---
title: "\"МУК 4.1.1962-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение фумонизинов В1 и В2 в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1962-05"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1962-05"
---

## "МУК 4.1.1962-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение фумонизинов В1 и В2 в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1962-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение фумонизинов В1 и В2 в кукурузе (зерно, крупа, мука) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2005 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

21 апреля 2005 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФУМОНИЗИНОВ В1 И В2 В КУКУРУЗЕ (ЗЕРНО, КРУПА,**
**МУКА) МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="center">

**МУК 4.1.1962-05**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2005 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны: ГУ НИИ питания РАМН (академик РАМН, профессор В.А. Тутельян, д.х.н. К.И. Эллер, к.х.н. М.Г. Киселева, к.б.н. Л.П. Захарова, И.Б. Седова).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Г.Г. Онищенко 21 апреля 2005 г.

<div align="center">

3. <a id="p100008"></a>Введены в действие с 1 июля 2005 г.

</div>

4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100010"></a>Назначение и область применения


<a id="p100011"></a>    Настоящий   документ   устанавливает   Методику   обнаружения,
идентификации  и количественного определения фумонизинов В  и В  в
                                                          1    2
продовольственном    сырье    и    пищевых    продуктах    методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Данная Методика
испытана   и   рекомендуется   для   количественного   определения
фумонизинов  В   и  В   (ФВ   и  ФВ ) в зерне кукурузы и продуктах
              1      2     1       2
переработки кукурузы.
<a id="p100012"></a>Методические указания предназначены для проведения лабораторных исследований безопасности пищевой продукции центрами гигиены и эпидемиологии, а также для предприятий и организаций, осуществляющих контроль качества и безопасности пищевых продуктов и аккредитованных в установленном порядке.
<a id="p100013"></a>    Предел  обнаружения  метода:  0,01 мг/кг (для ФВ ); 0,04 мг/кг
                                                    1
(для ФВ ).

<div align="center">

       2

</div>

<a id="p100014"></a>Общая погрешность измерений не превышает 31%.


## 2. <a id="p100015"></a>Общие положения


<a id="p100016"></a>    Фумонизины   принадлежат   к   большой   группе  микотоксинов,
продуцируемых  микроскопическими  грибами  рода Fusarium. Наиболее
часто  в  природных условиях встречается фумонизин В , значительно
                                                    1
реже  и  в  меньших  количествах  - фумонизины В  и В  (ФВ , ФВ  и
                                                2    3    1    2
ФВ ).  Подтверждено,  что  основными  продуцентами  этих  токсинов
  3
являются  F.  moniliforme  Sheldon (син. F. verticillioides (Sacc.
Nirenberg)).  Имеются   данные   о   высокой  частоте  обнаружения
фумонизинов  в  зерне  кукурузы  и продуктах ее переработки в США,
Австралии, в ряде стран Европы.
<a id="p100017"></a>Фумонизины представляют собой диэфиры пропан-1,2,3-трикарбоновой кислоты и 2-амино-12,16-диметилполигидроксиэйкозана, хорошо растворимы в воде и полярных растворителях. Фумонизины не обладают естественной флуоресценцией и не имеют специфических хромофоров, что обусловливает необходимость стадии дериватизации для проведения высокочувствительного определения.
<a id="p100018"></a>    Фумонизины  в  экспериментах  in  vivo поражают печень, почки,
поджелудочную  железу и центральную нервную систему у разных видов
животных,  а также обладают канцерогенным действием. Международное
Агентство   по   изучению   рака  классифицирует  фумонизины,  как
соединения  потенциально  канцерогенные  для человека (группа 2В).
Комитет  экспертов  ФАО/ВОЗ  по  пищевым  добавкам и контаминантам
предложил  установить  величину  допустимого суточного потребления

<div align="center">

(ДСП) ФВ  + ФВ  + ФВ  с пищей на уровне 2 мкг/кг массы тела.

</div>

        1     2     3


## 3. <a id="p100019"></a>Принцип метода


<a id="p100020"></a>Метод включает следующие этапы.
<a id="p100021"></a>    Экстракция  ФВ   и  ФВ   из  проб  зерна кукурузы, муки, крупы
                  1       2
осуществляют   смесью  ацетонитрил-вода  (50:50%  об.).  В  пробах
детского  питания  и  многокомпонентных пищевых продуктах - смесью
ацетонитрил-метанол-вода (25:25:50% об.):
    -  <a id="p100022"></a>очистка  и  концентрирование пробы на патронах, заполненных
силикагелем, химически связанным с октадецилселаном (ОДС-патроны).
В  пробах  детского  питания и многокомпонентных пищевых продуктах
очистка проводится на иммунно-афинных колонках (ИА-колонки);
    - <a id="p100023"></a>дериватизация фумонизинов о-фталевым реагентом;
    - <a id="p100024"></a>определение ФВ  и ФВ  с помощью высокоэффективной жидкостной
                    1     2
хроматографии  (ВЭЖХ)  с  флуориметрическим  детектором  при длине
волны  возбуждения  (лямбда     ) 335  нм  и  длине  волны эмиссии
                           возб.
(лямбда     ) 440 нм.
       эмис.
<a id="p100025"></a>    Предел  обнаружения  метода: 0,01  мг/кг (для ФВ ); 0,04 мг/кг
                                                    1
(для ФВ ).
       2
<a id="p100026"></a>    Относительное   стандартное   отклонение   измерения   времени
удерживания  составляет  - 0,02  (для ФВ ) и 0,03 (для ФВ ), высот
                                        1                2
хроматографических  пиков  -  0,05  (для  ФВ )  и  0,08 (для ФВ ),
                                            1                  2
площадей  хроматографических  пиков  -  0,06 (для ФВ ) и 0,08 (для
                                                    1
ФВ ).
  2
<a id="p100027"></a>    Степень   извлечения   добавленных   в   продукт   фумонизинов

<div align="center">

составляет 89,8% для ФВ  и 89,5% для ФВ .

