--- title: "\"МУК 4.1.1489-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой доли битрекса (денатоний бензоата) в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции из всех видов сырья методами спектрофотометрии и тонкослойной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1489-03" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1489-03" --- ## "МУК 4.1.1489-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой доли битрекса (денатоний бензоата) в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции из всех видов сырья методами спектрофотометрии и тонкослойной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1489-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение массовой доли битрекса (денатоний бензоата) в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции из всех видов сырья методами спектрофотометрии и тонкослойной хроматографии. Методические указания" (утв. Минздравом России 29.06.2003) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
29 июня 2003 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ МАССОВОЙ ДОЛИ БИТРЕКСА (ДЕНАТОНИЙ БЕНЗОАТА)** **В ЭТИЛОВОМ СПИРТЕ И СПИРТОСОДЕРЖАЩЕЙ ПРОДУКЦИИ** **ИЗ ВСЕХ ВИДОВ СЫРЬЯ МЕТОДАМИ СПЕКТРОФОТОМЕТРИИ** **И ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1489-03**
Дата введения
30 июня 2003 года 1. Разработаны Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана Минздрава России (Т.В. Юдина, Н.Е. Федорова, С.И. Волчек, В.Н. Волкова). 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Минздрава России. 3. Утверждены 29 июня 2003 г. и введены 30 июня 2003 г. Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. Введение Настоящий документ устанавливает метод спектрофотометрии (СФ) и тонкослойной хроматографии (ТСХ) для определения массовой концентрации битрекса (денатоний бензоата) в этиловом спирте и спиртосодержащей продукции из всех видов сырья в диапазонах соответственно 0,00025% масс. - 0,00125% масс, и 0,00025% масс. - 0,0025% масс. Денатоний бензоат - Битрекс. Химическое наименование: N-[2-((2,6-Диметилфенил)амино)-2-оксоэтил]-N,N-диэтилбензолметанаммонийбензоат. C H N O М. м. 446,59 28 34 2 3 ## 2. Характеристика погрешности измерений Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 15% (спектрофотометрический метод) и +/- 20% (метод ТСХ), при доверительной вероятности 0,95. ## 3. Метод измерений Спектрофотометрический метод основан на образовании извлекаемых бензолом окрашенных в желтый цвет продуктов реакции битрекса с бромфеноловым синим в кислой среде. Определению не мешают диэтилфталат, алифатические спирты. Определению мешают четвертичные соли аммония, алкалоиды, окрашенные вещества. Нижний предел измерения в анализируемой пробе - 0,0001% масс. Метод тонкослойной хроматографии основан на разделении веществ в тонком слое силикагеля с последующим обнаружением зон локализации битрекса модифицированным реактивом Драгендорфа. Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 5 мкг. Измерению не мешают диэтиловый эфир, уксусный и кротоновый альдегиды, ацетон, алифатические спирты, диэтилфталат. ## 4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы #### 4.1 Средства измерений Спектрофотометр СФ-46 или аналогичный Весы аналитические лабораторные (ВЛР-200, ВЛА-200) ГОСТ 24104 Колбы мерные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 1770 Пипетки вместимостью 0,1; 1; 2; 5 и 10 куб. см [ГОСТ 20292](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Цилиндры мерные вместимостью 10 и 50 куб. см ГОСТ 1770 Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими метрологическими характеристиками. #### 4.2 Реактивы Аммиак водный, 25%-ный раствор ГОСТ 3760 Барий двухлористый, х.ч., 20%-ный водный раствор [ГОСТ 4108](https://bukva.ai/docs/gost-4108-72) Бензол, х.ч. [ГОСТ 5955](https://bukva.ai/docs/gost-5955-75) Битрекс (денатоний бензоат), 1%-ный раствор в этиловом спирте Фармакопейная статья Бромфеноловый синий водорастворимый **ВТУ-МХП-53** Висмут (III) азотнокислый, ч.д.а. ГОСТ 4110 Вода дистиллированная ГОСТ 6709 Натр едкий, 0,01 н водный раствор ГОСТ 4238 Калий йодистый, х.ч., 40%-ный водный раствор ГОСТ 4232 Кислота ортофосфорная, 80%-ная, х.ч. ГОСТ 6552 Кислота уксусная ледяная, х.ч. ГОСТ 61 Пропанол-1, хч ТУ 6-09-4344-77 Соляная кислота, хч, 4 н водный раствор ГОСТ 3118 Спирт этиловый ректификованный [ГОСТ 5962](https://bukva.ai/docs/gost-5962-67) #### 4.3 Вспомогательные устройства и материалы Бюксы ГОСТ 25336 Делительные воронки вместимостью 150 куб. см ГОСТ 25336 Кюветы с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм Масляная баня с контактным термометром Пластинки "Силуфол УФ-254" размером 20 х 20 см (Хемапол, Чехия) Пробирки колориметрические плоскодонные из бесцветного стекла, высота 120 мм, внутренний диаметр 15 мм [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Пробирки центрифужные вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770 Камера хроматографическая ГОСТ 25336 Пульверизатор ГОСТ 25336 Колба плоскодонная на шлифе вместимостью 150 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93) Фарфоровые чашки ГОСТ 9147 Допускается применение другого оборудования и хроматографических пластинок с аналогичными техническими характеристиками, обеспечивающих аналогичное разделение. ## 5. Требования безопасности При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на прибор. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных [ГН 2.2.5.686-98](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-4) "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда осуществляется по ГОСТ 12.0.004. ## 6. Требования к квалификации оператора К выполнению измерений и обработке их результатов допускают специалиста, имеющего высшее или среднее специальное химическое образование или опыт работы в химической лаборатории, прошедшего обучение, освоившего метод в процессе тренировки и уложившегося в нормативы оперативного контроля при выполнении процедур контроля погрешности. ## 7. Условия выполнения измерений При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия: - температура воздуха (20 +/- 5) °С; - атмосферное давление 84,0 - 106,7 кПа (630 - 800 мм рт. ст.); - влажность воздуха не более 80% при температуре 25 °С; - напряжение в сети от 187 до 242 В; - частота переменного тока (50 +/- 1) Гц. ## 8. Подготовка к выполнению измерений #### 8.1 Метод спектрофотометрии ##### 8.1.1 Приготовление 0,04%-ного раствора бромфенолового синего Раствор индикатора готовят в день проведения анализа. Навеску красителя массой 40 мг помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, вносят 1 куб. см 0,01 н раствора едкого натра, доводят объем до метки водой. ##### 8.1.2 Приготовление рабочих стандартных растворов для градуировки прибора Рабочие стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005% масс., готовят из основного стандартного 1%-ного раствора битрекса соответствующим разбавлением водой. ##### 8.1.3 Установление градуировочной характеристики В пять делительных воронок вносят по 50 куб. см каждого из стандартных растворов битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005%, добавляют 0,5 куб. см 4 н раствора соляной кислоты, 2 куб. см 0,04%-ного раствора бромфенолового синего и 10 куб. см бензола. Реакционную смесь в воронке встряхивают 2 мин., дают расслоиться (20 - 30 с), затем снова энергично встряхивают и выдерживают несколько минут до полного разделения смеси. Верхний бензольный слой переносят в колориметрическую пробирку и фотометрируют в кювете толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 410 нм относительно контрольной пробы, которую готовят одновременно и аналогично стандартным пробам, используя вместо стандартного раствора 50 куб. см дистиллированной воды. Строят градуировочный график N 1 зависимости оптической плотности (ед. ОП) от концентрации битрекса в растворе (% масс.). #### 8.2 Метод ТСХ ##### 8.2.1 Приготовление проявляющего реактива Основной раствор. Навеску нитрата висмута массой 0,17 г помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в 22 куб. см ледяной уксусной кислоты, добавляют 10 куб. см 40%-ного раствора йодистого калия, доводят объем в колбе до метки дистиллированной водой. Раствор при хранении в холодильнике пригоден к употреблению в течение 2 недель. Рабочий раствор. К 10 куб. см основного раствора прибавляют 1 куб. см 80%-ной ортофосфорной кислоты, 10 куб. см этилового спирта и 5 куб. см 20%-ного двухлористого бария. Раствор готовят перед употреблением. ##### 8.2.2 Приготовление подвижной фазы для ТСХ В колбу вместимостью 150 куб. см вносят 37 куб. см 25%-ного раствора аммиака и 84 куб. см н-пропанола, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6 - 8 мм за 30 мин. до начала хроматографирования. ##### 8.2.3 Приготовление рабочих стандартных растворов битрекса Рабочие стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс., готовят из основного стандартного 1%-ного раствора битрекса соответствующим разбавлением этиловым спиртом. #### 8.3 Отбор проб Отбор проб проводится в соответствии с [ГОСТ 5964-93](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-196-gosstandart-rossii). ## 9. Выполнение измерений #### 9.1 Метод спектрофотометрии Пробу анализируемого спирта массой 20 г <*> помещают в фарфоровую чашку и выпаривают на масляной бане при температуре не выше 105 °С почти досуха. Остаток растворяют в 50 куб. см воды, переносят в делительную воронку и анализируют по [п. 8.1.3](#p100046). --- <*> Масса спирта, взятого для анализа, может быть увеличена или уменьшена, если полученные величины оптической плотности выходят за пределы градуировочного графика. Концентрацию битрекса в растворе определяют по градуировочному графику N 1. #### 9.2 Метод ТСХ Пробу анализируемого спирта массой 2,0 г, взвешенную в бюксе, помещают в центрифужную пробирку, отдувают потоком теплого воздуха до объема около 0,5 куб. см и количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят по 0,5 куб. см стандартных растворов битрекса с концентрацией 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-пропанол - 25%-ный аммиак (84:37 по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, оставляют под тягой до испарения растворителей, затем обрабатывают из пульверизатора проявляющим реактивом. Битрекс проявляется на пластинке в виде оранжевых пятен на светло-желтом фоне, темнеющем до глубокого коричневого в течение 10 - 15 мин., что обусловлено присутствием крахмала в закрепленном слое силикагеля пластинок "Силуфол". Rf = 0,68 +/- 0,05. Содержание битрекса в пятне определяют визуально сравнением площади интенсивности пятен анализируемого раствора и стандартов или рассчитывая площадь пятен с использованием миллиметровой бумаги. Допустимо построение градуировочной характеристики зависимости площади пятна (в кв. мм) от содержания битрекса в анализируемом растворе (в % масс.) ## 10. Обработка и оформление результатов измерений #### 10.1 Метод спектрофотометрии Массовую концентрацию битрекса в пробе (% масс.) определяют методом абсолютной калибровки по формуле: С = Х х К, где: С - концентрация битрекса в растворе, % масс.; Х - концентрация битрекса в растворе, найденная по градуировочному графику, % масс.; К - коэффициент, равный отношению массы, добавленной к сухому остатку воды, к массе взятого для анализа спирта (К = 2,5). #### 10.2 Метод ТСХ Массовую концентрацию битрекса в пробе (% масс.) оценивают путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен анализируемой пробы и серии стандартов и рассчитывают по формуле: С = Х х К, где: С - концентрация битрекса в анализируемом растворе, % масс.; Х - концентрация битрекса в стандартном растворе, площадь и интенсивность пятна которого соответствует анализируемому, % масс.; К - коэффициент концентрирования пробы (К = 0,2). За окончательный результат анализа принимается среднее арифметическое (С ) результатов двух параллельных определений, ср допустимые расхождения между которыми не должны превышать +/- 20 %. Указывается значение погрешности результата ДЕЛЬТА (% масс.): _ дельта х Х ДЕЛЬТА = ----------, 100 где дельта - граница допускаемой погрешности измерения массовой концентрации битрекса [(п. 2)](#p100015), %. Результат измерения должен заканчиваться тем же десятичным разрядом, что и погрешность. Результаты измерений оформляются записью в журнале и удостоверяются специалистом, проводившим измерения. ## 11. Контроль погрешности измерений Внутренний оперативный контроль (ВОК) качества результатов измерений проводят в соответствии с требованиями [ГОСТ Р 8.563-96](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-329) и [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). #### 11.1 Контроль погрешности измерений Внутренний оперативный контроль погрешности измерений проводят в лаборатории до и после проведения серии измерений рабочих проб. Образцами для контроля служат градуировочные стандартные растворы битрекса с массовыми концентрациями 0,0001; 0,0002; 0,0003; 0,0004 и 0,0005% масс., (метод спектрофотометрии) или 0,00125; 0,0025; 0,005; 0,0075 и 0,0125% масс., (метод ТСХ). Процедура контроля состоит в приготовлении растворов по [п. п. 8.1.2](#p100044) или [8.2.3](#p100057), определении содержания битрекса в образцах по [п. п. 9.1](#p100062) или [9.2](#p100067). Измерения считают соответствующими нормативу оперативного контроля погрешности, если выполняется условие: |Х - Х | < 0,01 х Х х К, m m где: К - норматив оперативного контроля погрешности, равный 15% (метод спектрофотометрии) или 20% (метод ТСХ); Х - результат определения концентрации битрекса, % масс.; Х - содержание битрекса в контрольном растворе, % масс. m При превышении норматива оперативного контроля погрешности эксперимент повторяют. При повторном превышении норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
Результаты контрольных измерений заносят в рабочий журнал.
#### 11.2 Контроль сходимости результатов параллельных измерений Внутренний оперативный контроль сходимости результатов параллельных определений осуществляют в процессе измерений по размаху результатов. Решение об удовлетворительной сходимости принимают при выполнении условия: _ |Х - Х | < 0,01 х Х х D, 1 2 где: Х и Х - результаты двух параллельных определений 1 2 концентрации битрекса, % масс.; _ Х - среднее арифметическое Х и Х , % масс.; 1 2 D - норматив оперативного контроля воспроизводимости измерений, равный 20%. При превышении норматива оперативного контроля сходимости проводят два дополнительных измерения, отбрасывают наибольший и наименьший результат и проводят повторный контроль сходимости. При превышении норматива измерения приостанавливают, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.
Результаты измерений заносят в рабочий журнал.
## 12. Разработчики Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волчек С.И., Волкова В.Н. (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана). ---