---
title: "\"МУК 4.1.1245-03, МУК 4.1.1477-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур (колосовые, рис, кукуруза, просо), в горохе, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.1477-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/ukazanie-ukazaniya-muk-4-1-1477-03"
---

## "МУК 4.1.1245-03, МУК 4.1.1477-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур (колосовые, рис, кукуруза, просо), в горохе, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.1245-03, МУК 4.1.1477-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств тиабендазола в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур (колосовые, рис, кукуруза, просо), в горохе, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Минздравом России 16.03.2003, 29.06.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
16 марта 2003 года,

</div>

29 июня 2003 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ**
**ТИАБЕНДАЗОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ**
**КУЛЬТУР (КОЛОСОВЫЕ, РИС, КУКУРУЗА, ПРОСО), В ГОРОХЕ,**
**ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1245-03, МУК 4.1.1477-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 июля 2003 года

1. <a id="p100006"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко МУК 4.1.1245-03 16 марта 2003 года, МУК 4.1.1477-03 29 июня 2003 г.
2. <a id="p100007"></a>Введены с 1 июля 2003 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100009"></a>Вводная часть


<a id="p100010"></a>Фирма-производитель: Август, Кеминова, Агро Эксперт групп, Северо-Кавказский Агрохим.
<a id="p100011"></a>Торговое наименование: ВИАЛ, Винцит, Винер, Витацит.
<a id="p100012"></a>Действующее вещество: тиабендазол.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>2-(1,3-тиазол-4-ил)бензимидазол (IUPAC).
<a id="p100015"></a>2-(4-тиазолил)-1 Н-бензимидазол (С.А.).
<a id="p100016"></a>    Брутто формула: C  H N S.
                     10 7 3
    Мол. масса: 201,3.
    Белое  кристаллическое  вещество. Температура плавления: 297 -
                                               -4
298  °С.  Давление  паров  при  25 °С: 4,6 x 10   мПа. Коэффициент
распределения н-октанол/вода: K   logP = 2,39 (pH 7).
                               ow
    Растворимость  (г/л)  при 20 °С:  н-гептан - < 0,01,  ксилол -
0,13,   ацетон - 2,43,   1,2-дихлорэтан -  0,81,   метанол - 8,28,
этилацетат   -  1,49,  н-октанол  -  3,91,  вода  -  10,0  (pH 2),
0,16 (pH 4), 0,03 (pH 7 - 10).
    Устойчив  к  гидролизу.  Водный  фотолиз (20 °С, pH 5, DT   29
                                                             50
часов); pKa  = 4,73; pKa = 12,00.
           1            2
    Краткая  токсикологическая  характеристика: острая пероральная
токсичность  (LD  )  для  мышей - 3600 мг/кг,   крыс - 3100 мг/кг,
                50
кроликов  -   3800  мг/кг,   птиц  -   более  2250  мг/кг;  острая
дермальная токсичность (LD  )  для кроликов - более 2000 мг/кг, не
                          50
ирритант;  ингаляционная  токсичность  (LC  ) для крыс - более 0,5
                                          50
мг/кг. Не токсичен для пчел. СК   для рыб 0,55 мг/л при экспозиции
                               50
96 часов. Класс токсичности по ВОЗ - III.
<a id="p100017"></a>Гигиенические нормативы для тиабендазола в России:
<a id="p100018"></a>ОДК в почве - 1,0 мг/кг;
<a id="p100019"></a>ОДУ в воде водоемов - 0,05 мг/л (с.-т.);
<a id="p100020"></a>МДУ: для зерна хлебных злаков - 0,2 мг/кг (ВМДУ). Для зерна риса, кукурузы и проса, гороха, семян и масла подсолнечника гигиенические нормативы в России не установлены.
<a id="p100021"></a>Область применения препарата: системный фунгицид защитного и лечебного действия. Тиабендазол образует защитный слой на обработанной поверхности плодов и клубней, используется на овощных, плодовых и зерновых культурах. Не совместим с купратами и окисляющими агентами, такими, как хлораты и нитраты.