</div>

                       1               2


## 4. <a id="p100028"></a>Характеристика погрешностей измерения


<a id="p100029"></a>Данные Методические указания обеспечивают выполнение измерений с погрешностью, не превышающей величин, приведенных в табл. 1.

<a id="p100030"></a>Таблица 1

<a id="p100031"></a>       ПРИПИСАННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОГРЕШНОСТЕЙ РЕЗУЛЬТАТОВ
      ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ФВ  И ФВ  В ПРОДУКТЕ МЕТОДОМ
                                 1     2
           ВЭЖХ ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="14%"><col width="32%"><col width="31%"></colgroup>
<tr><td rowspan="3">Концентрация, мг/кг</td><td rowspan="3">Токсин</td><td colspan="2">Относительная погрешность, +/- дельта, %</td></tr>
<tr><td colspan="2">Способ твердофазной экстракции</td></tr>
<tr><td>С18</td><td>ИА</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>7 -</td><td>31 29</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>8 18</td><td>11 15</td></tr>
<tr><td>1,0</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>13 11</td><td>8 13</td></tr>
<tr><td>5,0</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>13 3</td><td>17 17</td></tr>
</table>



## 5. <a id="p100041"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, посуда, реактивы и материалы



### <a id="p100042"></a>5.1. Средства измерений


<a id="p100043"></a>Система ВЭЖХ, состоящая из насоса высокого давления, инжектора типа Rheodyne-7125 (США) с объемом петли-дозатора 20 мкл, спектрофлуориметрического детектора, обеспечивающего возбуждение флуоресценции в спектральной области 330 - 340 нм и регистрацию эмиссии флуоресценции при длине волны 440 нм и системы для сбора и обработки данных типа Мультихром (Амперсенд, Россия) или аналогичной, хроматографической колонки (250 x 4,6 мм), заполненной сорбентом Kromasil С18 (MetaChem Texnologies, США), размер частиц 5 мкм, или подобным сорбентом.
<a id="p100044"></a>Микрошприцы на МШ-10 или МШ-25 мкл для ВЭЖХ
<a id="p100045"></a>Дозатор пипеточный от 1 до 5 мл

<div align="center">

<a id="p100046"></a>Дозатор пипеточный от 40 до 200 мкл

</div>

<a id="p100047"></a>Цилиндры мерные с притертой пробкой                   ГОСТ 1770-74
вместимостью 100 мл тип 2-100 и 2-250


### <a id="p100048"></a>5.2. Вспомогательное оборудование


<a id="p100049"></a>Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6С          ТУ 64-1-2451
или аналогичный
<a id="p100050"></a>Ротационный испаритель ИР-1М с ловушкой или        ТУ 25-11917
аналогичный
<a id="p100051"></a>Мельница лабораторная роторная "Амита-04"
или аналогичная
<a id="p100052"></a>Центрифуга лабораторная, обеспечивающая
скорость вращения 2500 об./мин.
<a id="p100053"></a>Система для твердофазной экстракции
(вакуумная или аналогичная)
<a id="p100054"></a>Электрошкаф сушильный лабораторный с               ТУ 16-531.639
погрешностью поддержания температуры
+/- 2,5 в интервале от 50 до 350 °C
<a id="p100055"></a>Холодильник бытовой ГОСТ 16317
<a id="p100056"></a>Мельница лабораторная электрическая ЭМ-3А          ТУ 46-22-236-79
или аналогичная
<a id="p100057"></a>pH-метр МР 230 (Испания) или аналогичный
<a id="p100058"></a>ОДС-патроны (Германия), плотность прививки групп -
1,6 мкмоль/кв. м, содержание углерода - 18,5%,
средний размер частиц - 58 мкм, масса сорбента
в патроне - 100 мг
<a id="p100059"></a>Иммунно-афинные колонки Fumoniprep
(R-Biopharm, Германия)
<a id="p100060"></a>Магнитная мешалка типа ММ 5 с перемешивающим       ТУ 25-11.834-80
стержнем
<a id="p100061"></a>Колбы плоскодонные конические, 100 мл,             ГОСТ 10394-74
НШ 29, тип КнКШ 100/29/32
<a id="p100062"></a>Пробирки центрифужные, 10 мл                       ГОСТ 1770
<a id="p100063"></a>Флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного
стекла, объемом 4 мл (вайлы)
<a id="p100064"></a>Флаконы стеклянные завинчивающиеся из темного
стекла, объемом 7 мл
<a id="p100065"></a>Колбы мерные, вместимостью 100, 500 мл,            ГОСТ 1770-74
тип 2-100-2, 2-500-2


