетом коэффициента, определяемого по соотношению молекулярных масс соединений (k = 259/215), рассчитывается по формуле:

<a id="p100279"></a> $X = \frac{S_{x1} \cdot K_{1} \cdot V}{P} + \frac{S_{x2} \cdot K_{2} \cdot V \cdot k}{P}$ 

<a id="p100280"></a>Содержание остаточных количеств вычисляют как среднее из двух параллельных определений.
<a id="p100281"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартные растворы с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.


## 11. <a id="p100282"></a>Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100283"></a>За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости [(1)](#p100284):

<a id="p100284"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r$ , где (1)

<a id="p100285"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100286"></a>r - значение предела повторяемости $(r = 2.8\sigma_{r})$ .
<a id="p100287"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100284) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


## 12. <a id="p100288"></a>Оформление результатов


<a id="p100289"></a>Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100290"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)\text{мг}/\text{кг}$ при вероятности P = 0,95, где

<a id="p100291"></a> $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100292"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

<a id="p100293"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100294"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100295"></a>В случае, если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде: "содержание вещества в пробе "менее нижней границы определения" (например: менее 0,05 мг/кг <*>, где <*> - 0,05 мг/кг - предел обнаружения метобромурона в растительном масле).


## 13. <a id="p100296"></a>Контроль качества результатов измерений


<a id="p100297"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1 - 6-02 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
<a id="p100298"></a>13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.
<a id="p100299"></a>13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.
<a id="p100300"></a>Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

<a id="p100301"></a> $C_{\text{д}} = \Delta_{\text{л},X} + \Delta_{\text{л},X\prime}$ , где

<a id="p100302"></a> $\pm \Delta_{\text{л},X}( \pm \Delta_{\text{л},X\prime})$ - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой соответственно), мг/кг; при этом:

<a id="p100303"></a> $\Delta_{\text{л}} = \pm 0,84\Delta$ , где

<a id="p100304"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100305"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot X}{100}$ , где

<a id="p100306"></a> $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.
<a id="p100307"></a>Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

<a id="p100308"></a>Кк = X' - X - Cд, где

<a id="p100309"></a>X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по [п. 11](#p100282)) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.
<a id="p100310"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

<a id="p100311"></a> $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},X\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},X}^{2}}$ (2)

<a id="p100312"></a>Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).
<a id="p100313"></a>Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию

<a id="p100314"></a>|Кк| <= К, (3)

<a id="p100315"></a>процедуру анализа признают удовлетворительной.
<a id="p100316"></a>При невыполнении [условия (3)](#p100314) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении [условия (3)](#p100314) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

#### <a id="p100317"></a>13.3 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

<a id="p100318"></a>Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предел воспроизводимости (R):

<a id="p100319"></a> $\frac{2 \cdot |X_{1} - X_{2}| \cdot 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq R$ , где (4)

<a id="p100320"></a>X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;
<a id="p100321"></a>R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.



<a id="p100322"></a>

---