## 2. <a id="p100022"></a>Методика определения тиабендазола в воде, почве, зерне и соломе зерновых культур (колосовые, рис, кукуруза, просо), в горохе, зеленой массе, семенах и масле подсолнечника методом ВЭЖХ



### <a id="p100023"></a>2.1. Основные положения



#### <a id="p100024"></a>2.1.1. Принцип метода


<a id="p100025"></a>Методика основана на определении тиабендазола методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов водно-ацетоновой смесью и очистке путем перераспределения между двумя жидкими фазами, а также на колонке с силикагелем.


#### <a id="p100026"></a>2.1.2. Метрологическая характеристика метода


<a id="p100027"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и [2.](#p100043)

<a id="p100028"></a>Таблица 1

<a id="p100029"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**


| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24) | Относительное стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего, n = 24, P = 0,95 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| Вода | 0,002 | 0,002 - 0,02 | 93,1 | 4,84 | 4,24 |
| Почва | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 86,1 | 3,15 | 2,76 |
| Зеленая масса подсолнечника | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 83,7 | 5,61 | 4,92 |
| Масло подсолнечника | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 94,0 | 2,75 | 2,41 |
| Семена подсолнечника | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 85,1 | 4,49 | 3,94 |
| Солома | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 87,8 | 7,12 | 6,24 |
| Зерно зерновых колосовых | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 90,0 | 3,38 | 2,96 |
| Зерно риса | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 85,0 | 4,41 | 3,87 |
| Зерно проса | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 86,6 | 4,42 | 3,87 |
| Зерно кукурузы | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 85,3 | 5,86 | 5,14 |
| Горох | 0,02 | 0,02 - 0,2 | 81,4 | 5,46 | 4,79 |


<a id="p100042"></a>Таблица 2

<div align="center">

<a id="p100043"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИАБЕНДАЗОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ,**<br>
**ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА, ЗЕРНЕ КУКУРУЗЫ И ПРОСА, ГОРОХЕ**

</div>

**(N = 5 ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="15%"><col width="17%"><col width="25%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Внесено, мг/кг</td><td>Найдено, мг/кг</td><td>Стандартное отклонение, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>6</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Вода</td><td>0,002</td><td>0,00189</td><td>-5 8,07 x 10</td><td>94,3</td></tr>
<tr><td>0,004</td><td>0,00370</td><td>-4 2,25 x 10</td><td>92,5</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>0,00927</td><td>-4 5,16 x 10</td><td>92,7</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>0,0186</td><td>-4 9,32 x 10</td><td>93,0</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>93,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Почва</td><td>0,02</td><td>0,0168</td><td>-4 4,97 x 10</td><td>84,1</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0342</td><td>-4 8,80 x 10</td><td>85,6</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0883</td><td>-3 3,77 x 10</td><td>88,3</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1728</td><td>-3 8,29 x 10</td><td>86,4</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зеленая масса подсолнечника</td><td>0,02</td><td>0,0168</td><td>-3 1,52 x 10</td><td>84,1</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0313</td><td>-3 1,54 x 10</td><td>78,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0875</td><td>-3 4,82 x 10</td><td>87,5</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1698</td><td>-2 1,30 x 10</td><td>84,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>83,7</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Масло подсолнечника</td><td>0,02</td><td>0,0190</td><td>-4 4,60 x 10</td><td>95,2</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0385</td><td>-4 6,81 x 10</td><td>96,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0957</td><td>-3 4,46 x 10</td><td>95,7</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1778</td><td>-3 5,06 x 10</td><td>88,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>94,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Семена подсолнечника</td><td>0,02</td><td>0,0181</td><td>-3 1,06 x 10</td><td>90,5</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0324</td><td>-3 1,77 x 10</td><td>81,0</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0861</td><td>-3 5,10 x 10</td><td>86,1</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1658</td><td>-3 6,33 x 10</td><td>82,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Солома</td><td>0,02</td><td>0,0177</td><td>-3 1,74 x 10</td><td>88,3</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0351</td><td>-3 2,79 x 10</td><td>87,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0905</td><td>-3 5,44 x 10</td><td>90,5</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,170</td><td>-2 1,50 x 10</td><td>85,0</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>87,8</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно зерновых колосовых</td><td>0,02</td><td>0,0194</td><td>-4 5,03 x 10</td><td>96,8</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0368</td><td>-3 1,67 x 10</td><td>92,1</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0872</td><td>-3 3,47 x 10</td><td>87,2</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1682</td><td>-3 6,70 x 10</td><td>84,0</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>90,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно риса</td><td>0,02</td><td>0,0173</td><td>-4 8,12 x 10</td><td>86,4</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0350</td><td>-3 1,73 x 10</td><td>87,5</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0851</td><td>-3 4,44 x 10</td><td>85,1</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1622</td><td>-3 9,61 x 10</td><td>81,1</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,0</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно проса</td><td>0,02</td><td>0,0182</td><td>-4 9,57 x 10</td><td>91,0</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0325</td><td>-4 1,84 x 10</td><td>81,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0852</td><td>-3 4,22 x 10</td><td>85,2</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1774</td><td>-3 8,13 x 10</td><td>88,7</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>86,6</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно кукурузы</td><td>0,02</td><td>0,0179</td><td>-3 1,03 x 10</td><td>89,7</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0341</td><td>-3 2,26 x 10</td><td>85,3</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0844</td><td>-3 5,35 x 10</td><td>84,4</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1638</td><td>-2 1,46 x 10</td><td>81,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>85,3</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Горох</td><td>0,02</td><td>0,0162</td><td>-4 9,96 x 10</td><td>81,2</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>0,0324</td><td>-3 1,81 x 10</td><td>81,1</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0834</td><td>-3 5,29 x 10</td><td>83,4</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1598</td><td>-3 1,41 x 10</td><td>79,9</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>81,4</td></tr>
</table>