### <a id="p100066"></a>5.3. Реактивы и материалы


<a id="p100067"></a>Стандарт ФВ , фирмы "Sigma", кат. N F 1147
           1

<div align="center">

<a id="p100068"></a>Стандарт ФВ , фирмы "Sigma", кат. N F 3771

</div>

           2
<a id="p100069"></a>Стандартные растворы ФВ  и ФВ  в смеси
                       1     2
ацетонитрил-вода (50:50% об.),
с концентрацией 10 мг/л
<a id="p100070"></a>Воронки лабораторные ГОСТ 25336
<a id="p100071"></a>Фильтры обеззоленные "синяя лента"         ТУ 6-09-1678
<a id="p100072"></a>Натрий фосфорно-кислый двузамещенный, [ГОСТ 4172-76](https://bukva.ai/docs/gost-4172-76)
12-водный, чда
<a id="p100073"></a>Натрий фосфорно-кислый однозамещенный, [ГОСТ 245-76](https://bukva.ai/docs/gost-245-76)
2-водный, чда
<a id="p100074"></a>Натрий хлорид, хч ГОСТ 4233-77
<a id="p100075"></a>Тетраборат натрия 10-водный, хч [ГОСТ 4199-76](https://bukva.ai/docs/gost-4199-76)
<a id="p100076"></a>Ацетонитрил, осч, сорт 0, УФ-поглощение
на 200 нм о.е./1 см
<a id="p100077"></a>Метанол, осч                               ГОСТ 6995-77
<a id="p100078"></a>о-Фталевый альдегид, фирмы "Sigma",
кат. N 0657
<a id="p100079"></a>2-Меркапэтанол, фирмы "Fluka", чистота
более 99%
<a id="p100080"></a>Ортофосфорная кислота, осч                 ТУ 2612-014-00203677-97
<a id="p100081"></a>Натрий гидроксид, хч ГОСТ 4328-77
<a id="p100082"></a>0,1 М фосфатный буферный раствор, pH 3,0
<a id="p100083"></a>0,1 М фосфатный буферный раствор, pH 3,0
<a id="p100084"></a>0,08 М фосфатный буферный раствор, pH 4,5
<a id="p100085"></a>0,025 М фосфатный буферный раствор, pH 7,0
<a id="p100086"></a>Бумага фильтровальная лабораторная ГОСТ 12026


## 6. <a id="p100087"></a>Подготовка к выполнению измерений



#### <a id="p100088"></a>6.1 Приготовление стандартных и рабочих растворов

                            ФВ  и ФВ

<div align="center">

                              1     2

</div>


<a id="p100089"></a>Для приготовления стандартных растворов микотоксинов рекомендуется использовать растворители, очищенные перегонкой.
<a id="p100090"></a>Для получения раствора хранения фумонизинов с концентрацией 50 мг/л в мерную колбу вместимостью 100 мл помещают навеску фумонизина (5 мг), взятую с точностью до 0,01 мг, приливают небольшое количество смеси ацетонитрил-вода (1:1) и тщательно перемешивают до полного растворения вещества, доводят смесь до метки.
<a id="p100091"></a>Для получения исходных рабочих растворов фумонизинов с концентрацией стандарта 10 мг/л следует в 5 раз разбавить раствор хранения фумонизинов.
<a id="p100092"></a>    Из  исходных  рабочих  растворов ФВ  и ФВ  с концентрациями 10
                                       1     2
мг/л сначала готовится их смесь в соотношении (1:1), а затем путем
последовательного   разбавления   этой   смеси   готовят   рабочий
стандартный   раствор,   для   чего   необходимую  аликвоту  смеси
микотоксинов    доводят    до   соответствующего   объема   смесью
ацетонитрил-вода (1:1) согласно [табл. 2](#p100100).
<a id="p100093"></a>    Например: для приготовления смеси стандартных растворов ФВ   и
                                                              1
ФВ   с  концентрациями  по  5  мг/л в вайл вносят по 1 мл исходных
  2
рабочих растворов ФВ  и ФВ  с концентрациями 10 мг/л.
                    1     2
<a id="p100094"></a>    Для  приготовления  смеси  рабочих стандартных растворов ФВ  и
                                                               1
ФВ  с концентрацией:
  2
    -  <a id="p100095"></a>2,0  мг/л  -  в  вайл  вносят  800  мкл  смеси  ФВ  и ФВ  с
                                                         1     2
концентрацией  5  мг/л и добавляют 1200 мкл смеси ацетонитрил-вода
(1:1);
    -  <a id="p100096"></a>1,0  мг/л  -  в  вайл  вносят  400  мкл  смеси  ФВ  и ФВ  с
                                                         1     2
концентрацией  5  мг/л и добавляют 1600 мкл смеси ацетонитрил-вода
(1:1) или 1000 мкл смеси рабочих стандартных растворов ФВ  и ФВ  с
                                                         1     2
концентрацией  2  мг/л  добавляют  1000 мкл смеси ацетонитрил-вода
(1:1);
    -  <a id="p100097"></a>0,4  мг/л  -  в  вайл  вносят  800  мкл  смеси  ФВ  и ФВ  с
                                                         1     2
концентрацией  1  мг/л и добавляют 1200 мкл смеси ацетонитрил-вода
(1:1);
    -  <a id="p100098"></a>0,2  мг/л  -  в  вайл  вносят  1000  мкл  смеси ФВ  и ФВ  с
                                                         1     2
концентрацией 0,4 мг/л и добавляют 1000 мкл смеси ацетонитрил-вода
(1:1).  При  необходимости  по  аналогии с вышеизложенным делается
нужное разбавление.

