МУК 4.1.1553-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по измерению концентрации монофосфорного эфира 4-метил-5-бета-оксиэтил-N-(2'-метил-4'-амино-5'-метилпиримидил)-тиазолия монофосфата (фосфотиамина) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

(утв. Минздравом России 29.06.2003)

29 июня 2003 года

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ИЗМЕРЕНИЮ КОНЦЕНТРАЦИИ МОНОФОСФОРНОГО ЭФИРА 4-МЕТИЛ- 5-БЕТА-ОКСИЭТИЛ-N-(2'-МЕТИЛ-4'-АМИНО-5'-МЕТИЛПИРИМИДИЛ)- ТИАЗОЛИЯ МОНОФОСФАТА (ФОСФОТИАМИНА) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Методические указания подготовлены коллективом специалистов в рамках Проблемной Комиссии «Научные основы гигиены труда и профпатологии». Утверждены Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, Председателем Комиссии по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко в июне 2003 г.

Методические указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны (сборник 37) разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочным безопасным уровням воздействия (ОБУВ) — санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.

Методика контроля вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработана и подготовлена в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 ССБТ «Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования».

Методика выполнена с использованием современных методов исследования, метрологически аттестована и дает возможность контролировать концентрации химических веществ на уровне и меньше их ПДК и ОБУВ в воздухе рабочей зоны, установленных в ГН 2.2.5.686-98 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны» и ГН 2.2.5.687-98 «Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

Структурная формула не приводится.

    C  H  N OS х 2H PO  х H O P
     12 17 4       3  4    2 4

М. м. 442,4.

Фосфотиамин — монофосфорный эфир 4-метил-5-бета-оксиэтил-N-(2-метил-4-амино-5-метилпиримидил)-тиазолия фосфат — белый кристаллический порошок со слабым запахом. Легко растворим в воде, практически нерастворим в спирте 95% и хлороформе.

В воздухе находится в виде аэрозоля и паров.

Обладает общетоксическим действием.

ОБУВ в воздухе — 0,1 мг/куб. м.

Характеристика метода

Методика основана на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием УФ-детектора.

Отбор проб производится с концентрированием на фильтр и в метанол.

Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме (10 мкл) — 0,025 мкг.

Нижний предел измерения в воздухе — 0,05 мг/куб. м (при отборе 10 л воздуха).

Диапазон измеряемых концентраций вещества в воздухе от 0,05 до 0,6 мг/куб. м.

Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.

Время выполнения измерения, включая отбор проб, — 1,5 часа.

Приборы, аппаратура, посуда

Микроколоночный жидкостный хроматограф «Милихром» или другой модели с УФ-детектором.

    Хроматографическая  колонка длиной 64 мм, внутренним диаметром
12 мм, заполненная сорбентом "Силасорб C  ".

                                    18

Весы аналитические ВЛР-200, ГОСТ 24104-88Е.

Аспирационное устройство, ГОСТ 17.2.6.01-86.

Стаканы химические вместимостью 25 мл, ГОСТ 25336-82.

Вакуумная установка или роторный испаритель ИР-1, ТУ 25-11-917-76.

Колбы мерные вместимостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74Е.

Пипетки вместимостью 1, 2, 5, 10 мл, ГОСТ 29227-91.

Колбы грушевидные вместимостью 25 мл, ГОСТ 19908-90.

Пробирки мерные вместимостью 10 мл, ГОСТ 1770-74Е.

Поглотительные сосуды с пористой пластинкой, ТУ 25-11-1136-75.

Воронка фильтрующая.

Лупа измерительная ЛИ-3-10Х, ГОСТ 8309-75.

Реактивы, растворы, материалы

Фосфотиамин с содержанием не менее 90%, ФС 42-2331-85, Россия.

Спирт метиловый, ГОСТ 6995-77, 50% раствор.

Кислота о-фосфорная, ГОСТ 6552-80.

Элюент: к 100 мл 50% спирта метилового добавляют около 0,2 мл о-фосфорной кислоты до pH 2,4.

Стандартный раствор № 1 с концентрацией 1000 мкг/мл фосфотиамина готовят растворением 0,1100 г вещества в спирте метиловом 50% в мерной колбе вместимостью 100 мл.

Раствор устойчив в течение 2 недель при хранении в холодильнике.

Стандартный раствор № 2 с концентрацией 100,0 мкг/мл фосфотиамина готовят из стандартного раствора № 1 соответствующим разбавлением спиртом метиловым 50% в мерной колбе вместимостью 50 мл.

Градуировочные растворы с концентрацией 2,5-5-10-15-20-30 мкг/мл фосфотиамина готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора № 2 спиртом метиловым 50%.

Растворы применяют свежеприготовленными.

Фильтры АФА-ХА-10, ТУ 85-743-80.

Отбор пробы воздуха

Воздух с объемным расходом 1 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ХА-10 и поглотительный сосуд с 5 мл 50% метанола. Отбор проб производят с охлаждением. Для измерения 0,5 ОБУВ следует отобрать 10 л воздуха. Срок хранения отобранных проб — одни сутки в холодильнике.

Подготовка к измерению

Инжектируют в хроматограф от 0,025 до 0,3 мкг фосфотиамина из градуировочных растворов при максимальном объеме вводимой пробы 10 мкл.