#### <a id="p100068"></a>2.1.3. Избирательность метода


<a id="p100069"></a>Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.


### <a id="p100070"></a>2.2. Реактивы и материалы


<a id="p100071"></a>Ацетон, чда ГОСТ 2603-79
Ацетонитрил для ВЭЖХ, "В-230НМ" или хч     ТУ 6-09-3534-87
Бумажные фильтры "красная лента"           ТУ 6.091678-86
Вода бидистиллированная, деионизированная  ГОСТ 6709-79
Тиабендазол, аналитический стандарт с
с содержанием д.в. 98,7%, производства
**ВНИИХСЗР**
Дихлорметан, хч                            ТУ 2631-019-44493179-98
Калий углекислый, хч [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76)
Калия перманганат ГОСТ 20490-75
Калий фосфорно-кислый 1-замещенный, ч [ГОСТ 245-76](https://bukva.ai/docs/gost-245-76)
Кислота ортофосфорная, чда 85%-ный
раствор, имп. (Бельгия) или хч ГОСТ 6552-80
Кислота соляная, хч ГОСТ 3118-77
Натрий серно-кислый безводный, ч,
свежепрокаленный [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
Натрия гидроксид, хч ГОСТ 4328-77
н-Гексан, хч, свежеперегнанный             ТУ 2631-003-05807999-98
Подвижная фаза для ВЭЖХ:
1. ацетонитрил - 0,02М раствор Н РО
                                3  4
(9:91, по объему);
2. ацетонитрил - 0,05М КН РО  (pH 2,2)
                         2  4
(15:85, по объему)
Силикагель для колоночной хроматографии
60 (0,040 - 0,063 mm) (Merck, Германия)
Стекловата
Фосфора пентоксид, ч                       МРТУ 6-09-5759-69
Элюент N 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-ацетон (70:30, по объему)
Элюент N 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-ацетон (40:60, по объему)


### <a id="p100072"></a>2.3. Приборы и посуда


<a id="p100073"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы
"Waters" с УФ-детектором (Waters 2487),
снабженный дегазатором и термостатом
колонки или "Gold System" фирмы "Beckman",
снабженный двойным насосом и УФ-детектором
или аналогичный
Колонка Symmetry С-18 (250 x 4,6) мм,
зернение 5 мкм (Waters, USA) или Nucleosyl
С-18 (250 x 4,6) мм, зернение 5 мкм
(Sygma-Aldrich, USA)
Предколонка Waters Symmetry С-18 или
Nucleosyl С-18 для защиты аналитической
колонки
Весы аналитические ВЛА-200                 ГОСТ 34104-80Е
или аналогичные
Установка ультразвуковая "Серьга"          ТУ 3.836.008
Мельница ножевая РМ-120 и лабораторная
зерновая ЛМЗ                               ТУ 1-01-0593-79
Гомогенизатор                              МРТУ 42-1505-63
Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М     ТУ 25-11-917-74
или аналогичный
Бидистиллятор
Насос водоструйный                         МРТУ 42 861-64
РН-метр универсальный ЭВ-74 ГОСТ 22261-76
Колбы плоскодонные на шлифах КШ500
**29/32 ТС                                   ГОСТ 10384-72**
Колбы круглодонные на шлифах КШ50
**29-32 ТС                                   ГОСТ 10384-72**
Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
Воронки делительные ВД-3-500               ГОСТ 8613-75
Цилиндры мерные на 100, 250
и 1000 куб. см                             ГОСТ 1774-74
Колбы мерные на 25, 50, 100
и 1000 куб. см                             ГОСТ 1770-74
Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см             ГОСТ 22292-74