<a id="p100099"></a>Таблица 2

<a id="p100100"></a>            ПРИГОТОВЛЕНИЕ РАБОЧИХ РАСТВОРОВ ФВ  И ФВ
                                              1     2


| Получаемые концентрации смеси стандартных растворов ФВ и ФВ , мг/л 1 2 | Приготовление смеси стандартных растворов |
| --- | --- |
| 5,0 | 1 мл ФВ (с = 10 мг/л) + 1 мл ФВ (с = 10 мг/л) 1 2 |
| 2,0 | 800 мкл смеси ФВ и ФВ (с = 5 мг/л) + 1200 мкл 1 2 смеси ацетонитрил-вода (1:1) |
| 1,0 | 400 мкл смеси ФВ и ФВ (с = 5 мг/л) + 1600 мкл 1 2 смеси ацетонитрил-вода (1:1) или 1000 мкл смеси ФВ и ФВ (с = 2 мг/л) + 1000 мкл смеси ацетони- 1 2 трил-вода (1:1) |
| 0,4 | 800 мкл смеси ФВ и ФВ (с = 1 мг/л) + 1200 мкл 1 2 смеси ацетонитрил-вода (1:1) |
| 0,2 | 1000 мкл смеси ФВ и ФВ (с = 0,4 мг/л) + 1000 1 2 мкл смеси ацетонитрил-вода (1:1) |



### <a id="p100107"></a>6.2. Хранение стандартных растворов фумонизинов


<a id="p100108"></a>Растворы хранения фумонизинов следует держать в стеклянной посуде с притертыми пробками в темном прохладном месте (при температуре около 0 °C) до одного года и использовать для приготовления рабочих стандартных растворов. Смеси рабочих стандартных растворов хранят в вайлах из темного стекла в темном прохладном месте (при температуре около 0 °C) в течение 1 недели.
<a id="p100109"></a>Перед использованием рабочих стандартных растворов их следует довести до комнатной температуры и только после этого следует открывать пробки.


### <a id="p100110"></a>6.3. Приготовление буферных растворов



##### <a id="p100111"></a>6.3.1 Приготовление 0,1 М фосфатного буферного раствора, pH = 3,0

<a id="p100112"></a>Навеску натрия фосфорно-кислого однозамещенного, 2-водного массой 7,8 г переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 20 - 50 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

##### <a id="p100113"></a>6.3.2 Приготовление 0,08 М фосфатного буферного раствора, pH = 4,5

<a id="p100114"></a>Навеску натрия фосфорно-кислого однозамещенного, 2-водного массой 6,24 г переносят в мерную колбу вместимостью 500 мл, добавляют 20 - 50 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

##### <a id="p100115"></a>6.3.3 Приготовление 0,025 М фосфатного буферного раствора, pH = 7,0

<a id="p100116"></a>Навеску натрия фосфорно-кислого двузамещенного, 12-водного массой 0,895 г переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 - 20 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.

##### <a id="p100117"></a>6.3.4 Приготовление фосфатного буферного раствора, pH = 7,4

<a id="p100118"></a>Навеску натрия фосфорно-кислого двузамещенного, 12-водного массой 1,15 г, навеску натрия однозамещенного, 2-водного массой 0,124 г и навеску натрия хлорида массой 1,74 г переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 10 - 20 мл дистиллированной воды. Доводят объем раствора в колбе до метки и перемешивают. Срок хранения - 1 месяц в холодильнике.


## 7. <a id="p100119"></a>Отбор и подготовка проб для анализа



### <a id="p100120"></a>7.1. Отбор проб


<a id="p100121"></a>Для учета специфики отбора проб отдельных видов продуктов следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией:

<div align="center">

- <a id="p100122"></a>"Зерно. Правила приемки и методы отбора проб", [ГОСТ 13586.3-83](https://bukva.ai/docs/gost-13586-3-83);

</div>

- <a id="p100123"></a>"Крупа. Правила приемки и методы отбора проб", ГОСТ 27312-84;
- <a id="p100124"></a>"Мука и отруби. Приемка и методы отбора проб", ГОСТ 27668-88;
- <a id="p100125"></a>"Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию", ГОСТ 8756.0-70.
<a id="p100126"></a>Для получения среднего образца зерна, представительного по концентрации микотоксинов для всей партии, следует измельчить до гомогенизированного состояния двухкилограммовый исходный образец и выделить из этого размола средний образец зерна.
<a id="p100127"></a>Для однородных продуктов (мука, крупа, детское питание, хлопья и др.) пробы следует отбирать в количестве единиц упаковки, соответствующих величине среднего образца (100 - 200 г), при условии, что продукт происходит из одной партии.


### <a id="p100128"></a>7.2. Подготовка проб для анализа


<a id="p100129"></a>Отобранные пробы измельчают в течение 1 - 2 мин. в лабораторной мельнице. При этом используют две параллельные пробы и одну - холостую.

##### <a id="p100130"></a>7.2.1 Экстракция

<a id="p100131"></a>7.2.1.1. Для однокомпонентных пищевых продуктов: навеску 10 г измельченной пробы помещают в плоскодонную коническую колбу на 100 мл, добавляют 50 мл смеси ацетонитрил-вода (50:50% об.). Экстрагируют на аппарате для встряхивания проб в течение 90 мин. Полученную смесь фильтруют через бумажный складчатый фильтр "синяя лента". Отбирают 5 мл фильтрата и добавляют 5 мл 0,1 М фосфатного буферного раствора, pH = 3,0. Полученный раствор центрифугируют в течение 15 мин. при 2,5 тыс. об./мин.