Хроматографическая колонка промышленного изготовления.

Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

    Температура колонки                       +20 °C
    Скорость потока подвижной фазы            100 мкл/мин.
    Длина волны УФ-детектора                  240 нм
    Диапазон чувствительности УФ-детектора    1,6 единицы

                                          оптической плотности

    Время удерживания фосфотиамина            1,6 мин.
    Максимальный объем вводимой пробы         10 мкл
    Скорость движения диаграммной ленты       180 мм/мин.

На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков (кв. мм) от содержания вещества в хроматографируемом объеме пробы (мкг).

Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 5 точкам, выполняя 6 параллельных измерений для каждого раствора. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

Проведение измерения

Фильтр и содержимое поглотительного сосуда помещают в колориметрическую пробирку и доводят объем до 5 мл 50% метанола. Оставляют на 10 — 15 мин., периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтр отжимают и удаляют. Степень десорбции с фильтра — 96%. Полученный раствор сливают в грушевидную колбу и упаривают досуха под вакуумом при температуре 50 — 60 °C. Сухой остаток растворяют в 0,2 мл спирта метилового 50%, подкисленного кислотой о-фосфорной до pH 2,4.

Параллельно с анализом проб проводят хроматографирование раствора, полученного обработкой чистого фильтра.

Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Количественное определение фосфотиамина (мкг) проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

Расчет концентрации

Концентрацию фосфотиамина в воздухе «C» (мг/куб. м) вычисляют по формуле:

                            a х B

C = -----, б х V

где:

a — содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

B — общий объем раствора пробы, мл;

б — объем раствора пробы, взятый для хроматографирования, мл;

V — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).

Приложение 1

Приведение объема воздуха к стандартным условиям проводят по следующей формуле:

                      V  x (273 + 20) x P
                       t

                    V   = -------------------,
                     20    (273 + t) x 101,33

где:

V — объем воздуха, отобранный для анализа, л; t

P — барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t — температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V следует пользоваться таблицей 20 коэффициентов (Приложение 2). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V на соответствующий коэффициент. t

°C	Давление P, кПа/мм рт. ст.
	97,33/ 97,86/ 98,4/ 98,93/ 99,46/ 100/ 100,53/ 101,06/ 101,33/ 101,86/ 730 734 738 742 746 750 754 758 760 764
-30	1,1582 1,1646 1,1709 1,1772 1,1836 1,1899 1,1963 1,2026 1,2058 1,2122
-26	1,1393 1,1456 1,1519 1,1581 1,1644 1,1705 1,1768 1,1831 1,1862 1,1925
-22	1,1212 1,1274 1,1336 1,1396 1,1458 1,1519 1,1581 1,1643 1,1673 1,1735
-18	1,1036 1,1097 1,1158 1,1218 1,1278 1,1338 1,1399 1,1460 1,1490 1,1551
-14	1,0866 1,0926 1,0986 1,1045 1,1105 1,1164 1,1224 1,1284 1,1313 1,1373
-10	1,0701 1,0760 1,0819 1,0877 1,0986 1,0994 1,1053 1,1112 1,1141 1,1200
-6	1,0540 1,0599 1,0657 1,0714 1,0772 1,0829 1,0887 1,0945 1,0974 1,1032
-2	1,0385 1,0442 1,0499 1,0556 1,0613 1,0669 1,0726 1,0784 1,0812 1,0869
0	1,0309 1,0366 1,0423 1,0477 1,0535 1,0591 1,0648 1,0705 1,0733 1,0789
+2	1,0234 1,0291 1,0347 1,0402 1,0459 1,0514 1,0571 1,0627 1,0655 1,0712
+6	1,0087 1,0143 1,0198 1,0253 1,0309 1,0363 1,0419 1,0475 1,0502 1,0557
+10	0,9944 0,9999 0,0054 1,0108 1,0162 1,0216 1,0272 1,0326 1,0353 1,0407
+14	0,9806 0,9860 0,9914 0,9967 1,0027 1,0074 1,0128 1,0183 1,0209 1,0263
+18	0,9671 0,9725 0,9778 0,9830 0,9884 0,9936 0,9989 1,0043 1,0069 1,0122
+20	0,9605 0,9658 0,9711 0,9783 0,9816 0,9868 0,9921 0,9974 1,0000 1,0053
+22	0,9539 0,9592 0,9645 0,9696 0,9749 0,9800 0,9853 0,9906 0,9932 0,9985
+24	0,9475 0,9527 0,9579 0,9631 0,9683 0,9735 0,9787 0,9839 0,9865 0,9917
+26	0,9412 0,9464 0,9516 0,9566 0,9618 0,9669 0,9721 0,9773 0,9799 0,9851
+28	0,9349 0,9401 0,9453 0,9503 0,9555 0,9605 0,9657 0,9708 0,9734 0,9785
+30	0,9288 0,9339 0,9391 0,9440 0,9432 0,9542 0,9594 0,9645 0,9670 0,9723
+34	0,9167 0,9218 0,9268 0,9318 0,9368 0,9418 0,9468 0,9519 0,9544 0,9595
+38	0,9049 0,9099 0,9149 0,9199 0,9248 0,9297 0,9347 0,9397 0,9421 0,9471

---