### <a id="p100074"></a>2.4. Подготовка к определению



#### <a id="p100075"></a>2.4.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей


<a id="p100076"></a>Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции кислоты, затем промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
<a id="p100077"></a>    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO  и 2 г K CO ).
                 4        2  3
<a id="p100078"></a>Ацетонитрил (хч) сушат над пентоксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием.


#### <a id="p100079"></a>2.4.2. Кондиционирование колонки


<a id="p100080"></a>Перед началом анализа колонку Symmetry C-18 или Nucleosyl С-18 кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 мл/мин.) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 часов.


#### <a id="p100081"></a>2.4.3. Приготовление растворов


<a id="p100082"></a>    Для   получения   0,05М    раствора   калия   фосфорно-кислого
1-замещенного  6,8  г  кристаллического  KH PO   помещают в мерную
                                           2  4
колбу  объемом  1  л,  растворяют в 600 мл дистиллированной воды и
доводят объем до метки дистиллированной водой. Для получения 0,02M
раствора  ортофосфорной  кислоты  2 г 98%-ной (или 2,24 г 87%-ной)
кристаллической  H PO   помещают  в  мерную  колбу  объемом  1  л,
                  3  4
растворяют  в  600  мл  дистиллированной  воды  и доводят до метки
дистиллированной  водой.  Для получения 50%-ного водного ацетона в
колбе   емкостью   1   л   смешивают  500  мл  ацетона  с  500  мл
дистиллированной  воды, используя мерные  цилиндры. Для  получения
4М раствора  NaOH  160 г гидроксида натрия помещают в мерную колбу
объемом  1  л, растворяют в 600 мл дистиллированной воды и доводят
объем до метки дистиллированной водой. Для приготовления подвижной
фазы  N  1 в колбе на  1000 мл смешивают 400 мл ацетонитрила с 600
мл    0,02М    ортофосфорной   кислоты,   смесь   фильтруют,   при
необходимости  дегазируют.  Для  приготовления  подвижной фазы N 2
смешивают  в  колбе  на 1000 мл 150 мл ацетонитрила с 850 мл 0,05М
раствора  KH PO ,  pH  которого  доведен добавлением ортофосфорной
            2  4
кислоты  до  значения 2,2 (контроль осуществляют pH-метром), смесь
фильтруют, при необходимости дегазируют. Для приготовления элюента
N  1  в  колбе  на  1000  мл  смешивают 700 мл н-гексана  и 300 мл
ацетона.  Для  приготовления  элюента  N  2  в  колбе  на  1000 мл
смешивают 400 мл н-гексана и 600 мл ацетона.


#### <a id="p100083"></a>2.4.4. Приготовление стандартного и градуировочных растворов


<a id="p100084"></a>    Берут  точную навеску тиабендазола (50 мг), переносят в мерную
колбу  на  50  мл,  растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до
метки   (стандартный   раствор   с   концентрацией   1,0   мг/мл).
Градуировочные  растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 и 2,0
мкг/мл  готовят  методом  последовательного разбавления по объему,
используя  раствор  подвижной  фазы   [смесь   ацетонитрил - 0,05М
КН РО  (pH  2,2) (15:85, по объему)]. Стандартный и градуировочные
  2  4
растворы  можно  хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в
течение   1  месяца.  Для   внесения  в  контрольный  образец  при
определении  полноты  извлечения  используют  стандартный раствор,
разбавленный  ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом
последовательного разбавления.