###### <a id="p100132"></a>7.2.1.2 Для проб детского питания и многокомпонентных пищевых

продуктов экстракцию ФВ  и ФВ  из 10 г измельченной пробы проводят
                       1     2
встряхиванием  в  50  мл смеси ацетонитрил-метанол-вода (25:25:50%
об.)  в  течение 120 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр
"синяя  лента".  К  2  мл  супернатанта  добавляют 8 мл фосфатного
буферного  раствора,  pH = 7,4  и центрифугируют в течение 15 мин.
при 2,5 тыс. об./мин.

##### <a id="p100133"></a>7.2.2 Очистка экстракта

<a id="p100134"></a>7.2.2.1. Для однокомпонентных пищевых продуктов: перед использованием ОДС-патроны предварительно кондиционируют, пропуская последовательно по 2 мл ацетонитрила и 0,1 М фосфатного буферного раствора, pH = 3,0. Затем на патрон наносят 8,0 мл анализируемого экстракта и промывают 1,0 мл 0,1 М фосфатным буферным раствором, pH = 3. Фумонизины элюируют с патрона 2,0 мл смеси ацетонитрил-0,025 М фосфатного буферного раствора, pH = 7,0 (70:30% об.).
<a id="p100135"></a>7.2.2.2. Для очистки проб детского питания и многокомпонентных пищевых продуктов на ИА-колонку наносят со скоростью 1 - 2 капли в секунду 8 мл полученного раствора, промывают 10 мл фосфатного буферного раствора, pH = 7,4. Фумонизины элюируют с колонки 1,5 мл метанола и 1,5 мл дистиллированной воды.


## 8. <a id="p100136"></a>Выполнение измерений



### <a id="p100137"></a>8.1. Дериватизация фумонизинов о-фталевым альдегидом


<a id="p100138"></a>Для приготовления ОФА-реагента 40 мг о-фталевого альдегида растворяют в 1 мл метанола, добавляют 5 мл 0,05 М водного раствора тетрабората натрия и 50 мкл 2-меркаптоэтанола. Полученный раствор хранят в темноте в течение 1 недели при t = 6 °C.
<a id="p100139"></a>Дериватизацию фумонизинов о-фталевым альдегидом проводили в течение 1 мин. после смешивания 40 мкл пробы и 40 мкл ОФА-реагента.


#### <a id="p100140"></a>8.2 Определение фумонизинов В  и В  методом ВЭЖХ

                                      1    2

<a id="p100141"></a>Условия ВЭЖХ: подвижная фаза ацетонитрил-метанол-0,08 М фосфатный буферный раствор (50:10:40% об.), pH 4,5, скорость подвижной фазы 1,3 мл/мин. Рекомендуется использовать перегнанный метанол, ацетонитрил и бидистиллированную воду. Все растворители необходимо предварительно отфильтровать.
<a id="p100142"></a>Флуориметрический детектор устанавливают на длину волны возбуждающего излучения 335 нм, на линии эмиссии устанавливают эмиссионный фильтр с полосой пропускания 440 нм.


## 9. <a id="p100143"></a>Обработка результатов измерения


<a id="p100144"></a>    9.1.    Для   построения   калибровочного   графика   проводят
хроматографический  анализ  серии  рабочих растворов стандартов. В
инжектор  с  помощью  микрошприца  вводят  20  мкл  перемешенной в
течение  1  мин. смеси,  состоящей из 40 мкл ОФА-реагента и 40 мкл
рабочего   раствора   стандарта   с   концентрацией  5  мг/л,  что
соответствует  100  нг  ФВ   и  100  нг ФВ . Подобное делается для
                          1               2
других  стандартных  растворов  с концентрациями по 2,0, 1,0, 0,4,
0,2  мг/л, что в свою очередь соответствует 40, 20, 8 и 4 нг ФВ  и
                                                               1
ФВ   во вколе. На основании полученных данных строят калибровочную
  2
кривую    (зависимость   площади   хроматографического   пика   от
концентрации   фумонизина   во   вколе).  В  интервале  линейности
градуировочный график описывается уравнением прямой:

<a id="p100145"></a>                          S = a x c + b,

<a id="p100146"></a>    где:
<a id="p100147"></a>    S - площадь хроматографического пика;
<a id="p100148"></a>    c - концентрация фумонизина в очищенном экстракте, мг/кг;
<a id="p100149"></a>    a, b - коэффициенты градуировочного графика.
<a id="p100150"></a>    Для  анализа  проб  в  инжектор  хроматографа вводят с помощью
микрошприца  20  мкл  смеси,  перемешенной  в  течение  1  мин.  и
состоящей  из  40 мкл  ОФА-реагента и 40 мкл очищенного экстракта.
При наличии пика, совпадающего по времени удерживания  с  ФВ   или
                                                            1
ФВ , рассчитывают их концентрацию в очищенном экстракте  с помощью
  2
уравнения градуировочного графика.
<a id="p100151"></a>    Для  того, чтобы  рассчитать содержание фумонизинов в исходном
образце  необходимо  концентрацию  ФВ   и  ФВ  в пробе умножить на
                                     1       2
коэффициент разбавления.

#### <a id="p100152"></a>9.2 Коэффициент  разбавления  в  случае  использования  С-18

колонок:

                          V  x V  x V
                           1    3    5
<a id="p100153"></a>                     Кр = ------------ = 2,5,
                          М x V  x V
                               2    4

<a id="p100154"></a>    где:
<a id="p100155"></a>    Кр - коэффициент разбавления;
<a id="p100156"></a>    V   -  объем смеси ацетонитрил-вода, взятой для экстракции, мл
     1
(50 мл);
<a id="p100157"></a>    М - навеска образца, взятого для анализа, г (10 г);
<a id="p100158"></a>    V   -  объем  водно-ацетонитрильного  экстракта,  взятого  для
     2
анализа, мл (5 мл);
<a id="p100159"></a>    V  - объем смеси водно-ацетонитрильного экстракта и фосфатного
     3
буфера, взятых для центрифугирования, мл (10 мл);
<a id="p100160"></a>    V    -   объем   смеси  после  центрифугирования,  взятой  для
     4
твердофазной очистки, мл (8 мл);
<a id="p100161"></a>    V    -  объем  собранного  элюата  после  стадии  твердофазной
     5
очистки, мл (2 мл).
<a id="p100162"></a>    Расчет концентрации ФВ  и ФВ  в пробе проводится по формуле:
                          1     2

<a id="p100163"></a>                      C      = 2,5 x C      ,
                       (ФВ )          э(ФВ )
                          1               1

<a id="p100164"></a>                      C      = 2,5 x C      ,
                       (ФВ )          э(ФВ )
                          2               2

<a id="p100165"></a>    где:
<a id="p100166"></a>    C - концентрация ФВ  и ФВ , мг/кг;
                       1     2
<a id="p100167"></a>    2,5 - коэффициент разбавления;
<a id="p100168"></a>    C       - концентрация ФВ  в очищенном экстракте, мг/кг;
     э(ФВ )                  1
         1
<a id="p100169"></a>    C       - концентрация ФВ  в очищенном экстракте, мг/кг.
     э(ФВ )                  2
         2
<a id="p100170"></a>    При  высоких  уровнях  загрязнения  фумонизинами  кукурузы или
продуктов  ее  переработки,  экстракт перед реакцией дериватизации
необходимо   разбавить,  в  этом  случае  при  расчете  содержания
фумонизинов  в  исходном  образце, необходимо дополнительно учесть
это разбавление (К    ):
                  д.р.

<a id="p100171"></a>                  C      = 2,5 x К     x C      ,
                   (ФВ )          д.р.    э(ФВ )
                      1                       1

<a id="p100172"></a>                  C      = 2,5 x К     x C      ,
                   (ФВ )          д.р.    э(ФВ )
                      2                       2

<a id="p100173"></a>    где К     - коэффициент дополнительного разбавления экстракта.
         д.р.
<a id="p100174"></a>    В  указанных  условиях  время  удерживания находится для ФВ  в
                                                               1
диапазоне  от  7,0  до  8,5,  для ФВ  - 24 - 27 мин. Примерный вид
                                    2
хроматограммы, полученной  с помощью модельной смеси, где C      =
                                                           (ФВ )
                                                              1
C      = 0,5 мг/кг, представлен на рис. 1 (не приводится).
 (ФВ )
    2
<a id="p100175"></a>    9.2.   Коэффициент    разбавления   в   случае   использования
ИА-колонок:

                         V  x V  x V
                          1    3    5
<a id="p100176"></a>                    Кр = ------------ = 9,375,
                         М x V  x V
                              2    4

<a id="p100177"></a>    Кр - коэффициент разбавления;
<a id="p100178"></a>    V    -   объем   смеси  ацетонитрил-метанол-вода,  взятой  для
     1
экстракции, мл (50 мл);
<a id="p100179"></a>    М - навеска образца, взятого для анализа, г (10 г);
<a id="p100180"></a>    V   - объем ацетонитрил-метанол-водного экстракта, взятого для
     2
анализа, мл (2 мл);
<a id="p100181"></a>    V   -  объем  смеси  ацетонитрил-метанол-водного  экстракта  и
     3
фосфатного  буферного  раствора,  взятых для центрифугирования, мл
(10 мл);
<a id="p100182"></a>    V    -   объем   смеси  после  центрифугирования,  взятой  для
     4
твердофазной очистки, мл (8 мл);
<a id="p100183"></a>    V    -  объем  собранного  элюата  после  стадии  твердофазной
     5
очистки, мл (3 мл).
<a id="p100184"></a>    Расчет концентрации ФВ  и ФВ  в пробе проводится по формуле:
                          1     2

<a id="p100185"></a>                      C      = 9,375 x C      ,
                       (ФВ )            э(ФВ )
                          1                 1

<a id="p100186"></a>                      C      = 9,375 x C      ,
                       (ФВ )            э(ФВ )
                          2                 2

<a id="p100187"></a>    где:
<a id="p100188"></a>    C - концентрация ФВ  и ФВ , мг/кг;
                       1     2
<a id="p100189"></a>    9,375 - коэффициент разбавления;
<a id="p100190"></a>    C       - концентрация ФВ  в очищенном экстракте, мг/кг;
     э(ФВ )                  1
         1
<a id="p100191"></a>    C       - концентрация ФВ  в очищенном экстракте, мг/кг.
     э(ФВ )                  2
         2
<a id="p100192"></a>    При  высоких  уровнях  загрязнения  фумонизинами  кукурузы или
продуктов  ее  переработки,  экстракт перед реакцией дериватизации
необходимо   разбавить,  в  этом  случае  при  расчете  содержания
фумонизинов  в  исходном  образце, необходимо дополнительно учесть
это разбавление (К    ):
                  д.р.