#### <a id="p100085"></a>2.4.5. Построение градуировочного графика


<a id="p100086"></a>Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация тиабендазола в растворе) в хроматограф вводят по 50 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации тиабендазола в градуировочном растворе (мкг/мл).


#### <a id="p100087"></a>2.4.6. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта


<a id="p100088"></a>В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл смеси гексан-ацетон (70:30, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 50 мл смеси гексан-ацетон (40:60, по объему) и 30 мл смеси гексан-ацетон (70:30, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.


#### <a id="p100089"></a>2.4.7. Проверка хроматографического поведения тиабендазола на колонке с силикагелем


<a id="p100090"></a>В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора тиабендазола с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 5 мл элюента N 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 мл элюента N 1 и также наносят на колонку. Промывают колонку 25 мл элюента N 1, затем 70 мл элюента N 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.4.3)](#p100081) и анализируют на содержание тиабендазола по [п. 2.5.6.](#p100110)
<a id="p100091"></a>Фракции, содержащие тиабендазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.5.6.](#p100110) Рассчитывают содержание тиабендазола в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
<a id="p100092"></a>Примечание: профиль вымывания тиабендазола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.


#### <a id="p100093"></a>2.4.8. Подготовка приборов и средств измерения


<a id="p100094"></a>Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.


### <a id="p100095"></a>2.5. Проведение определения



#### <a id="p100096"></a>2.5.1. Определение тиабендазола в воде


<a id="p100097"></a>Образец предварительно отфильтрованной воды объемом 100 мл подкисляют 1 мл концентрированной НСl, промывают 2 раза по 25 мл гексаном и 2 раза по 25 мл хлористым метиленом. pH раствора доводят 4М NaOH до 10 - 11 (контроль осуществляют рН-метром) и экстрагируют хлористым метиленом трижды по 30 мл. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (3 г), осушитель промывают 10 - 15 мл хлористого метилена. Полученный раствор выпаривают на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.


#### <a id="p100098"></a>2.5.2. Экстракция тиабендазола из проб почвы, зерна и соломы зерновых культур (зерновых колосовых, риса, кукурузы и проса), гороха, зеленой массы и семян подсолнечника


<a id="p100099"></a>Навеску массой 10 г воздушно-сухой почвы или измельченных проб растительного происхождения помещают в коническую колбу емкостью 100 мл и экстрагируют тиабендазол 50 мл 50%-ного водного ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр "красная лента". Экстракцию повторяют дважды порциями по 25 мл. Объединенный экстракт концентрируют на роторном испарителе при температуре 40 °С до объема 50 - 55 мл. Водный раствор доводят дистиллированной водой до объема 100 мл и подкисляют при перемешивании 1 мл концентрированной соляной кислоты. Далее очистку экстракта проводят по [п. 2.5.4.](#p100103)
<a id="p100100"></a>*Примечание.* При необходимости повышения чувствительности определения массу навески можно увеличить до 25 г.


#### <a id="p100101"></a>2.5.3. Экстракция тиабендазола из масла подсолнечника


<a id="p100102"></a>Навеску масла массой 10 г растворяют в 25 мл гексана, раствор помещают в делительную воронку объемом 100 мл и экстрагируют тиабендазол 30 мл 0,1М раствора соляной кислоты. Смесь встряхивают в течение 2 мин., нижний водный слой собирают. Операцию экстракции осуществляют еще дважды. Экстракты объединяют. Далее очистку проводят по [п. 2.5.4.](#p100103)


#### <a id="p100103"></a>2.5.4. Очистка экстракта


<a id="p100104"></a>Водный раствор помещают в делительную воронку объемом 500 мл и при энергичном встряхивании в течение 2 - 3 мин. промывают дважды по 25 мл гексаном (верхний органический слой отбрасывают) и дважды по 25 мл хлористым метиленом (нижний органический слой отбрасывают) <*>. pH раствора доводят 4М NaOH до 10 - 11 (контроль осуществляют рН-метром). Тиабендазол переэкстрагируют трижды хлористым метиленом, порциями по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 - 3 мин. Верхний водный слой отбрасывают. Объединенный экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия (2 г), осушитель промывают 10 - 15 мл хлористого метилена. Полученный раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [пункту 2.5.5](#p100108) <**>.