<a id="p100193"></a>                  C      = 9,375 x К     x C      ,
                   (ФВ )            д.р.    э(ФВ )
                      1                         1

<a id="p100194"></a>                  C      = 9,375 x К     x C      ,
                   (ФВ )            д.р.    э(ФВ )
                      2                         2

<a id="p100195"></a>    где К     - коэффициент дополнительного разбавления экстракта.
         д.р.


## 10. <a id="p100196"></a>Вычисление результатов анализа


<a id="p100197"></a>За окончательный результат испытаний принимается среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений.

<a id="p100198"></a>                C        = (C       + C      ) / 2,
                 (ФВ )ср     (ФВ )1    (ФВ )2
                    1           1         1

<a id="p100199"></a>                C        = (C       + C      ) / 2.
                 (ФВ )ср     (ФВ )1    (ФВ )2

<div align="center">

                    2           2         2

</div>


<a id="p100200"></a>Определяют допустимое расхождение между параллельными определениями r, используя r, % из [табл. 3](#p100207).

<a id="p100201"></a>               r  = 0,01 x (r , %) x C     , мг/кг,
                1            1        (ФВ )
                                         1

<a id="p100202"></a>               r  = 0,01 x (r , %) x C     , мг/кг.
                2            2        (ФВ )
                                         2

<a id="p100203"></a>    Если   расхождение   между   параллельными   определениями  не
превышает допустимого:

<a id="p100204"></a>                    |C       - C      | <= r ,
                      (ФВ )1    (ФВ )2      1
                         1         1

<a id="p100205"></a>                    |C       - C      | <= r ,
                      (ФВ )1    (ФВ )2      2
                         2         2

то среднее арифметическое принимают за результат анализа.

<a id="p100206"></a>Таблица 3

<div align="center">

<a id="p100207"></a>**ЗНАЧЕНИЕ НОРМАТИВОВ ОПЕРАТИВНОГО КОНТРОЛЯ СХОДИМОСТИ**

</div>

**ПРИ ДОВЕРИТЕЛЬНОЙ ВЕРОЯТНОСТИ P = 0,95**


<table>
<colgroup><col width="25%"><col width="20%"><col width="28%"><col width="28%"></colgroup>
<tr><td rowspan="4">Концентрация, мг/кг</td><td rowspan="4">Токсин</td><td colspan="2">Норматив оперативного контроля сходимости, r, %</td></tr>
<tr><td colspan="2">Способ твердофазной экстракции</td></tr>
<tr><td>С18</td><td>ИА</td></tr>
<tr><td>r , % 1</td><td>r , % 2</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>33 -</td><td>10 26</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>28 30</td><td>12 5</td></tr>
<tr><td>1,0</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>24 22</td><td>9 26</td></tr>
<tr><td>5,0</td><td>ФВ 1 ФВ 2</td><td>30 28</td><td>32 30</td></tr>
</table>


<a id="p100217"></a>При превышении норматива r следует повторить измерения, используя резервные пробы. В случае повторного превышения указанного норматива, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам анализа, устраняют их и повторяют анализ пробы.


## 11. <a id="p100218"></a>Оперативный контроль результатов измерения



### <a id="p100219"></a>11.1. Алгоритм проведения оперативного контроля воспроизводимости


<a id="p100220"></a>Периодичность контроля воспроизводимости измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
<a id="p100221"></a>Пробами для контроля являются рабочие пробы продуктов, продовольственного сырья. Отбирают 2 пробы, которые анализируют в точном соответствии с прописью методики, максимально варьируя условия проведения анализа, а именно используя разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов и участие двух разных аналитиков. Целесообразно также проведение анализа этих аналитических проб в разных лабораториях.


### <a id="p100222"></a>11.2. Алгоритм проведения оперативного контроля погрешности


<a id="p100223"></a>Периодичность контроля погрешности измерений зависит от количества рабочих измерений за контролируемый период и определяется планами контроля.
<a id="p100224"></a>    Образцами  контроля  являются  рабочие пробы пищевых продуктов
или  продовольственного  сырья. Отбирают пробу и разделяют ее на 2
равные  части.  Одну  из  них  оставляют без изменений, а к другой
добавляют  раствор  стандартов ФВ  и ФВ  в таком количестве, чтобы
                                 1     2
массовая  доля  каждого  из  них  в  пробе по сравнению с исходным
значением  увеличилась  на  50  - 100%. Добавка должна вводиться в
пробу перед началом пробоподготовки.
<a id="p100225"></a>    Обе   пробы  анализируют  в  точном  соответствии  с  прописью
методики  и  получают  результаты анализа исходной пробы (C      и
                                                           (ФВ )
                                                              1
C     ),  мг/кг,  и   пробы   с   добавкой  (C'       и  C'     ).
 (ФВ )                                         (ФВ )       (ФВ )
    2                                             1           2
Определение проводят  в  одинаковых  условиях,  а  именно:  анализ
проводит один  аналитик  с  использованием  одного  набора  мерной
посуды, реактивов, растворов и т.д.
<a id="p100226"></a>    Алгоритм   проведения   оперативного  контроля  погрешности  с
использованием  метода  добавок  состоит  в  сравнении  результата
контрольного   определения,  равного  разности  между  результатом
контрольного  измерения пробы с добавкой (C      и C'     ), пробы
                                           (ФВ )     (ФВ )
                                              1         2
без  добавки  (C      и  C     ) и величиной добавки (C          и
                (ФВ )     (ФВ )                        доб(ФВ )
                   1         2                               1
C        ),  с  нормативом  оперативного  контроля  К.  Решение об
 доб(ФВ )
       2
удовлетворительной  погрешности принимается при выполнении условия
(при P = 0,95):

<a id="p100227"></a>               |C'      - C      - C        | <= К,
                  (ФВ )    (ФВ )    доб(ФВ )
                     1        1           1

<a id="p100228"></a>               |C'      - C      - C        | <= К.
                  (ФВ )    (ФВ )    доб(ФВ )
                     2        2           2

<a id="p100229"></a>    Норматив  оперативного  контроля  погрешности  рассчитывают по
формулам при проведении:
    - <a id="p100230"></a>внутрилабораторного контроля (P = 0,90):

                       2                 2        1/2
<a id="p100231"></a>     К = 0,84 x (ДЕЛЬТА  C'      + ДЕЛЬТА  C     )   , мг/кг,
                           (ФВ )            (ФВ )
                              1                1

                       2                 2        1/2
<a id="p100232"></a>     К = 0,84 x (ДЕЛЬТА  C'      + ДЕЛЬТА  C     )   , мг/кг;
                           (ФВ )            (ФВ )
                              2                2

    - <a id="p100233"></a>внешнего контроля (P = 0,95):

                    2                 2        1/2
<a id="p100234"></a>         К = (ДЕЛЬТА  C'      + ДЕЛЬТА  C     )   , мг/кг,
                        (ФВ )            (ФВ )
                           1                1

                    2                 2        1/2
<a id="p100235"></a>         К = (ДЕЛЬТА  C'      + ДЕЛЬТА  C     )   , мг/кг,
                        (ФВ )            (ФВ )
                           2                2

<a id="p100236"></a>    где:
          2                  2
<a id="p100237"></a>    ДЕЛЬТА   C'     ,  ДЕЛЬТА   C'      -  абсолютные  погрешности
               (ФВ )              (ФВ )
                  1                  2
измерений для исходной пробы с добавкой, мг/кг;
          2                 2
<a id="p100238"></a>    ДЕЛЬТА  C     ,   ДЕЛЬТА  C       -   абсолютные   погрешности
             (ФВ )             (ФВ )
                1                 2
измерений для исходной пробы, мг/кг;

                 2
<a id="p100239"></a>           ДЕЛЬТА  C      = 0,01 дельта       x C     ,
                    (ФВ )              C         (ФВ )
                       1                (ФВ )       1
                                           1

                 2
<a id="p100240"></a>           ДЕЛЬТА  C      = 0,01 дельта       x C     ;
                    (ФВ )              C         (ФВ )
                       2                (ФВ )       2
                                           2
<a id="p100241"></a>    C     , C      - содержание определяемых компонентов в пробе;
     (ФВ )   (ФВ )
        1       2

               2
<a id="p100242"></a>         ДЕЛЬТА  C'      = 0,01 дельта         x С'     ,
                   (ФВ )               C'          (ФВ )
                      1                  (ФВ )        1
                                            1

               2
<a id="p100243"></a>         ДЕЛЬТА  C'      = 0,01 дельта         x C'     ;
                   (ФВ )               C'          (ФВ )
                      2                  (ФВ )        2
                                            2

<a id="p100244"></a> дельта и дельта приведены в [табл. 1](#p100031).
          C               C'

<div align="center">

           (ФВ )            (ФВ )

</div>

              1                2
<a id="p100245"></a>При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют с использованием другой пробы. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.


## 12. <a id="p100246"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100247"></a>При выполнении анализов необходимо соблюдать правила техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.2.007.0 и [ГОСТ 4658](https://bukva.ai/docs/gost-4658-73). Помещение лаборатории должно соответствовать санитарным правилам проектирования, оборудования, эксплуатации и содержания производственных и лабораторных помещений, предназначенных для проведения работ с органическими растворителями. Аналитическая лаборатория должна быть оснащена вентиляционными системами по ГОСТ 12.4.021.


## 13. <a id="p100248"></a>Требования к квалификации исполнителя


<a id="p100249"></a>    К выполнению анализа ФВ  и ФВ  в пищевых продуктах допускаются
                           1     2
лица  со  специальным  высшим образованием или средним специальным

<div align="center">

образованием,    владеющие    техникой   ВЭЖХ-анализа,   прошедшие

</div>

соответствующую  подготовку  и  имеющие  опыт  работы в химической
лаборатории.


## 14. <a id="p100250"></a>Условия выполнения измерений


<a id="p100251"></a>Температура окружающего воздуха: от 15 до 25 °C.
<a id="p100252"></a>Относительная влажность воздуха: не более 80% при 25 °C.

<div align="center">

<a id="p100253"></a>Атмосферное давление: 730 - 760 мм рт. ст.<br>
<a id="p100254"></a>Напряжение электропитания: 210 - 220 В. Частота переменного тока: 45 - 50 ГЦ.

</div>




<a id="p100255"></a>

---