<a id="p100105"></a>

---

<a id="p100106"></a><*> В случае образования сравнительно стойких эмульсий при очистке экстрактов для сокращения времени расслоения можно добавить в делительную воронку небольшое количество (до 10 мл) этилового спирта.
<a id="p100107"></a><**> В случаях, когда очистка экстрактов контрольных проб дает удовлетворительные результаты, дополнительную очистку на колонке с силикагелем можно исключить.


#### <a id="p100108"></a>2.5.5. Очистка на колонке с силикагелем


<a id="p100109"></a>Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.5.4](#p100103) экстрактов растительных материалов, количественно переносят двумя порциями по 5 мл смеси гексан-ацетон (70:30, по объему) в кондиционированную хроматографическую колонку [(п. 2.4.6).](#p100087) Промывают колонку 25 мл элюента N 1, которые отбрасывают. Тиабендазол элюируют 70 мл элюента N 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор выпаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 - 8 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и 50 (или 20) мкл раствора вводят в жидкостный хроматограф.


#### <a id="p100110"></a>2.5.6. Условия хроматографирования


1. <a id="p100111"></a>Жидкостный хроматограф "Альянс" фирмы "Waters" с УФ-детектором (Waters 2487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.
<a id="p100112"></a>Колонка Symmetry С-18 (250 x 4,6) мм, зернение 5 мкм (Waters, USA).
<a id="p100113"></a>Температура колонки 30 +/- 1 °С.
<a id="p100114"></a>Предколонка Waters Symmetry С-18 для защиты аналитической колонки.
<a id="p100115"></a>    Подвижная  фаза  для  ВЭЖХ:  ацетонитрил - 0,02М раствор Н РО
                                                              3  4
(9:91, по объему).
<a id="p100116"></a>Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
<a id="p100117"></a>Рабочая длина волны: 300 нм.
<a id="p100118"></a>Объем вводимой пробы: 20 мкл.
<a id="p100119"></a>Время удерживания тиабендазола: 9,00 +/- 0,25 мин.
<a id="p100120"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,00 мкг/мл.
2. <a id="p100121"></a>Жидкостный хроматограф "Gold System" фирмы "Beckman", снабженный двойным насосом и УФ-детектором.
<a id="p100122"></a>Колонка Nucleosyl С-18 (250 x 4,6) мм, зернение 5 мкм (Sygma-Aldrich, USA).
<a id="p100123"></a>Предколонка Nucleosyl C-l8 для защиты аналитической колонки.
<a id="p100124"></a>    Подвижная  фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил -  0,05М КН РО  (pH 2,2)
                                                     2  4
(15:85, по объему).
<a id="p100125"></a>Скорость потока элюента: 1 мл/мин.
<a id="p100126"></a>Рабочая длина волны: 300 нм.
<a id="p100127"></a>Объем вводимой пробы: 50 мкл.
<a id="p100128"></a>Время удерживания тиабендазола: 9,25 +/- 0,25 мин.
<a id="p100129"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 2,00 мкг/мл.


#### <a id="p100130"></a>2.5.7. Обработка результатов анализа


<a id="p100131"></a>Количественное определение проводят методом абсолютной градуировки, содержание тиабендазола в образце воды, почвы или проб растительного происхождения (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                           S  x С x V
                            2
<a id="p100132"></a>                       X = ----------,
                             S  x P
                              1

    где:
    S  - площадь пика тиабендазола в стандартном растворе, кв. мм;
     1
    S  - площадь пика тиабендазола в анализируемой пробе, кв. мм;
     2
    V -  объем  пробы,   подготовленной   для  хроматографического
анализа, мл;
    P - навеска анализируемого образца, г;
    C - концентрация стандартного раствора тиабендазола, мкг/мл.
<a id="p100133"></a>Содержание остаточных количеств тиабендазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
<a id="p100134"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор тиабендазола 2 мкг/мл, разбавляют.


## 3. <a id="p100135"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100136"></a>При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и электрооборудования до 400 В.


## 4. <a id="p100137"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100138"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95.](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95) ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.


## 5. <a id="p100139"></a>Разработчики


<a id="p100140"></a>Долженко В.И., Цибульская И.А., Юзихин О.С., Черменская Т.Д. (ВИЗР, Санкт-Петербург).



<a id="p100141"></a>

---